陳 相，杜麗偉，蔡珠妹，龔海娜，陳書恩

深圳市羅湖醫(yī)院集團醫(yī)學(xué)檢驗實驗室（深圳市羅湖區(qū)婦幼保健院檢驗科），廣東 深圳 518019

白蛋白（ALB）亦稱清蛋白，含580個氨基酸殘基的單鏈單純蛋白質(zhì)，主要由肝實質(zhì)細胞合成分泌，是血漿中含量最多的蛋白質(zhì)，約占血漿總蛋白的57%～68%。維持血液循環(huán)膠體滲透壓及血液pH值、保護血管內(nèi)皮細胞完整性及在出凝血中發(fā)揮重要的生理功能，還參與炎癥反應(yīng)、抗氧化、修復(fù)損傷等。同時白蛋白是體內(nèi)重要的營養(yǎng)蛋白，其濃度水平不僅與疾病狀況相關(guān)，也和性別、年齡、不同地區(qū)的生活水平及習(xí)慣相關(guān)。目前，臨床各實驗室測定ALB的方法有電泳法、免疫法、染料結(jié)合法，各種檢測方法學(xué)間差異較大，且兒童正常參考范圍沒有統(tǒng)一，多數(shù)沿用成人的參考范圍，存在很大局限性。本實驗室ALB檢測方法學(xué)由染料結(jié)合法更改為免疫法，因而急需建立新的參考范圍。本研究以本地區(qū)托幼機構(gòu)健康體檢兒童為調(diào)查對象，應(yīng)用免疫比濁法檢測ALB，以求建立適合本地區(qū)本實驗室的3～7歲兒童ALB參考范圍，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 調(diào)查對象

選取2019年7—9月來深圳市羅湖醫(yī)院體檢適齡入院入學(xué)的健康兒童作為研究對象，按照國家臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCLS）關(guān)于健康者的原則要求，選取其中肝腎功能正常、血尿常規(guī)正常、乙肝表面抗原（HbsAg）陰性及其他體檢結(jié)論為“健康”的3～7歲兒童采集外周靜脈血，檢測血清白蛋白結(jié)果進行統(tǒng)計分析。本研究經(jīng)樣本醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)、入選者家長簽署知情同意書；分為3～5歲、6～7歲，以男童、女童分組分別統(tǒng)計結(jié)果。

1.2 儀器與試劑

儀器為BECKMAN AU-680全自動生化分析儀；試劑為芬蘭Orion公司生產(chǎn)的生化液體雙試劑盒及配套標(biāo)準(zhǔn)品（國械注進20172401012），按照試劑說明書的要求設(shè)置儀器測定參數(shù)，采用免疫比濁法。室內(nèi)質(zhì)控血清為朗道雙水平質(zhì)控品。

1.3 方法

質(zhì)量控制室內(nèi)質(zhì)控為朗道雙水平質(zhì)控，每天ALB CV＜2.5%，累積室內(nèi)質(zhì)控CV＜5%，室間質(zhì)評（EQA計劃）ALB項目（廣東省室間質(zhì)量評價、衛(wèi)生部室間質(zhì)評價）均為優(yōu)秀。檢測方法由護士按要求采集在本地區(qū)托幼機構(gòu)入院入學(xué)3～7歲兒童靜脈血液標(biāo)本（剔除溶血、脂血及黃疸樣本）［1-2］，標(biāo)本凝集后3 000轉(zhuǎn)離心10 min，并在實驗室2 h內(nèi)完成檢測。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗。計數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 1 792例兒童血清ALB測定值

各年齡組血清ALB測定值均符合正態(tài)分布，男童3～5歲年齡組平均白蛋白水平范圍40.01～45.79 g/L，平均值為42.9 g/L；6～7歲年齡組平均白蛋白水平范圍40.72～46.48 g/L，平均值為43.6 g/L；女童3～5年齡組平均白蛋白水平范圍41.56～47.24 g/L，平均值為44.4 g/L；6～7歲年齡組平均白蛋白水平范圍41.03～46.77 g/L，平均值為43.9 g/L，見表1。

