基于DNA標(biāo)記的食品摻假定量分析研究進(jìn)展

陳愛亮

（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100081）

食品摻假 （Food adulteration）是一種為了追求不正當(dāng)經(jīng)濟(jì)利益而故意實(shí)施的用低值偽劣食品或非食品成分冒充高質(zhì)高值食品的具有潛在健康風(fēng)險(xiǎn)的食品欺詐行為。2013年歐洲發(fā)生“馬肉風(fēng)波”事件并蔓延多個(gè)國家，在多批次摻假牛肉樣品中發(fā)現(xiàn)馬肉含量在60%～100%[1]，并且這種馬肉冒充牛肉的食品摻假事件屢禁不止，2020年全球范圍內(nèi)發(fā)生多起馬肉冒充牛肉事件。食品摻假問題得到了全球越來越多的關(guān)注，已經(jīng)成為當(dāng)前食品安全新的熱點(diǎn)問題之一。

針對(duì)食品摻假行為，近年來發(fā)展了一系列的化學(xué)、生物以及物理學(xué)等技術(shù)來對(duì)食品的真實(shí)性進(jìn)行鑒別，主要包括DNA分析技術(shù)、穩(wěn)定同位素與元素分析技術(shù)、色譜－質(zhì)譜技術(shù)、核磁共振技術(shù)以及紅外光譜和拉曼光譜技術(shù)等。由于食品基本來自于動(dòng)植物、真菌等生物農(nóng)產(chǎn)品，因此利用DNA技術(shù)分析食品的物種組成，成為食品摻假鑒別中最主要、最準(zhǔn)確可靠的方法之一。DNA分析被廣泛用于肉及肉類制品、魚及魚類產(chǎn)品、果汁飲料、乳品等的摻假鑒別，包括定性分析和定量分析兩類，其中目前主流的技術(shù)還是定性分析[2]，定量分析技術(shù)比較少。而依據(jù)食品中摻假成分的含量開展有效監(jiān)管和合理執(zhí)法具有重要意義。因此近年來，基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR和數(shù)字PCR技術(shù)以及高通量測序的DNA定量分析技術(shù)在食品摻假分析中越來越受到重視。本文綜述了基于DNA分析的食品摻假定量分析技術(shù)的研究進(jìn)展。

一、食品摻假分析定量閾值的設(shè)定

用于鑒定食品真?zhèn)蔚幕贒NA標(biāo)記的方法是定性分析的理想方法[2]，例如檢測原料或摻假品的種類，回答是或否的問題，即是否存在一種物種與另一種物種的替代。然而，在食品真實(shí)性檢測中有許多情況需要定量分析。由于基于PCR擴(kuò)增的DNA分析技術(shù)非常靈敏，低于1%甚至0.1%乃至0.01%的物種成分都有可能通過PCR擴(kuò)增檢測出來，因此，經(jīng)常造成無法區(qū)分故意摻假（例如，通過故意用較便宜的替代品代替高質(zhì)量的肉類材料）和無意偶然污染（例如，由于不同批次加工之間的設(shè)備清洗不充分而導(dǎo)致的其他物種的污染或者儲(chǔ)運(yùn)過程中不同類產(chǎn)品造成的沾染）的問題。而通過定量分析區(qū)分蓄意摻假和無意污染對(duì)于監(jiān)管執(zhí)法是至關(guān)重要的。

