加強(qiáng)質(zhì)量管理 提升非洲豬瘟病毒檢測能力

宋曉昕

（遼寧省東港海關(guān)綜合技術(shù)服務(wù)中心 118300）

養(yǎng)豬業(yè)作為促進(jìn)農(nóng)村經(jīng)濟(jì)增長重要支柱，非洲豬瘟是影響?zhàn)B豬業(yè)健康發(fā)展的關(guān)鍵性因素，目前主要采用非洲豬瘟病毒核酸檢測方式來進(jìn)行防控，礙于檢測強(qiáng)度不斷提升，實(shí)驗(yàn)室檢測能力明顯不足，因此，提升實(shí)驗(yàn)室非洲豬瘟病毒檢測能力是各相關(guān)人員需要考慮的問題。

1 非洲豬瘟病毒檢測的必要性

一旦豬染非洲豬瘟病毒死亡率100%。對養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展有極大的影響，所造成的經(jīng)濟(jì)損失非常嚴(yán)重。非洲豬瘟病毒抗外界環(huán)境因素干擾能力強(qiáng)，傳播途徑多樣化，可進(jìn)行糞便傳播、運(yùn)輸工具傳播、人員間接觸傳播等，豬受到非洲豬瘟病毒侵染，產(chǎn)生有效抗體概率極低，現(xiàn)階段尚未研制出有效的疫苗，基于此，非洲豬瘟病毒核酸檢測逐漸成為目前對非洲豬瘟進(jìn)行防控的必要手段與有效舉措[1]。

鑒于非洲豬瘟對養(yǎng)豬業(yè)極大的影響，非洲豬瘟病毒核酸檢測越來越受重視，檢測方法多樣化，如熒光PCR 檢測方法，因具有較高敏感性、穩(wěn)定性及高效性被廣泛運(yùn)用于各獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室、養(yǎng)豬場、第三方檢測機(jī)構(gòu)中。但隨著非洲豬瘟病毒檢測強(qiáng)度不斷提升，促使目前實(shí)驗(yàn)室陸續(xù)出現(xiàn)檢測結(jié)果不穩(wěn)定等情況，在一定程度上阻礙了實(shí)驗(yàn)室正常非洲豬瘟病毒檢測工作開展，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室非洲豬瘟病毒檢測能力下降。因此，下面將基于全面質(zhì)量管理對實(shí)驗(yàn)室非洲豬瘟病毒檢測能力提升路徑進(jìn)行分析與闡述，實(shí)現(xiàn)全面提高實(shí)驗(yàn)室檢測水平。

2 全面加強(qiáng)質(zhì)量管理，有效提升實(shí)驗(yàn)室非洲豬瘟病毒檢測能力

2.1 人員方面

從目前實(shí)驗(yàn)室非洲豬瘟病毒檢查工作情況來看，人員是導(dǎo)致非洲豬瘟病毒檢測結(jié)果不準(zhǔn)確的關(guān)鍵因素之一，在實(shí)際非洲豬瘟病毒檢測過程中，如樣品采集、樣品運(yùn)輸、樣品預(yù)處理及核酸提取等多個(gè)環(huán)節(jié)均需要由人工操作完成，因此，檢測人員是否具備高水平專業(yè)能力與職業(yè)素養(yǎng)對實(shí)驗(yàn)室非洲豬瘟病毒檢測能力有極大影響。一旦其中某一環(huán)節(jié)由于人為誤操作而出現(xiàn)失誤情況，極有可能造成檢測結(jié)果失效，為避免此種情況，確保實(shí)驗(yàn)室檢測人員較高工作水準(zhǔn)非常必要。如何規(guī)范檢測人員行為可參考以下方面。

