茯神的化學(xué)成分、藥理作用及質(zhì)量控制研究進(jìn)展

★ 戴慧 覃欣怡 端木彥濤 李鳴 王福東 彭東明 丁野 方磊（.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 長(zhǎng)沙 4008；.湖南省藥品檢驗(yàn)研究院 長(zhǎng)沙 4000）

茯神又稱(chēng)伏神，為多孔菌科植物茯苓Poria cocos（Schw.）Wolf菌核中間天然抱有松根（即茯神木）的白色部分。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為茯神具有安神寧心、利水等功效，多用于治療驚悸失眠、健忘、驚癇、小便不利等癥。茯神最早記載于《名醫(yī)別錄》：“療風(fēng)眩、風(fēng)虛、五勞、口干；止驚悸、多恚怒、善忘；開(kāi)心益智，養(yǎng)精神?！薄侗静菥V目》記載：“茯苓，抱根者名伏神，主治偏風(fēng)，口面歪斜，毒風(fēng)，筋攣不語(yǔ)，心神驚掣，虛而健忘?！眰鹘y(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為茯神更擅長(zhǎng)治療心病，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究也發(fā)現(xiàn)其在治療焦慮癥、情緒綜合征、失眠方面有顯著效果。茯神含多糖、蛋白質(zhì)、揮發(fā)油、三萜以及多種微量元素，具有廣泛的藥理活性［1-3］。隨著現(xiàn)代分析技術(shù)的不斷進(jìn)步，對(duì)茯神的研究取得了一定的進(jìn)展，但仍不夠充分系統(tǒng)，尤其是質(zhì)量控制方面的研究比較薄弱。因此，本文通過(guò)對(duì)茯神的化學(xué)成分、藥理作用以及質(zhì)量控制3個(gè)方面展開(kāi)進(jìn)行綜述，旨在其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和深入研究提供參考。

1 化學(xué)成分

化學(xué)成分是研究中藥藥效，衡量中藥質(zhì)量的重要基礎(chǔ)。茯神的化學(xué)成分主要包括多糖類(lèi)、三萜類(lèi)、揮發(fā)性成分以及微量元素等。

1.1 多糖類(lèi)

多糖是一類(lèi)極其重要的生物活性物質(zhì)，具有多種藥用功能，多糖在抗惡性腫瘤、抗病毒、降血糖、抗衰老、愈潰瘍等方面已顯示出廣闊的前景。多糖是茯神的主要組成成分，且堿溶性多糖含量明顯高于水溶性多糖含量，堿溶性多糖含量占多糖總量的70.0%左右，而水溶性多糖含量在多糖總量的含量中占比未超過(guò)0.4%［4］。從茯神內(nèi)提取的多糖統(tǒng)稱(chēng)茯苓聚糖，茯苓聚糖是以β-（1→3）糖苷鍵為主鏈和β-（1→6）糖苷鍵為支鏈結(jié)合而成的葡聚糖，茯苓聚糖具有分子量過(guò)大，不溶于水的特性［5］。此外，茯神中尚含有茯苓冉聚糖和木聚糖等多種多糖［6］。

1.2 三萜類(lèi)

三萜類(lèi)化合物也是茯神的重要組成部分之一，三萜類(lèi)化合物具有抗腫瘤、抗炎、利尿等生物醫(yī)療作用。三萜類(lèi)化合物主要分為羊毛甾烷三萜烯型和3，4-開(kāi)環(huán)-羊毛甾烷三萜烯型兩種。三萜類(lèi)化合物的含量占茯神的0.45%，其中含量最高的為茯苓酸，茯苓酸的結(jié)構(gòu)類(lèi)型屬于羊毛甾烷三萜烷，含量約為0.3%［4］，茯苓酸具有很強(qiáng)的利尿作用。茯神三萜類(lèi)化合物主要成分見(jiàn)表1。