針對(duì)上述問題，首先需要根據(jù)食品工業(yè)具體實(shí)際經(jīng)驗(yàn)制定合適的閾值作為判斷蓄意摻假和無意污染的規(guī)則，不同產(chǎn)品制定的閾值也不盡相同[3]。例如，2013年馬肉風(fēng)波事件之后，英國食品標(biāo)準(zhǔn)局（UK Food Standards Agency）將未申報(bào)成分的上限設(shè)定為1%（w/w）[4]，作為后續(xù)執(zhí)法行動(dòng)的依據(jù)。同時(shí)如果發(fā)現(xiàn)未申報(bào)成分的含量超過0.1%（w/w），則要求解釋說明。對(duì)于歐盟批準(zhǔn)的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品，食品和飼料產(chǎn)品中未申報(bào)的轉(zhuǎn)基因物質(zhì)含量低于0.9%（w/w）[4～5]，就被認(rèn)為是意外污染，不需要進(jìn)行標(biāo)簽標(biāo)識(shí)。而考慮食品加工鏈條長，成分復(fù)雜，來源多樣，尤其是轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品越來越多，可能無法完全避免轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的引入，因此日本及部分東南亞國家對(duì)轉(zhuǎn)基因標(biāo)識(shí)規(guī)定的閾值是5%，韓國是3%，即低于5%或3%可以不用標(biāo)識(shí)[5]。鑒于蓄意的食品摻假是為了追求經(jīng)濟(jì)利益，因此一般摻假的比例不會(huì)很低，否則很難獲得經(jīng)濟(jì)利益，基于此，歐盟將未申報(bào)物種低于5%（w/w）水平認(rèn)為是偶然污染[4]，對(duì)于進(jìn)口的印度巴斯馬蒂大米，則規(guī)定只要其未獲批準(zhǔn)的品種含量低于7%[6]，即可以免征關(guān)稅。再比如，意大利面需要由產(chǎn)量相對(duì)較低而質(zhì)量較高的硬粒小麥（Triticum durum）制備而成，有記錄表明，將原本用于制作意大利面食的硬粒小麥與普通小麥混種，可以獲得經(jīng)濟(jì)收益。這種摻假影響了最終面食的烹飪特性以及消費(fèi)者的適口性，為了防范此類做法，歐盟對(duì)意大利面食產(chǎn)品中的非硬粒小麥的含量也作出不得超過3%的閾值規(guī)定。

二、基于DNA標(biāo)記的食品摻假定量分析方法

在制定閾值的基礎(chǔ)上，其次即是開發(fā)基于DNA分析的食品真實(shí)性鑒別定量分析方法。目前主要有3類DNA分析方法用于食品摻假定量分析。

（一）實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法（Quantitative real-time PCR，qPCR）可以通過監(jiān)測熒光信號(hào)強(qiáng)度實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR產(chǎn)物的積累，并根據(jù)熒光擴(kuò)增曲線的Ct值推測樣品中初始DNA含量。加上熒光定量PCR儀器良好的精密度、靈敏度、特異性和通量，使得實(shí)時(shí)熒光定量PCR很好地成為一種準(zhǔn)確的相對(duì)定量方法。

使用實(shí)時(shí)PCR進(jìn)行定量的一種常見方法是，配制要檢測樣品的已知系列濃度參考物質(zhì)，制定Ct值－濃度參考曲線，然后將待測樣品測定的Ct值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線求得未知樣品的含量。這種方法比較適合單一成分的含量分析。而對(duì)于食品摻假分析，即可能含有不止一種成分的樣品基質(zhì)來說，更多是采用測定目標(biāo)物種相對(duì)于另一個(gè)或多個(gè)目標(biāo)的數(shù)量比值。例如，在轉(zhuǎn)基因分析中，轉(zhuǎn)基因成分的數(shù)量表示為樣品中特定分類單元的轉(zhuǎn)基因材料與非轉(zhuǎn)基因材料的數(shù)量比值（例如轉(zhuǎn)基因大豆與非轉(zhuǎn)基因大豆的比值）。同樣，對(duì)于羊肉摻鴨肉樣本的鑒別分析，可以分別測定樣本中羊肉和鴨肉的DNA標(biāo)記的Ct值，并將二者的比值代入利用羊肉－鴨肉標(biāo)準(zhǔn)混合樣品所做的標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出二者各自的含量。