表1 1 792例兒童血清ALB測定值（±s）

表1 1 792例兒童血清ALB測定值（±s）

性別男女年齡組3～5歲6～7歲3～5歲6～7歲例數(shù)（例）130 849 119 694 ALB水平42.9±2.89 43.6±2.88 44.4±2.84 43.9±2.87

2.2 不同性別兒童間ALB結(jié)果

男童3～5歲、6～7歲兩年齡組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），女童3～5歲、6～7歲兩年齡組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），女童取消年齡分組；在男女童3～5歲組及6～7歲組間ALB結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 不同性別兒童間ALB結(jié)果（±s）

表2 不同性別兒童間ALB結(jié)果（±s）

性別男女t值P值3～5歲組42.9±2.89 44.4±2.84-4.107 0 6～7歲組43.6±2.88 43.9±2.87 2.499 0.014

2.3 深圳羅湖地區(qū)1 792例健康3～7歲兒童ALB參考范圍

男童3～5歲年齡組95%的參考區(qū)間37.24～48.56 g/L；6～7歲年齡組37.95～49.25 g/L；女童3～7歲年齡組白蛋白95%參考區(qū)間38.37～49.63 g/L，見表3。

表3 1 792例3～7歲兒童ALB參考范圍（±s）

表3 1 792例3～7歲兒童ALB參考范圍（±s）

性別男女年齡組3～5歲6～7歲3～7歲例數(shù)（例）130 849 813 ALB（g/L）42.9±5.66 43.6±5.65 44.0±5.63

2.4 常用ALB參考范圍

免疫比濁法檢測ALB結(jié)果參考范明顯低于溴甲酚綠法，可能與兩種方法的檢測原理不同相關(guān)，見表4

表4 常用ALB參考范圍（±s）

表4 常用ALB參考范圍（±s）

ALB文獻來源本研究年齡3～5歲6～7歲成人（免疫比濁法）成人（溴甲酚綠法）男37.2～48.6 37.9～49.3女38.4～49.6本試劑廠家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)總體37.9～49.4 38.1～49.4 35～50 40～55

3 討論

ALB是血漿中含量最多的蛋白質(zhì)，幾乎全部在肝臟合成，飲食中的蛋白水平能直接影響清蛋白的合成，ALB是體內(nèi)重要的營養(yǎng)蛋白，參與維持血漿膠體滲透壓、酸堿平衡等內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，也是血漿中多種物質(zhì)的主要轉(zhuǎn)運蛋白。血清蛋白的檢測結(jié)果對相關(guān)疾病的診斷沒有特異性，但結(jié)合臨床癥狀，可用于判斷疾病的發(fā)展?fàn)顩r，同時可預(yù)測肝臟疾病的關(guān)鍵指標(biāo)。近年來，有最新研究表明［12］ALB在膿毒血癥預(yù)后或疾病嚴(yán)重度分層，是一項容易獲得及敏感指標(biāo)。隨著經(jīng)濟發(fā)展和人民生活水平的提高，飲食習(xí)慣的變化，ALB不僅在兒童營養(yǎng)狀況的改善及對兒童健康狀況的評估作為一個重要指標(biāo)，隨著對ALB研究的深入，還在其他疾病當(dāng)中的應(yīng)用及疾病的預(yù)后也有重要的意義。

參考范圍是對95%健康人群中各項檢測指標(biāo)及其檢測結(jié)果進行多樣本統(tǒng)計數(shù)值分析，參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)所設(shè)定，隨著檢測方法學(xué)的改變及人體生理狀況的變化，其具體的指標(biāo)也會發(fā)生相應(yīng)的改變［11］。目前白蛋白常用的檢測方法有染料結(jié)合法、電泳法、免疫比濁法。本實驗室因ALB測定試劑更換，ALB測定方法學(xué)由原來的溴甲酚綠法改變?yōu)槊庖弑葷岱?，因而在使用新的試劑過程中發(fā)現(xiàn)試劑提供的參考范圍及衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)［3-6］提供的ALB參考范圍不適合醫(yī)院特殊就診人群，且其參考范圍主要來自成人，沒有明確顯示可適用于兒童，同時，醫(yī)院臨床醫(yī)生也對本實驗室檢測結(jié)果提出質(zhì)疑，反應(yīng)強烈，影響到臨床醫(yī)生對入幼、入學(xué)兒童的健康的診斷。因此本實驗室急需建立適合本地區(qū)醫(yī)院特殊就診人群的ALB參考范圍。

