小反芻獸疫診斷技術(shù)及防治

牟國(guó)月

（青海省海西州都蘭縣畜牧獸醫(yī)站 816199）

小反芻獸疫是小反芻動(dòng)物疾病病毒引起的，其主要特征為急性、發(fā)熱、傳染性。而且該類疫病的發(fā)病率在90%左右，死亡率高達(dá)80%。由于該疫病與牛瘟的臨床癥狀較為相似，因此也被稱為偽牛瘟。發(fā)病時(shí)，動(dòng)物出現(xiàn)體溫異常升高，眼睛、鼻腔、口腔分泌物增多，腹瀉、肺炎、口腔糜爛等癥狀，對(duì)養(yǎng)羊業(yè)造成極大危害。

1 小反芻獸疫概述

1.1 臨床癥狀

一般情況下，小反芻獸疫具有一定的潛伏期，即3～5d 的時(shí)間，最長(zhǎng)不超過(guò)21d。往往突然發(fā)病，體溫急劇升高，其體溫連續(xù)5d 維持在41℃，而且在此期間食欲下降，進(jìn)食量較少，甚至停止進(jìn)食，受到感染的動(dòng)物被毛較亂，口鼻干燥，而且分泌物逐漸由流水樣轉(zhuǎn)為黏液物質(zhì)，難以呼吸，呼吸氣體較為惡臭；感染動(dòng)物空腔內(nèi)黏膜出現(xiàn)充血癥狀，兩頰黏膜出現(xiàn)大面積的破損，而且流出很多涎液，并且出現(xiàn)糜爛、出血癥狀，甚至發(fā)生壞死性病灶，轉(zhuǎn)而對(duì)下唇、小齒齦產(chǎn)生感染[1]。發(fā)病后期會(huì)出現(xiàn)血水樣腹瀉、脫水、消瘦等癥狀，體溫開(kāi)始下降；發(fā)生伴發(fā)性肺炎、咳嗽。一般情況下幼小動(dòng)物發(fā)病率較高，而且該獸疫類型的死亡率相對(duì)較高。

1.2 病理變化

在檢剖過(guò)程中發(fā)現(xiàn)感染動(dòng)物出現(xiàn)結(jié)膜炎、壞死性口炎、鼻腔黏膜腐爛；網(wǎng)胃、瘤胃出現(xiàn)潰瘍病變，盲腸、結(jié)腸出現(xiàn)條狀出血，肺壞死，淋巴結(jié)腫大，脾壞死。

1.3 流行病學(xué)特性

感染源主要是綿陽(yáng)和山羊，癥狀出現(xiàn)7d 后，動(dòng)物體液、糞便中能檢測(cè)出很多病毒，傳染性較強(qiáng)；主要通過(guò)直接接觸傳染，呼吸系統(tǒng)是主要感染途徑，還可以通過(guò)精液、胚胎、哺乳進(jìn)行傳播；山羊和綿陽(yáng)是主要的易感動(dòng)物，牛、豬是亞臨床感染，不具備傳播性[2]。

2 小反芻獸疫診斷技術(shù)

一般情況下，對(duì)小反芻獸疫的診斷包含常規(guī)診斷和實(shí)驗(yàn)室診斷兩種。常規(guī)診斷主要是結(jié)合發(fā)病動(dòng)物的臨床癥狀、病理變化、流行病學(xué)特點(diǎn)等對(duì)其實(shí)施初步判斷，然后開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室診斷。其中實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)主要包含以下幾種方式。

2.1 病原學(xué)診斷

（1）AGID，該種診斷技術(shù)主要是在高免綿陽(yáng)身上獲得抗血清，并通過(guò)病體的腸黏膜、淋巴結(jié)等組織結(jié)構(gòu)，制作標(biāo)準(zhǔn)性的PPRV 抗原。在瓊脂凝膠催化作用下，并創(chuàng)建合適的溫度環(huán)境，促進(jìn)可溶性PPR 抗原與抗體的充分反應(yīng)，如果出現(xiàn)沉淀線，并與陽(yáng)性對(duì)照抗原一致，可以對(duì)其進(jìn)行陽(yáng)性判斷[3]。PPR抗原較為溫和，含毒性較少，難以對(duì)病毒進(jìn)行精準(zhǔn)檢測(cè)。

（2）捕獲酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，該種技術(shù)主要通過(guò)不同類型的抗N 蛋白單克隆抗體，可以對(duì)PPRV 在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行鑒別診斷。部分專家學(xué)者研發(fā)了雙抗體夾心ELISA 檢測(cè)方法，可以直接處理羊糞便，優(yōu)化檢測(cè)流程，該種方式具有特異性、敏感性等優(yōu)勢(shì)，并能快速獲得檢測(cè)結(jié)果，但檢測(cè)費(fèi)用較高。

（3）CIEP，該技術(shù)可以以最快的速度對(duì)病毒抗原進(jìn)行檢測(cè)，其主要檢測(cè)設(shè)備為水平電泳槽，并在其內(nèi)放置凝膠，添加0.1mol/L 的醋酸巴比妥緩沖液，在凝膠每對(duì)孔作用下實(shí)現(xiàn)正極加血清，負(fù)極加抗原，電泳60min 后可以創(chuàng)建強(qiáng)光環(huán)境，對(duì)每對(duì)孔進(jìn)行觀察，如果其出現(xiàn)2、3 條沉淀線，可以判斷其為陽(yáng)性反應(yīng)，該種技術(shù)方法敏感性更強(qiáng)，且檢測(cè)速度更快，但對(duì)PPRV 與牛瘟難以有效甄別[4]。