除了分別測定食品中各個(gè)目標(biāo)物種的DNA拷貝數(shù)推算標(biāo)稱物種或者摻假物種的含量之外，也可以通過測定樣品中標(biāo)稱物種（或摻假物種）成分基因拷貝數(shù)與物種通用（參考）基因拷貝數(shù)的比值，來推測原來樣品中標(biāo)稱物種或摻假物種的相對(duì)百分含量。這種測定相對(duì)比值的方法最大的優(yōu)點(diǎn)是非靶向檢測。例如，筆者開發(fā)了一種羊肉摻假鑒別的定量檢測方法，通過測定羊肉物種特異性基因與動(dòng)物通用參考基因的比值，即可得出一份肉制品中羊肉的含量[7]。通過羊肉的含量就可以知道羊肉有無摻假，而無需知道樣品中到底是摻加了鴨肉、雞肉還是水貂肉，解決了肉類鑒別中因?yàn)椴恢罁搅耸裁慈舛恢罊z什么的“黑匣子”樣品肉問題。在該羊肉鑒別中采用的DNA標(biāo)記是線粒體基因，線粒體DNA在不同組織不同細(xì)胞間數(shù)量高度變異，因此，為了進(jìn)一步提高定量方法的準(zhǔn)確性，筆者團(tuán)隊(duì)對(duì)方法進(jìn)一步改進(jìn)，選用了細(xì)胞核內(nèi)染色體上的物種特異性單拷貝基因以及通用內(nèi)參單拷貝基因進(jìn)行羊肉摻假定量，減少了定量的誤差[8～9]。相對(duì)于肉類摻假定量鑒別要特別注意避免因?yàn)槿硬痪斐傻恼`差，這種測定比值的方法對(duì)液體類等容易混勻的樣品鑒別定量更為準(zhǔn)確。例如，筆者團(tuán)隊(duì)利用這種單拷貝核基因的方法相繼建立了駱駝奶、驢奶摻假牛奶的檢測方法[10～11]。

在知道摻假物種的情況下，也可以通過檢測摻假物種DNA標(biāo)記拷貝數(shù)與通用內(nèi)參基因拷貝數(shù)的比值來計(jì)算摻假水平。例如，通過測定馬肉物種特異性基因與哺乳動(dòng)物通用內(nèi)參基因的拷貝數(shù)比值推測摻假牛肉中馬肉的含量[12]。當(dāng)然，這種特異性基因－內(nèi)參通用基因拷貝數(shù)比值的方法適合于能夠找到覆蓋食品中所有成分的通用基因的樣品。如利用哺乳動(dòng)物通用內(nèi)參基因進(jìn)行肉類摻假定量鑒別的前提是標(biāo)稱和可能摻假的物種都是哺乳動(dòng)物類，如果摻假了大豆蛋白，則該方法就無法準(zhǔn)確定量，除非選用一個(gè)動(dòng)植物通用的內(nèi)參基因并通過配制系列標(biāo)準(zhǔn)樣品驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性后才能在實(shí)際中應(yīng)用。

雖然熒光定量PCR方法用于食品摻假定量的概念原理非常簡單，但將其應(yīng)用到實(shí)踐中并達(dá)到必要的精確度和準(zhǔn)確性往往是一項(xiàng)挑戰(zhàn)。這是因?yàn)樵摲椒y定的是不同目標(biāo)成分的DNA標(biāo)記拷貝數(shù)相對(duì)值，是一種相對(duì)定量的方法，會(huì)由于不同目標(biāo)成分DNA擴(kuò)增效率的差異而帶來定量的誤差。

（二）數(shù)字PCR方法數(shù)字PCR（Digital PCR）技術(shù)是一種不需要標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以進(jìn)行核酸分子絕對(duì)定量的技術(shù)，其相對(duì)于實(shí)時(shí)熒光定量PCR有3個(gè)顯著的優(yōu)點(diǎn)。（1）不需要校準(zhǔn)曲線來代入測量值計(jì)算含量，從而最小化甚至是完全消除標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品之間的誤差。雖然實(shí)時(shí)熒光定量PCR過程被認(rèn)為是指數(shù)擴(kuò)增，但實(shí)際中可能并非如此，由于抑制劑的存在，低初始濃度的核酸分子可能無法放大到可檢測的水平。同時(shí)由于實(shí)時(shí)熒光定量PCR中DNA定量是相對(duì)于校準(zhǔn)曲線進(jìn)行的，因此，當(dāng)待測樣本的PCR擴(kuò)增效率可能由于基質(zhì)差異而與參考樣本的PCR擴(kuò)增效率不同時(shí)，結(jié)果可能會(huì)受到影響。而這些現(xiàn)象可以通過應(yīng)用數(shù)字PCR來減少甚至完全克服[13]。（2）數(shù)字PCR是基于終點(diǎn)PCR而不是實(shí)時(shí)PCR的檢測方法，而且由于通過微滴化減少了潛在擴(kuò)增干擾抑制，在PCR擴(kuò)增效率方面，它們很少導(dǎo)致擴(kuò)增反應(yīng)的完全抑制。只要在一個(gè)分區(qū)中存在一個(gè)模板拷貝，就會(huì)在反應(yīng)終點(diǎn)產(chǎn)生一個(gè)可檢測到的陽性擴(kuò)增信號(hào)。因此可以更精確地測定擴(kuò)增后是否存在目標(biāo)及直接計(jì)數(shù)目標(biāo)基因拷貝數(shù)。而對(duì)于實(shí)時(shí)熒光定量PCR來說，部分抑制會(huì)降低擴(kuò)增效率，從而延遲熒光信號(hào)的積累。（3）高水平的樣本分割意味著數(shù)字PCR可以提供DNA拷貝數(shù)的絕對(duì)定量結(jié)果，即使在非常低的DNA拷貝數(shù)情況下也具有較高的準(zhǔn)確性[14～15]。通過分割，靶標(biāo)DNA與非靶標(biāo)DNA的比值明顯高于原始樣本，因此數(shù)字PCR更適合于在存在高背景競爭非靶標(biāo)DNA的情況下檢測少數(shù)靶標(biāo)。同樣高水平的樣本分割也相對(duì)提高了靶標(biāo)DNA與共同提取時(shí)的抑制物的比值，從而使數(shù)字PCR比實(shí)時(shí)熒光定量PCR抗抑制劑能力更強(qiáng)[16～17]。