在本研究中，男童3～5歲、6～7歲兩個年齡分組中，ALB檢測數(shù)據(jù)相比較與郭存九等［10］研究（ALB為溴甲酚紫法）的成人年齡分組一樣，均有較大差異，說明在不同地區(qū)、不同年齡段、性別因素對ALB參考范圍的建立有明顯影響，研究者推測這可能與人群生活習(xí)慣、生活方式等不同相關(guān)。而目前衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中提供的參考范圍沒有年齡分組，在引用時也需要做相關(guān)的驗證，提示在實際工作中要根據(jù)不同檢測項目的檢測方法學(xué)、不同人群、建立適合本地區(qū)本實驗室參考范圍。

在本研究中，男、女童ALB參考范圍低限值均低于衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)而高于試劑廠家提供的標(biāo)準(zhǔn)，高限值均低于衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（ALB為溴甲酚綠法）及試劑廠家提供的參考范圍，推測這可能與兒童的生理發(fā)育狀況和成人不同相關(guān)；可能與兒童在不同地區(qū)的生活條件、營養(yǎng)狀況和飲食結(jié)構(gòu)改善有關(guān)；可能與不同的檢測方法學(xué)檢測原理不一致相關(guān)。提示ALB項目檢測應(yīng)建立不同檢測方法學(xué)的適于3～7歲的兒童健康、診斷的參考范圍，以供臨床醫(yī)生參考。

溴甲酚綠法的檢測原理主要是白蛋白在pH值4.2的緩沖液中帶正電荷，與帶負電荷的染料溴甲酚綠結(jié)合形成藍綠色復(fù)合物，但溴甲酚綠法特異性差，溴甲酚綠不僅與白蛋白反應(yīng)，還可與球蛋白、運鐵蛋白、結(jié)合珠蛋白反應(yīng)，導(dǎo)致檢測結(jié)果產(chǎn)生偏差。免疫比濁法檢測原理是采用單克隆抗體技術(shù)，使抗白蛋白抗體與血清中的白蛋白特異性結(jié)合，通過測定抗原抗體復(fù)合物的濁度從而得出血清白蛋白的含量，重復(fù)性、準(zhǔn)確性均有明顯提高。同時，檢驗醫(yī)學(xué)溯源聯(lián)合委員會（JCTLM）也將免疫比濁法作為參考方法。在本研究中檢測ALB應(yīng)用的免疫比濁法，在和溴甲酚綠法相比較時，參考范圍明顯偏低［10-11］，表明了方法學(xué)檢測原理之間的明顯差異，與劉非等［13］研究相一致。這提示研究者在實際工作中更換檢測方法學(xué)后應(yīng)驗證和重新制定相適應(yīng)的參考范圍。

本研究中因客觀條件所限，未能再次細化每一個年齡階段及不同方法學(xué)的兒童白蛋白參考區(qū)間的分析，同時當(dāng)前在細化各人群及年齡段的檢測項目參考范圍相關(guān)報道較少，這方面這也是以后努力的方向和目標(biāo)，也是對不同醫(yī)院、不同地區(qū)的檢驗結(jié)果相互承認(rèn)提供科學(xué)的實驗依據(jù)，也期待有其它地區(qū)相關(guān)的實驗研究報道。

綜上所述，本研究中在3～7歲兒童的ALB參考范圍在性別、年齡組間的差異的分析能夠真實反映深圳羅湖地區(qū)3～7歲健康兒童人群的血清白蛋白濃度水平情況。同時也驗證了同一項目在不同醫(yī)院面對不同人群時要及時修訂相適應(yīng)的參考范圍。也證明了檢測方法更改后應(yīng)重新制定相適應(yīng)的正常人群的參考范圍必要性［14］。因此，建議實驗室按照CLSI［7］要求，根據(jù)性別、年齡、檢測方法學(xué)建立各自的參考范圍。為臨床診斷、治療、監(jiān)測提供科學(xué)的實驗依據(jù)。