表1 茯神三萜類(lèi)主要成分

1.3 揮發(fā)性成分

中藥揮發(fā)油成分常具有良好的抗菌活性［7］。由于茯神生長(zhǎng)于松樹(shù)之上，而松樹(shù)具有不易被其他常見(jiàn)真菌感染的特性，因此王軍民等［8］推測(cè)松樹(shù)被茯苓代謝后產(chǎn)生的揮發(fā)性成分對(duì)其它常見(jiàn)真菌可能具有明顯的拮抗作用。研究人員采用優(yōu)化二氧化碳超臨界最佳提取工藝提取茯神的揮發(fā)性成分，并對(duì)提取到的揮發(fā)性成分進(jìn)行了主成分分析。在茯神揮發(fā)油樣品中共檢測(cè)出21個(gè)物質(zhì)種類(lèi)，通過(guò)NIST14質(zhì)譜庫(kù)對(duì)這些物質(zhì)的質(zhì)譜進(jìn)行檢索，鑒定了其中17個(gè)含量較高的主要化合物，主要化合物的名稱(chēng)及相對(duì)含量見(jiàn)表2，主要化合物占揮發(fā)油總量的84.50%。其中含量最高的為豆甾-3，5-二烯，占揮發(fā)油總含量的42.35%。

表2 茯神揮發(fā)性主要成分

1.4 微量元素

現(xiàn)代研究表明，微量元素不僅可以促進(jìn)中藥材藥效的發(fā)揮，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，預(yù)防疾病，還可以影響藥材的生長(zhǎng)和活性成分的積累［9］。張彩霞等［10］對(duì)茯苓類(lèi)藥材微量元素的研究是從藥理學(xué)角度出發(fā)，運(yùn)用火焰原子吸收法對(duì)真菌茯苓不同藥用部位的微量元素（Ca、Cu、Mg、Zn、Fe）的含量進(jìn)行測(cè)定，闡明了微量元素與中藥歸經(jīng)理論和藥效的關(guān)系，提出了微量元素含量的結(jié)果也可作為質(zhì)量控制的指標(biāo)。其實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同部位的茯苓類(lèi)藥材含有的微量元素總量存在一定的差異：茯苓皮＞茯神＞赤茯苓＞白茯苓；每個(gè)部位的茯苓類(lèi)藥材的不同種類(lèi)微量元素的含量也存在差異，赤茯苓為Fe＞Ca＞Zn＞Mg＞Cu，白 茯 苓 為 Mg＞Ca＞Cu＞Zn＞Fe，茯神和茯苓皮均為 Fe＞Ca＞Mg＞Zn＞Cu ；白茯苓中微量元素Mg的含量最高，赤茯苓、茯神、茯苓皮中微量元素Fe的含量最高。

1.5 其他

茯神中還含有脂肪酸類(lèi)化合物、二糖類(lèi)化合物、甾醇類(lèi)化合物、蛋白質(zhì)、卵磷脂、腺嘌呤、組氨酸、膽堿、酶類(lèi)化合物等［11-13］。林琳等［14］運(yùn)用NMR和MS等波譜法分析鑒定出茯神中含有4種新型化合物，分別為麥角甾醇過(guò)氧化物、5-（4-羥苯基）二氫呋喃-2（3H）-酮、β-D-Glu（3-1）α-D-Glu、α-亞麻酸。

2 藥理作用

2.1 寧心安神作用

清代著名醫(yī)家張璐編著的《本經(jīng)逢原》中對(duì)茯神治療心病的療效提出了極高的評(píng)價(jià)：“后人治心病必用茯神，故潔古云風(fēng)眩心虛非茯神不能除”。由此可見(jiàn)，在古代治療心悸中茯神所具有的重要臨床應(yīng)用價(jià)值，且至今以茯神為主藥的系列經(jīng)方（安神定志丸、茯神湯、養(yǎng)心湯、朱雀丸、歸脾 湯、加味四七湯、茯神散等）仍廣為使用［15］。現(xiàn)代藥理研究證實(shí)茯神具有鎮(zhèn)靜安神的作用，可以延長(zhǎng)患者的睡眠時(shí)間，因此臨床常用于治療失眠，且對(duì)大多數(shù)失眠的患者均有很好的療效，張彤瑜等［16］統(tǒng)計(jì)在臨床治療失眠癥的過(guò)程中，茯神的使用頻率達(dá)到57.64%。

游秋云等［17］在小鼠實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)茯神水煎液可明顯增加戊巴比妥鈉閾下劑量的動(dòng)物入睡率，具有協(xié)同戊巴比妥鈉的中樞抑制作用，從而進(jìn)一步驗(yàn)證了茯神在臨床上的鎮(zhèn)靜安神療效，且安神作用強(qiáng)于茯苓。茯神水煎液還具有一定的抗驚厥作用，茯苓總?cè)颇軐?duì)抗電休克及戊四唑驚厥發(fā)作，其機(jī)制與降低海馬區(qū)Asp和Glu含量有關(guān)，海馬區(qū)Asp和Glu含量降低可以起到鎮(zhèn)靜興奮性神經(jīng)元和抗驚厥等作用［18-19］。