目前數(shù)字PCR技術(shù)已經(jīng)被用于肉類摻假等各種食品摻假定量分析。由于1個(gè)細(xì)胞含有多個(gè)線粒體且不同細(xì)胞線粒體數(shù)目不同，從而導(dǎo)致不同細(xì)胞線粒體基因拷貝數(shù)不同。因此與定性鑒別采用線粒體基因不同，利用數(shù)字PCR技術(shù)進(jìn)行食品摻假定量分析，一般選擇核染色體單拷貝基因作為靶標(biāo)，從而避免因?yàn)榘谢蚩截悢?shù)不同帶來的誤差。例如，中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院陳穎研究員團(tuán)隊(duì)[18]以管家基因復(fù)制蛋白A1（RPA1）基因?yàn)榘袠?biāo)，利用數(shù)字PCR技術(shù)建立了羊肉中雞肉摻假的定量分析方法，并且給出了DNA拷貝數(shù)與肉質(zhì)量分?jǐn)?shù)的轉(zhuǎn)換常數(shù)，結(jié)果表明，該方法比熒光定量PCR測量誤差更低。FLOREN等[19]則采用核染色體F2基因作為靶標(biāo)，建立了基于數(shù)字PCR方法的牛肉、馬肉以及豬肉制品的摻假鑒別方法。2017年，英國LGC公司組織比較了實(shí)時(shí)熒光定量PCR、數(shù)字PCR以及非同位素標(biāo)記質(zhì)譜技術(shù)對(duì)肉類摻假定量分析的差異。通過對(duì)摻假含量在0.1%至10%之間（w/w）系列肉類摻假標(biāo)準(zhǔn)樣品的測定，得出結(jié)論認(rèn)為，數(shù)字PCR具有更高的精確度和準(zhǔn)確度，尤其是對(duì)于痕量目標(biāo)的檢測更為準(zhǔn)確。

雖然數(shù)字PCR技術(shù)愈來愈受到重視并獲得更多應(yīng)用，但是當(dāng)前數(shù)字PCR儀器成本以及每次的樣本分析測試成本仍然相對(duì)較高，在很多分析實(shí)驗(yàn)室沒有普及。而且需要注意的是，很多情況下并不能簡單地將熒光定量PCR的條件轉(zhuǎn)換為數(shù)字PCR的條件，還需要進(jìn)一步針對(duì)數(shù)字PCR進(jìn)行優(yōu)化。除此以外，數(shù)字PCR因?yàn)闃颖痉指畹脑?，?dòng)態(tài)范圍比熒光定量PCR小，更適合低目標(biāo)濃度的樣品分析。相對(duì)而言，基于比值的熒光定量PCR方法雖然誤差相對(duì)較大，但由于經(jīng)濟(jì)利益驅(qū)動(dòng)的食品摻假一般都會(huì)在5%甚至30%以上，熒光定量PCR方法也基本可以滿足食品摻假定量分析的需求，鑒于其快速、便攜、低成本的優(yōu)勢，未來在食品摻假定性定量鑒別中會(huì)獲得很好的應(yīng)用。

