古麗加那提，袁 華，蔣麗萍，趙紹杰，楊 蕊

(無錫市婦幼保健院婦科，江蘇 無錫 214000)

上皮性卵巢癌是卵巢癌中最常見的類型，目前腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)后輔以鉑類化療是其治療的主要方法，但大多數(shù)患者會(huì)在治療后出現(xiàn)復(fù)發(fā)及耐藥的情況[1]。研究表明血清人附睪分泌蛋白4(human epididymis protein-4，HE4)是近年來發(fā)現(xiàn)的敏感卵巢癌腫瘤標(biāo)志物之一，其血清水平可作為監(jiān)測(cè)卵巢癌患者化療后復(fù)發(fā)情況的預(yù)測(cè)指標(biāo)[2]。同時(shí)，卵巢癌患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)也可反應(yīng)腫瘤的進(jìn)展情況[3]。本研究比較了卵巢癌患者化療前及不同療程化療后血清HE4水平及血T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)，旨在探究HE4和T淋巴細(xì)胞亞群在卵巢癌患者治療過程中的應(yīng)用價(jià)值，以期為患者的治療效果評(píng)估及預(yù)后的判斷提供幫助。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2019年2月至2020年12月在無錫市婦幼保健院收治的經(jīng)手術(shù)和病理檢查確診的68例卵巢癌患者為觀察組，其中卵巢漿液性癌31例，粘液性腺癌9例，子宮內(nèi)膜樣癌8例，其他卵巢惡性腫瘤20例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合上皮性卵巢癌診斷標(biāo)準(zhǔn)；②無其他基礎(chǔ)性疾病；③臨床和CT影像資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①病理診斷結(jié)果為交界性腫瘤的患者；②合并其他惡性腫瘤的患者；③合并有嚴(yán)重的心臟、肝、腎功能障礙的患者；④對(duì)本研究所用藥物過敏或不耐受的患者。本研究根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟制定的分期標(biāo)準(zhǔn)對(duì)患者進(jìn)行分期，其中I期14例，II期9例，III期33例，IV期12例。患者的年齡為36～75歲，平均年齡為(53.47±12.18)歲。所有入組患者在進(jìn)行腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)后兩個(gè)月內(nèi)予以化療，化療方案為鉑類+紫杉醇類的一線化療，每3周為一個(gè)療程。另選取在我院門診進(jìn)行體檢的66例健康女性作為對(duì)照組，其年齡為35～77歲，平均年齡為(54.78±11.69)歲，兩組研究對(duì)象年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究獲得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均簽署了知情同意書。

1.2 標(biāo)本的采集與處理

所有研究對(duì)象于術(shù)后及每個(gè)化療周期入院前后在空腹?fàn)顟B(tài)下采集靜脈血3～5mL。在室溫下靜置30min，并于3 000r/min離心15min后收集上血清，將血清置于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 血清HE4檢測(cè)

使用酶聯(lián)免疫試劑盒(LD公司，德國)檢測(cè)血清樣本中HE4的濃度，實(shí)驗(yàn)操作均嚴(yán)格按照試劑盒的說明進(jìn)行，陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為HE4>150pmol/L。

1.4 外周血T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)

將2mL的靜脈血注入到淋巴細(xì)胞分離液中，并于1 500r/min離心10min后收集淋巴細(xì)胞層，用PBS緩沖液漂洗、離心2次后將細(xì)胞數(shù)調(diào)整為106個(gè)/mL，備用。取100μL淋巴細(xì)胞液，向其中加入10μL的相應(yīng)抗體液，于1 500r/min離心15min后用PBS緩沖液漂洗、離心1次，接著向其中加入500μL PBS，并通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD3+、CD4+及CD8+的細(xì)胞水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 術(shù)后化療前患者血清HE4水平

與對(duì)照組相比，觀察組患者術(shù)后化療前的血清HE4水平顯著升高(t=5.078，P=0.012)，見圖1。

2.2 術(shù)后化療前患者外周血T細(xì)胞亞群水平

與對(duì)照組相比，觀察組患者術(shù)后化療前的外周血T淋巴細(xì)胞CD4亞群顯著減少，CD8亞群顯著增加，CD4+/CD8+比值顯著下降(t值分別為-2.371、-5.064、-3.823，P<0.05)，見表1。