2.2 利水消腫

茯神也具有利水消腫的療效，《藥性論》中關(guān)于茯神的記載為：“主心下急痛堅(jiān)滿，小腸不利?！薄侗静菰傩隆分嘘P(guān)于茯神的記載為：“治心虛氣短，健脾利濕?！币虼?，茯神也被廣泛應(yīng)用于治療小便不暢、水腫脹滿等癥狀。研究人員發(fā)現(xiàn)茯神中含量較高的羊毛甾烷三萜烷類(lèi)化合物茯苓酸，在體外實(shí)驗(yàn)中能與大鼠的腎胞漿膜醛固酮受體相結(jié)合，在體內(nèi)能夠起到拮抗醛固酮活性的作用［20］。另外，田婷等［21］提出茯神中四環(huán)三萜類(lèi)化學(xué)成分（茯苓酸、豬苓酸C、去氫土莫酸、3-表去氫土莫酸等）與醛固酮結(jié)構(gòu)相類(lèi)似，能夠抑制Na+、K+的交換，起到排Na+保K+的作用。

2.3 抗腫瘤作用

茯神具有抗腫瘤的作用，研究表明茯神主要通過(guò)多糖以及三萜類(lèi)成分抑制腫瘤生長(zhǎng)，增強(qiáng)機(jī)體免疫力。研究證實(shí)，未經(jīng)修飾的多糖類(lèi)化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率僅為2%左右，經(jīng)修飾后的茯神多糖如硫酸酯化茯苓多糖、羧甲基茯苓多糖等則對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用［22］。其主要機(jī)制是：經(jīng)修飾后的茯苓多糖可促進(jìn)IgA、IgG和IgM等外周血免疫球蛋白的生物合成，抑制腫瘤細(xì)胞的DNA、RNA、蛋白質(zhì)的生物合成；也可對(duì)腫瘤細(xì)胞膜的產(chǎn)生明顯的破壞作用，通過(guò)提高SOD酶活性的方式來(lái)降低腫瘤細(xì)胞氧自由基的毒害。茯神中含量最高的三萜類(lèi)化合物茯苓酸對(duì)結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌等腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲都有顯著抑制作用［23］。茯苓酸能抑制DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I、II，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，且對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞有顯著細(xì)胞毒性，并能破壞線粒體膜電位，減少花生四烯酸代謝，起腫瘤預(yù)防作用［24］。

2.4 其他

茯神具有抗抑郁作用，其主要機(jī)制可能是通過(guò)上調(diào)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）、神經(jīng)微絲輕鏈蛋白（NF-L）和突觸囊泡蛋白（SYP）的表達(dá)，保護(hù)海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元，拮抗皮質(zhì)酮誘導(dǎo)的海馬功能重塑性損傷的作用［25-26］。王軍民等［8］研究表明，茯神的揮發(fā)性成分具有顯著的抗菌作用，其作用于腐皮鐮孢菌時(shí)表現(xiàn)出低濃度促進(jìn)高濃度抑制，抑制作用的出現(xiàn)可能與茯神中所含揮發(fā)性成分松香酸等有關(guān)。茯神具有降血糖的作用，茯神三萜化合物可以增強(qiáng)胰島素的分化誘導(dǎo)活性，因此茯神湯方常用于治療糖尿病，且療效佳［27］。另外茯神還具有抗衰老、美白的功效，尚靖等［28］在研究中發(fā)現(xiàn)，將茯神醇提液涂布在豚鼠的表皮細(xì)胞上，能顯著降低皮膚酪氨酸酶mRNA的表達(dá)水平，表明茯神醇提取液可能是通過(guò)提高皮膚中羥脯氨酸的含量來(lái)延緩皮膚衰老。茯神還可以使酪氨酸酶活性降低，以此來(lái)減少黑色素生成量，因此茯神還具有增白作用。

3 質(zhì)量控制

茯神作為傳統(tǒng)的中藥材，在現(xiàn)代應(yīng)用中日趨廣泛，但在歷版《中國(guó)藥典》中均未收載此藥材，對(duì)茯神質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的相關(guān)文獻(xiàn)也較少。根據(jù)中藥鑒定和質(zhì)量控制的一般程序，茯神及其炮制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容主要包括性狀鑒別、理化鑒別、顯微鑒別、水分、灰分、浸出物限量等方面。