（三）高通量測序技術(shù)這里所說的高通量測序技術(shù)與DNA宏條形碼測序技術(shù)是一樣的，除了利用宏條形碼高通量測序技術(shù)對(duì)混合樣本中的物種進(jìn)行鑒定外，利用高通量測序技術(shù)也可以對(duì)混合樣本中各物種的含量進(jìn)行測定，其依據(jù)是各物種目標(biāo)序列測序豐度與物種的含量正相關(guān)[20]。但是實(shí)際上用高通量測序?qū)κ称凡煌煞诌M(jìn)行定量還有很大的挑戰(zhàn)，測序豐度與物種含量的相關(guān)性受到多個(gè)因素的影響，其中最主要的就是由于通用引物錯(cuò)配、PCR條件等引起PCR擴(kuò)增效率的偏差，使得不同物種擴(kuò)增效率不同，最終影響到定量的準(zhǔn)確性[21]。當(dāng)然采用免擴(kuò)增直接測序的方法可以去掉擴(kuò)增效率偏差的問題，但如果采取目標(biāo)捕獲測序法進(jìn)行定量，又受限于無法確定不同物種間條形碼拷貝數(shù)、讀長等信息，從而仍然無法準(zhǔn)確定量。如果采取全基因組測序法，雖然可以提高定量的準(zhǔn)確性，但在檢測成本和數(shù)據(jù)處理方法方面會(huì)受到很大挑戰(zhàn)。

三、DNA含量與食品質(zhì)量比的轉(zhuǎn)換關(guān)系

其實(shí)不管哪種基于DNA分析的食品摻假定量分析方法，都是基于DNA的含量來反推樣品的重量或者質(zhì)量的。然而要將基于數(shù)字PCR測定的DNA拷貝數(shù)或?qū)崟r(shí)熒光定量PCR測定的DNA的Ct值比值結(jié)果，直接轉(zhuǎn)換為按成分計(jì)算的每種成分的重量或質(zhì)量比值是不容易的。在表示兩個(gè)測量維度的結(jié)果時(shí)，需要使用一個(gè)轉(zhuǎn)換因子，而這個(gè)轉(zhuǎn)換因子的值可能受到多種因素的影響，包括不同物種相對(duì)基因組大小以及植物物種的倍性水平等。例如，繼2013年歐洲的馬肉事件之后，英國環(huán)境、食品和農(nóng)村事務(wù)部（DEFRA）委托英國政府化學(xué)家實(shí)驗(yàn)室開發(fā)了一種用于馬DNA定量的實(shí)時(shí)PCR方法。通過測定樣品中馬DNA相對(duì)于哺乳動(dòng)物DNA總量的數(shù)量來判斷馬肉的含量。該方法利用馬肉（肌肉）和牛肉（肌肉）樣品進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明，該方法適合于牛肉中摻有低水平的馬肉以及1%的閾值測定，因此可以用于后期的執(zhí)法行動(dòng)。這是因?yàn)轳R的基因組估計(jì)比牛肉的基因組小9%左右。當(dāng)將測定的DNA拷貝數(shù)比值轉(zhuǎn)換為重量比值時(shí)，9%的基因組誤差對(duì)低水平的馬肉摻假影響有限。但如果馬肉摻假率更高，比如含有50%（w/w）馬肉的牛肉樣本，其測定的DNA拷貝數(shù)比值可能是55份馬基因組對(duì)50份?；蚪M。因此設(shè)計(jì)計(jì)算從DNA到食品質(zhì)量的轉(zhuǎn)換因子或者校正因子，必須考慮到馬和牛肉基因組的相對(duì)大小以及樣本中這兩個(gè)基因組的相對(duì)豐度，從而實(shí)現(xiàn)兩種測量維度之間準(zhǔn)確的轉(zhuǎn)換。

除了DNA拷貝數(shù)與食品質(zhì)量之間的轉(zhuǎn)換因子需要考慮之外，有關(guān)DNA自身的因素在定量的時(shí)候也需要加以考慮。首先，不同組織部位的DNA拷貝數(shù)與組織的質(zhì)量的比例并不相同，比如肌肉組織、肝臟組織甚至含脂肪較多的其他組織等，在比較時(shí)應(yīng)盡可能保持標(biāo)準(zhǔn)品與待測樣品組織類型一致。其次，在整個(gè)分析過程中，DNA提取過程也必須可重復(fù)，并且混合樣品中不同物種成分DNA的提取效率相同。最后，對(duì)于加工制品，也需要對(duì)不同物種DNA/組織質(zhì)量的比值影響一致，才能盡量給出準(zhǔn)確的定量分析結(jié)果[22]。