（4）病毒分離，該種技術(shù)主要是通過(guò)在田間獲得試驗(yàn)樣品，并展開(kāi)快速診斷的方法。PPRV 能使用羔羊原代腎細(xì)胞開(kāi)展分離操作，并利用可疑病科接種單層細(xì)胞培養(yǎng)物，動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞病變，如果樣品中存在PPRV，在5d 內(nèi)就會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞病變現(xiàn)象，主要表現(xiàn)為細(xì)胞逐漸圓化，并開(kāi)始聚集，逐漸匯聚成核環(huán)形排列、鐘盤(pán)外形的合胞體。

（5）反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。該種方式也是分子生物學(xué)檢測(cè)方法之一，是小反芻獸疫診斷技術(shù)最常用的方法。很多專家學(xué)者對(duì)其進(jìn)行研究，獲得較好的檢測(cè)結(jié)果。該種技術(shù)方法特異性較好，且具有較強(qiáng)的靈敏性，檢測(cè)速度較快，但容易出現(xiàn)漏檢。

2.2 血清學(xué)診斷

（1）中和試驗(yàn)。該種方式在國(guó)家上較為通用，主要是利用羔羊原代腎細(xì)胞或者是Vero 細(xì)胞，并將其放置在轉(zhuǎn)管內(nèi)開(kāi)展試驗(yàn)操作。在此過(guò)程中，需要對(duì)滅活待檢血清進(jìn)行倍比稀釋，并加入103TCID50/ml 病毒懸液，創(chuàng)設(shè)37℃的溫度環(huán)境，對(duì)其持續(xù)孵育60min，在各個(gè)梯度內(nèi)提取0.2ml 混合物，并將其放置在轉(zhuǎn)子里面，并在箱內(nèi)添加1ml 的Vero 細(xì)胞懸液，將其倒放，持續(xù)3d 時(shí)間，如果培養(yǎng)管中出現(xiàn)CPE，要對(duì)其進(jìn)行剔除，并更換維持液，持續(xù)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)7d[5]。如果檢測(cè)結(jié)果中出現(xiàn)1/8的稀釋血清抗體，可以將其判斷為陽(yáng)性。

（2）ELISA，該種方式主要包含競(jìng)爭(zhēng)ELISA、間接ELISA。在實(shí)際應(yīng)用中，檢測(cè)快速，質(zhì)量較高。在PPR 流行病學(xué)檢測(cè)中得到廣泛應(yīng)用，同時(shí)該種方式還可以用于免疫效果評(píng)估等。

3 小反芻獸疫防治措施

3.1 強(qiáng)化飼養(yǎng)管理

強(qiáng)化檢疫管理，嚴(yán)禁從疫區(qū)進(jìn)口易感染動(dòng)物，避免從該區(qū)域進(jìn)口動(dòng)物胚胎、蛋類等動(dòng)物制品，對(duì)引入的動(dòng)物進(jìn)行有效隔離，采取科學(xué)的消毒措施。要進(jìn)一步提升飼養(yǎng)管理質(zhì)量，保障養(yǎng)殖場(chǎng)的安全性，在獸疫指導(dǎo)下，制定完善的防疫機(jī)制，強(qiáng)化防疫管理效果。對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)相關(guān)設(shè)施設(shè)備進(jìn)行清洗消毒，避免交叉感染。提升動(dòng)物飼養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)水平，保障飼養(yǎng)環(huán)境溫度、濕度和通風(fēng)條件適宜。對(duì)動(dòng)物生存場(chǎng)所進(jìn)行定期消毒。

3.2 加強(qiáng)免疫管理

該種疾病危害性較大，難以控制，死亡率較高，造成極大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，要強(qiáng)化對(duì)免疫接種的重視，嚴(yán)格按照相關(guān)規(guī)定對(duì)動(dòng)物接種相關(guān)疫苗，提升小反芻動(dòng)物疫病的預(yù)防能力。當(dāng)前我國(guó)主要使用小反芻獸疫弱毒疫苗，具有較好的安全性，保護(hù)時(shí)間較長(zhǎng)，適用性強(qiáng)，可以對(duì)孕期母羊、幼齡羔羊進(jìn)行接種[6]。近年來(lái)加強(qiáng)對(duì)同源疫苗的研究，并獲得良好的免疫效果。四環(huán)素、磺胺類藥物對(duì)該疫病具有較好的預(yù)防和治療效果。如果發(fā)生該類疫病，或相鄰地區(qū)發(fā)生疫情，需對(duì)羊群實(shí)施強(qiáng)制免疫，并設(shè)立隔離帶；針對(duì)發(fā)病動(dòng)物，按照規(guī)定對(duì)其進(jìn)行撲殺；加強(qiáng)防疫技術(shù)人員的綜合素養(yǎng)，保障免疫工作的有效落實(shí)。

4 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，小反芻獸疫具有較大的危害性，一旦發(fā)病會(huì)對(duì)養(yǎng)殖業(yè)造成極大的經(jīng)濟(jì)損失，不利于養(yǎng)殖業(yè)的健康穩(wěn)定發(fā)展。因此，要強(qiáng)化對(duì)小反芻獸疫診斷技術(shù)的深度研究，掌握其臨床癥狀，并對(duì)具體的診斷技術(shù)進(jìn)行分析，尤其要強(qiáng)化對(duì)實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)的深度研究，提升診斷效果，實(shí)現(xiàn)對(duì)該疫病的快速高效控制，減少其危害性，并為防治措施的科學(xué)設(shè)計(jì)提供依據(jù)。