首先，增強(qiáng)檢驗(yàn)操作規(guī)范性。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)檢測人員需要明確意識到保證檢驗(yàn)操作規(guī)范的重要性，了解操作不規(guī)范對非洲豬瘟病毒檢測工作造成的影響，嚴(yán)格要求個(gè)人操作行為，避免實(shí)驗(yàn)室污染問題；其次，踐行相關(guān)檢測管理制度。以制度方式來加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室非洲豬瘟病毒檢測各個(gè)環(huán)節(jié)所涉及的人員管理，并要保證非洲豬瘟病毒核酸檢測崗位獨(dú)立性，并配置專管人員，嚴(yán)格遵守檢測流程，詳細(xì)確認(rèn)該崗位人員檢測技能是否達(dá)到規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)立崗位及人員考核機(jī)制，定期或不定期對檢測人員進(jìn)行考核，嚴(yán)禁考核不合格人員參與實(shí)驗(yàn)室非洲豬瘟病毒檢測工作，以此來達(dá)到全面提升實(shí)驗(yàn)室檢測人員工作水平的目的；最后，注重實(shí)驗(yàn)室采樣與檢測兩個(gè)崗位人員的專業(yè)培訓(xùn)，主要培訓(xùn)與非洲豬瘟病毒檢測相關(guān)內(nèi)容，幫助相關(guān)人員不斷提升檢測能力與，使其更好地應(yīng)對日常檢測工作中出現(xiàn)的各種新問題、新情況。

此外，為了確保實(shí)驗(yàn)室檢測人員各項(xiàng)能力強(qiáng)化效果，可選擇定期開展檢測能力對比方式來掌握不同檢測人員的實(shí)際水平，便于確認(rèn)工作中潛在的不足，及時(shí)進(jìn)行處理與改正，有效提升實(shí)驗(yàn)室整體檢測水平[2]。

2.2 儀器設(shè)備方面

熒光PCR 儀、組織勻漿機(jī)、離心機(jī)、移液器、生物安全柜等均是實(shí)驗(yàn)室非洲豬瘟病毒檢測過程中常常使用的儀器設(shè)備，通常情況下，對實(shí)驗(yàn)樣品進(jìn)行處理和加樣時(shí)，若儀器設(shè)備精度不高及存在硬軟件問題，極有可能發(fā)生實(shí)驗(yàn)室污染或交叉感染等問題，因此，實(shí)驗(yàn)室管理人員要特別重視使用過程中的儀器設(shè)備是否存在問題，一旦發(fā)現(xiàn)問題應(yīng)及時(shí)處理，避免實(shí)驗(yàn)室非洲豬瘟病毒檢測工作受到影響。常見的儀器設(shè)備問題主要表現(xiàn)為以下幾個(gè)方面。

（1）熒光PCR 儀精確性不足。對實(shí)驗(yàn)室非洲豬瘟病毒檢測的關(guān)鍵儀器的精度及儀器元件精細(xì)度有嚴(yán)格要求，在實(shí)際使用過程中，常常出現(xiàn)各種問題，促使熒光PCR 儀精確性不足。如熒光PCR 儀濾鏡表面污漬清理不干凈，造成光路強(qiáng)度降低及燈源實(shí)際效果不明顯，該情況屬于硬件問題；吸光值未達(dá)到檢測標(biāo)準(zhǔn)、擴(kuò)增曲線適用性不強(qiáng)及樣品顯示結(jié)果呈陰性，該情況屬于軟件問題。基于此，為了減少上述問題出現(xiàn)，確保熒光PCR 儀的精確性，實(shí)驗(yàn)室管理人員可根據(jù)行業(yè)現(xiàn)行《聚合酶鏈反應(yīng)分析儀校準(zhǔn)規(guī)范》 相關(guān)內(nèi)容對熒光PCR 儀采取定期校準(zhǔn)，使其讓熒光PCR 儀硬件始終保持良好狀態(tài)。針對熒光PCR 儀軟件問題，在正式檢測前，要求檢測人員再次確認(rèn)循環(huán)段和恒溫段兩處位置起始溫度是否正常，所設(shè)置的熒光信號采集點(diǎn)是否準(zhǔn)確，掌控影響熒光PCR 儀精確性的軟件因素，逐項(xiàng)檢查，從根源上解決熒光PCR 儀潛在的軟件問題。