四、發(fā)展趨勢與展望

毫無疑問，目前對(duì)于食品摻假分析來說，精準(zhǔn)定量還是最有挑戰(zhàn)的，無論是已知摻假成分下的實(shí)時(shí)熒光定量PCR或者數(shù)字PCR技術(shù)，還是存在未知成分下的高通量測序技術(shù)，都受到3個(gè)方面的影響，一是待測樣品與參考物質(zhì)之間以及同一樣品內(nèi)不同物種之間DNA提取以及擴(kuò)增效率不同導(dǎo)致的誤差；二是所選的DNA標(biāo)記在不同物種或者同一物種不同組織部位之間拷貝數(shù)不同帶來的誤差；三是最重要的，即不同樣品之間存在較大的組成差異，DNA拷貝數(shù)－肉或者其他食品質(zhì)量的轉(zhuǎn)換因子并不是一個(gè)恒定的值，尤其是對(duì)于含有未知摻假樣品的食品，這些因素影響更大。

雖然可以通過優(yōu)化選擇合適的DNA標(biāo)記、使用標(biāo)準(zhǔn)的參考物質(zhì)、采用數(shù)字PCR或者免擴(kuò)增的高通量測序技術(shù)來減少定量誤差，但誤差總是不可避免的。食品基質(zhì)的復(fù)雜性，比如肉的異質(zhì)性也決定了食品摻假定量分析不可能做到十分精準(zhǔn)。因此從某種程度上來講，就像根據(jù)經(jīng)驗(yàn)制定一個(gè)合適閾值區(qū)分摻假和沾染一樣，可以根據(jù)不同的食品摻假種類，制定相應(yīng)合適的誤差接受范圍，作為依據(jù)來選擇合適的技術(shù)對(duì)可能摻假的樣品進(jìn)行定量。其實(shí)從追求經(jīng)濟(jì)利益的角度講，摻假比例一般不會(huì)低于10%甚至50%乃至更高或全部摻假，而高比例的摻假，誤差一般比較低，只有在很低的水平比如10%以下誤差才會(huì)較高。從這個(gè)角度考慮，對(duì)于復(fù)雜的食品基質(zhì)摻假定量分析，比如肉制品、奶制品摻假等，參考食品安全獸藥殘留免疫試劑盒備案批內(nèi)批間差的要求，根據(jù)不同的食品欺詐類型，制定一個(gè)10%～30%誤差范圍，可能有助于推動(dòng)食品摻假定量分析方法在食品欺詐監(jiān)管執(zhí)法中的應(yīng)用。同時(shí)為了更科學(xué)合理地對(duì)食品摻假進(jìn)行監(jiān)管執(zhí)法，未來也需要對(duì)不同的食品摻假種類設(shè)定合理的摻假判定閾值，以便區(qū)分故意摻假和無意沾染。制定合理的閾值可以從兩個(gè)方面進(jìn)行考慮。一是經(jīng)濟(jì)利益驅(qū)動(dòng)的食品摻假，一般摻假比例不會(huì)很低，從這個(gè)角度去考慮，可以設(shè)定一個(gè)摻假判定閾值的高值，比如1%～10%。二是根據(jù)具體食品的種類及其生產(chǎn)、加工、儲(chǔ)運(yùn)、銷售等全過程中可能發(fā)生的無意沾染情況來設(shè)定一個(gè)摻假判定閾值的低值，比如0.1%～1%。

總之，在合理摻假判定閾值設(shè)定的基礎(chǔ)上，根據(jù)食品摻假類型，分別選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR、數(shù)字PCR和高通量測序等技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)食品摻假現(xiàn)象主要是物種種屬摻假現(xiàn)象的初步鑒別。當(dāng)然，食品種類繁多，組成復(fù)雜，食品摻假的類型也復(fù)雜多樣，更多的時(shí)候可能需要一種或多種技術(shù)聯(lián)用，才能達(dá)到更為準(zhǔn)確的食品摻假定量鑒別分析。