3.1 性狀鑒別

根據(jù)文獻(xiàn)記錄，正品茯神呈不規(guī)則方塊狀，長(zhǎng)寬各4～5 cm，厚度0.4～0.6 mm，中間含一根切斷的類(lèi)圓柱形木心（茯神木），木心直徑不超過(guò)1.5 cm，表面類(lèi)白色，少數(shù)呈淡紅色，斷面顆粒性，體重，質(zhì)堅(jiān)實(shí)，無(wú)特殊氣味，味淡，嚼之粘牙［29-32］。目前發(fā)現(xiàn)的偽品茯神主要有3種（表格中簡(jiǎn)稱(chēng)偽品A、B、C），正品茯神和偽品茯神可從形狀、顏色、斷面、質(zhì)地等方面區(qū)分。見(jiàn)表3。

表3 正、偽品茯神的性狀鑒別

3.2 顯微鑒別

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，正品茯神粉末的水裝片在顯微鏡下可觀察到許多不規(guī)則的無(wú)色團(tuán)塊，主要呈顆粒狀和分枝狀，易被水合氯醛溶化，還可見(jiàn)無(wú)色細(xì)長(zhǎng)的菌絲，有分枝。所有偽品飲片粉末除含有正品粉末的部分特征外，還存在以下幾種情況：（1）視野中可見(jiàn)灰黑色團(tuán)塊狀物質(zhì)，且遇水合氯醛不溶化；（2）水合氯醛透化后可見(jiàn)樹(shù)脂道、成群的管胞和成束的木纖維；（3）可見(jiàn)較多的淀粉粒，主要為單粒，少數(shù)為復(fù)粒［30-31］。

3.3 理化鑒別

水試驗(yàn)：將正品和各偽品進(jìn)行去除木心的操作，再研磨成粉末，撒在水面上，正品粉末全部漂浮于水面上，并逐漸膨脹；各偽品粉末部分浮于水面，有碎屑和雜質(zhì)沉于水下，甚至崩解渾濁。

碘試驗(yàn)：在正品和各偽品飲片的塊片上滴加碘試劑，除用淀粉壓制的“茯神”會(huì)顯藍(lán)色或藍(lán)紫色外，其余樣品均無(wú)反應(yīng)。由此可鑒別用淀粉制成的茯神類(lèi)藥材。

3.4 茯神藥材水分、灰分、浸出物相關(guān)研究

水分、灰分、浸出物限量為中藥材儲(chǔ)存和優(yōu)劣辨別的重要質(zhì)控指標(biāo)?，F(xiàn)行藥典未收載茯神，各省中藥材標(biāo)準(zhǔn)、中藥飲片炮制規(guī)范也未對(duì)茯神藥材的水分、灰分、浸出物含量做出規(guī)定。聶磊［4］對(duì)不同來(lái)源的十批茯神藥材進(jìn)行水分、灰分、浸出物的測(cè)定，測(cè)出茯神的水分為11.56%～16.77%，總灰分為0.26%～0.60%，醇浸出物為4.45%～6.59%，水浸出物為3.46%～4.46%；茯神藥材中水分、灰分、浸出物含量與茯苓相當(dāng)，且均滿足藥典中茯苓項(xiàng)下相關(guān)要求。

3.5 茯神的炮制

根據(jù)《中藥大辭典》《全國(guó)中藥飲片炮制規(guī)范輯要》（2016年版），茯神的炮制主要有原藥材通過(guò)凈切后直接入藥以及朱茯神兩種方法。見(jiàn)表4。

表4 茯神的兩種炮制品及其炮制方法

3.6 茯神的炮制規(guī)格

現(xiàn)代商品茯神的炮制規(guī)格一般為：片厚6～9 mm，片長(zhǎng) 70～80 mm，寬60～70 mm，個(gè)重 30～50 g，而茯神在臨床應(yīng)用中的常用量只有6～18 g，商品規(guī)格超出了茯神的臨床用量，以至于在實(shí)際應(yīng)用中需要切分為小塊，導(dǎo)致有些小塊未含茯神木。陳桂英［33］通過(guò)薄層層析法分析比較茯神和茯苓所含成分的差異，以探討茯神適合于臨床的炮制規(guī)格，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，將每個(gè)茯神塊炮制品的重量控制在6 g左右（即最小常用量），且抱有茯神木，可以保證茯神的有效性。