注：*P<0.05圖1 術(shù)后化療前患者血清HE4水平與對(duì)照組的比較Fig.1 Comparison of serum HE4 level between the patients before postoperative chemotherapy and the control group

表1 術(shù)后化療前患者血清T細(xì)胞亞群水平與對(duì)照組的對(duì)比Table 1 Comparison of serum T cell subsets levels between the patients before postoperative chemotherapy

2.3 術(shù)后各化療周期患者血清HE水平的變化

與術(shù)后化療前相比，卵巢癌患者血清中HE4水平隨化療次數(shù)的增加而顯著降低(t值為2.453～6.785，P<0.05)，在第5次化療后基本可恢復(fù)至正常，見圖2。

注：*與術(shù)后化療前比較，P<0.05；#與第1療程結(jié)束比較，P<0.05；&與第2療程結(jié)束比較，P<0.05；△與第3療程結(jié)束比較，P<0.05；@與第4療程結(jié)束比較，P<0.05圖2 術(shù)后各化療周期患者血清HE水平的變化Fig.2 Changes of serum HE level in patients with various chemotherapy cycles after operation

2.4 術(shù)后各化療周期患者外周血T細(xì)胞亞群水平的變化

與術(shù)后化療前相比，術(shù)后化療第1～4療程結(jié)束時(shí)CD4+和CD4+/CD8+的水平顯著降低(t值為2.546～5.908，P<0.05)，而CD8+的水平顯著升高(t值為2.219～5.304，P<0.05)。從第5療程結(jié)束開始，患者的CD4+、CD8+和CD4+/CD8+等細(xì)胞免疫學(xué)指標(biāo)水平有所恢復(fù)，見表2。

表2 術(shù)后各化療周期患者血清T細(xì)胞亞群水平的變化Table 2 Changes of serum T cell subsets in patients with various chemotherapy cycles after

2.5 HE4及CD4+/CD8+診斷卵巢癌的效能

ROC曲線顯示，血清HE4診斷卵巢癌的曲線下面積(area under the curve，AUC)為0.964(95%CI：0.938～0.985)，CD4+/CD8+診斷卵巢癌的AUC為0.887(95%CI：0.829～0.945)，二者聯(lián)合診斷卵巢癌的AUC為0.988(95%CI：0.974～1.000)，這提示聯(lián)合檢測(cè)有助于提高診斷效能。進(jìn)一步分析HE4、CD4+/CD8+及二者聯(lián)合對(duì)卵巢癌診斷的特異性和敏感性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HE4的敏感度和特異度分別為94.1%和90.0%，血清CD4+/CD8+的敏感度和特異度分別為82.4%和86.4%，二者聯(lián)合的敏感度和特異度分別為98.5%和92.4%，見圖3。

圖3 血清HE4、CD4+/CD8+及二者聯(lián)合診斷卵巢癌的ROC曲線Fig.3 ROC curves of serum HE4,CD4+/CD8+ and their combination in the diagnosis of ovarian cancer

3 討論

3.1 HE4在卵巢癌中的應(yīng)用

上皮性卵巢癌主要包括漿液性腺癌、粘液性腺癌、子宮內(nèi)膜樣腺癌、透明細(xì)胞癌等類型。HE4是近年來發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤標(biāo)志物，具有高靈敏度和高特異性等特點(diǎn)。已有研究表明HE4在檢測(cè)惡性腫瘤疾病狀態(tài)、觀察患者療效及反映復(fù)發(fā)情況等方面起著重要的作用[4-5]。Yang等[6]在一項(xiàng)研究中發(fā)現(xiàn)血清HE4濃度在卵巢癌患者中顯著升高，其可與CA125互補(bǔ)用于早期上皮性卵巢癌的診斷。Scaletta等[7]的一項(xiàng)meta分析則發(fā)現(xiàn)HE4在卵巢癌患者血清中的表達(dá)與腫瘤分期和復(fù)發(fā)有密切關(guān)系。在本研究中我們發(fā)現(xiàn)與健康對(duì)照組相比，卵巢癌患者術(shù)后化療前的血清HE4水平顯著升高，且與術(shù)后化療前相比，其血清中HE4水平隨化療次數(shù)的增加而顯著降低，在第5次化療后基本可恢復(fù)至正常，提示HE4可作為幫助評(píng)判療效的有效血清學(xué)生物標(biāo)志物。