（2）生物安全柜、離心機(jī)及核酸提取儀操作不當(dāng)。在實(shí)驗(yàn)室非洲豬瘟病毒檢測工作中，若設(shè)備操作不當(dāng)極易形成氣溶膠，致使樣品間出現(xiàn)交叉污染情況；待氣溶膠污染發(fā)生后，檢測人員需要讓實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部保持良好通風(fēng)效果，借助相關(guān)工具提升通風(fēng)頻率與強(qiáng)度，同時(shí)利用紫外線燈進(jìn)行照射，一般情況下，照射時(shí)間維持在2h 以上，使用一定濃度的84 消毒液對污染處進(jìn)行消毒，充分降解機(jī)體或腔體中潛在的氣溶膠，防止氣溶膠二次污染[3]。

（3）移液器腔體交叉污染。使用移液器時(shí)，借助移液器中彈簧裝置對所需液體進(jìn)行提取，一旦接觸到陽性樣品，極易導(dǎo)致在腔體內(nèi)形成氣溶膠，此時(shí)移液器提取其他樣品會發(fā)生交叉污染?；诖耍瑱z測人員應(yīng)對移液器進(jìn)行定期核查，確認(rèn)移液器是否存在交叉污染問題，使用84 消毒器對其消毒，再利用樣品對其進(jìn)行測試，確認(rèn)消毒后的移液器不存在交叉污染問題。

2.3 物料方面

由于實(shí)驗(yàn)室物料選擇不當(dāng)，導(dǎo)致非洲豬瘟病毒檢測結(jié)果出現(xiàn)“假陽性”“假陰性”情況，針對此方面問題可參考以下內(nèi)容。

（1）合理采集與處理樣品。雖然樣品采集屬于檢測前期處理，但樣品采集是否達(dá)到既定標(biāo)準(zhǔn)直接關(guān)系著后續(xù)實(shí)驗(yàn)室非洲豬瘟病毒檢測工作的開展。非洲豬瘟病檢測樣品較為多樣，糞便、血漿、肝臟等均可作為采集樣品。需要嚴(yán)格遵守檢測規(guī)范進(jìn)行樣品采集，如采集豬血時(shí)，切忌不要使用肝素，否則會導(dǎo)致熒光PCR 產(chǎn)生強(qiáng)烈的抑制反應(yīng)，出現(xiàn)檢測結(jié)果“假陰性”，可選用EDTA 鈉鹽作為抗凝劑，采集完成的樣品需存放在冷凍柜中，防止唾液中酶對非洲豬瘟病毒核酸造成破壞。

（2）選擇合適的檢測耗材。吸頭、離心管、熒光PCR 管均是實(shí)驗(yàn)室非洲豬瘟病毒檢測中消耗過多的物料，由于材質(zhì)差異，其質(zhì)量反應(yīng)也各不相同，其中若吸頭材質(zhì)不達(dá)標(biāo)，存在熒光PCR 抑制劑，會影響檢測結(jié)果。實(shí)驗(yàn)室需要充分注意此方面問題，在條件允許的前提下，選擇一次性耗材，既能保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，又能有效避免交叉污染問題。

3 結(jié)束語

綜上所述，基于全面質(zhì)量管理，從實(shí)驗(yàn)室人員、設(shè)備、物料等方面著手，使其達(dá)到全面提升實(shí)驗(yàn)室非洲豬瘟病毒檢測能力的目的，與此同時(shí)做好實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部環(huán)境管理工作，保持室內(nèi)通風(fēng)良好，并要保證預(yù)防交叉污染各項(xiàng)舉措落實(shí)到位，增強(qiáng)檢查人員專業(yè)水平，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確性，為非洲豬瘟防控提供保障。