朱茯神是茯神與朱砂共同炮制的結(jié)果，具有鎮(zhèn)靜安神、清熱解毒、利水消腫的效果。近年來(lái)，由于用藥安全性受到了廣泛關(guān)注，朱砂作為一種含汞的礦物藥，在炮制過(guò)程中所用含量不能忽視，以避免引起汞中毒的問(wèn)題。現(xiàn)行《中國(guó)藥典》中規(guī)定朱砂日用量為0.1～0.5 g，不宜過(guò)量，且不能少量久服。目前多省市（河北、上海、安徽、湖北等）中藥飲片炮制規(guī)范中朱茯神一般是以茯神∶朱砂=50∶1的比例進(jìn)行炮制，以茯神日用最大量18 g，朱砂用量為0.36 g，在安全范圍之類(lèi)；《重慶中藥飲片炮制規(guī)范及標(biāo)準(zhǔn)》中以茯神∶朱砂=25∶1進(jìn)行炮制，若以茯神日用最大量18 g，朱砂用量為0.72 g，則超出用藥安全范圍。研究者以茯神∶朱砂=100∶3通過(guò)正交試驗(yàn)考察朱茯神炮制時(shí)的加水倍數(shù)、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)三個(gè)因素對(duì)其煎煮工藝的影響，結(jié)果表明在煎煮液中一般不存在汞含量超標(biāo)的情況［34-36］。因此，在炮制過(guò)程中應(yīng)注重茯神與朱砂的比例，在臨床用藥時(shí)根據(jù)炮制方法適當(dāng)增減用量，且不能長(zhǎng)期服用，避免含汞藥材導(dǎo)致重金屬在體內(nèi)積蓄。

4 小結(jié)與展望

近年來(lái)，茯神寧心安神的作用成為了研究的熱點(diǎn)，在臨床上的應(yīng)用量日趨增大，同時(shí)也導(dǎo)致市場(chǎng)上出現(xiàn)低質(zhì)量的藥材摻雜。現(xiàn)行《中國(guó)藥典》沒(méi)有關(guān)于茯神的記載，而其他地方標(biāo)準(zhǔn)一般僅收錄茯神的性狀鑒別、顯微鑒定以及理化鑒別，缺少水分、灰分、浸出物限量，缺少指標(biāo)成分或量化控制標(biāo)準(zhǔn)；盡管資料顯示茯神多糖、三萜類(lèi)化合物、脂肪酸等活性物質(zhì)具有一定藥理作用，但具體藥效成分仍不明確。為了辨識(shí)茯神藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣，規(guī)范其入藥標(biāo)準(zhǔn)，亟待進(jìn)一步完善和修訂茯神藥材及炮制質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

基于茯神的研究現(xiàn)狀，為建立系統(tǒng)的質(zhì)量控制體系可從以下幾個(gè)方面完善：（1）繼續(xù)分離鑒定茯神所含新的化學(xué)成分，研究茯神的藥理作用、藥代動(dòng)力學(xué)機(jī)制，明確構(gòu)效關(guān)系，為進(jìn)一步對(duì)化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾提供科學(xué)依據(jù)；（2）在質(zhì)量控制方面，可采用產(chǎn)地加工一體化方法從源頭控制，規(guī)范茯神的鑒別項(xiàng)目，增加水分、灰分、浸出物、含量測(cè)定等檢查項(xiàng)，目前茯神藥效成分尚未完全闡明，可以構(gòu)建關(guān)于茯神的指紋特征圖譜，為判定其真?zhèn)蝺?yōu)劣提供參考；（3）研究除朱茯神之外，關(guān)于茯神新的炮制方法，能夠增強(qiáng)茯神的療效，消除或者降低其不良反應(yīng)，達(dá)到臨床用藥高效安全的目的。

中藥飲片國(guó)際化是其發(fā)展的必然，確保中藥飲片的質(zhì)量和藥效，是打開(kāi)和拓寬國(guó)際市場(chǎng)的關(guān)鍵，隨著中藥化學(xué)、中藥分析、藥理學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)等相關(guān)學(xué)科的交叉融合以及現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，中藥飲片的炮制規(guī)范和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化趨勢(shì)會(huì)更加清晰。