3.2 T淋巴細(xì)胞亞群與卵巢癌患者療效關(guān)系

在腫瘤發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)移的過程中，機(jī)體的免疫功能扮演著重要角色。研究顯示，在機(jī)體對(duì)抗腫瘤的免疫反應(yīng)中，由T淋巴細(xì)胞主導(dǎo)的細(xì)胞免疫發(fā)揮了重要作用[8-9]。T淋巴細(xì)胞是淋巴細(xì)胞中數(shù)量最多且功能最為復(fù)雜的一類細(xì)胞，主要通過胸腺的淋巴干細(xì)胞分化而來[10]。其主要分為兩類亞群，一類是MHC-I類抗原限制的CD8+T細(xì)胞，其可抑制抗體的合成與分泌，使腫瘤逃脫免疫體統(tǒng)的攻擊；另一類是MCH-II類抗原限制的CD4+T細(xì)胞，其數(shù)量可反映機(jī)體抗腫瘤免疫功能的變化；而CD3+T細(xì)胞則反映了CD4+和CD8+T細(xì)胞的整體水平。CD4+和CD8+T細(xì)胞之間相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)是機(jī)體能進(jìn)行正常免疫應(yīng)答的關(guān)鍵，其比率對(duì)患者預(yù)后情況的預(yù)測(cè)具有重要的意義[11]。本研究結(jié)果顯示，卵巢癌患者在腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)后的化療第1療程結(jié)束時(shí)，外周血T淋巴細(xì)胞CD4亞群顯著減少，CD8亞群顯著增加，CD4+/CD8+比值顯著下降。此外，術(shù)后化療第1～4療程結(jié)束時(shí)CD4+和CD4+/CD8+的水平顯著降低，而CD8+的水平顯著升高，從第5療程結(jié)束開始，患者的CD4+、CD8+和CD4+/CD8+等細(xì)胞免疫學(xué)指標(biāo)水平有所恢復(fù)，提示化療在抑制機(jī)體免疫的同時(shí)還可恢復(fù)及平衡患者的免疫功能，隨著化療周期的延長(zhǎng)，其對(duì)機(jī)體免疫的促進(jìn)作用開始逐步顯現(xiàn)。

3.3 HE4水平及T淋巴細(xì)胞亞群在診斷卵巢癌中的價(jià)值

卵巢癌屬于女性生殖系統(tǒng)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率雖低于宮頸癌和子宮體癌，但其復(fù)發(fā)率和死亡率極高，致死率位居生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的首位[12]。由于卵巢癌的早期臨床癥狀不典型，故難以被發(fā)現(xiàn)，80%患者就診時(shí)已是晚期，常出現(xiàn)腹盆腔及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[13]。因此，當(dāng)前需要尋找一種靈敏、準(zhǔn)確的診療評(píng)估手段，以對(duì)卵巢癌患者術(shù)后的化療療效進(jìn)行評(píng)估。本研究分析了HE4、CD4+/CD8+及二者聯(lián)合診斷卵巢癌的效能，結(jié)果顯示血清HE4的曲線下面積為0.964，敏感度和特異度分別為94.1%和90.0%；外周血CD4+/CD8+的曲線下面積為0.887，敏感度和特異度分別為82.4%和86.4%；二者聯(lián)合的曲線下面積為0.988，敏感度和特異度分別為98.5%和92.4%，提示聯(lián)合檢測(cè)有助于提高診斷價(jià)值，其效能優(yōu)于單獨(dú)使用的預(yù)測(cè)價(jià)值。健康女性血清中HE4的水平為60～150 pmol/L，其在上皮性卵巢癌患者中顯著升高。研究表明HE4在鑒別卵巢良惡性腫瘤的特異性甚至高于CA125，且其與卵巢癌惡性特征及預(yù)后相關(guān)，可用于患者臨床療效的預(yù)測(cè)[14]。

綜上所述，本研究通過對(duì)化療前后卵巢癌患者血清HE4的濃度變化及T細(xì)胞亞群的變化進(jìn)行分析，為患者臨床療效的監(jiān)測(cè)及預(yù)后的判斷提供了參考。但本研究的樣本量較少，且受到回顧性研究的限制，使結(jié)果具有一定的局限性。今后我們?nèi)孕钄U(kuò)大樣本量以進(jìn)一步觀察。