深圳市寶安區(qū)＜5歲嬰幼兒急性腹瀉病原學及心肌酶及同工酶分析

楊錦平，張現(xiàn)明，楊慶珣

1.深圳市寶安區(qū)中心醫(yī)院輸血科，廣東 深圳 518102；2.深圳市寶安區(qū)中心醫(yī)院檢驗科，廣東 深圳 518102

急性腹瀉是導致5歲以下嬰幼兒死亡的重要原因之一，近期來日益引起醫(yī)務工作者的重視，急性腹瀉可由細 菌、病毒和寄生蟲等多種病原體引起，其中病毒是造成急性腹瀉暴發(fā)的主要病原體，其主要包括輪狀病毒（RV）、杯狀病毒（HuCV）、腺病毒（AdeV）和星狀病毒（AstV）［1］。RV、HuCV、AdeV和AstV不僅可以引起腸道內(nèi)感染，致患兒嚴重脫水［2］，也會引發(fā)患兒心肌損傷，這嚴重影響患兒的生長發(fā)育乃至生命安全［3］，但對關(guān)注＜5歲急性腹瀉患兒的心肌損傷有關(guān)實驗室檢查的系統(tǒng)報道很少。因此，為了深圳市寶安區(qū)5歲以下嬰幼兒急性腹瀉患兒病原體流行及心肌損傷情況，選取2017年1月—2019年12月對深圳市寶安區(qū)中心醫(yī)院收治的＜5歲急性腹瀉患兒的病原體進行檢測分析，并對其心肌酶及同工酶進行對比分析，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2017年1月—2019年12月深圳市寶安區(qū)中心醫(yī)院就診的＜5歲急性腹瀉就診的1 095例患兒為研究對象，其中男621例，女474例；病程1～3 d，平均病程（1.2±0.6）d，其中，四種病毒（RV、HuCV、AdeV和AstV）陰性為陰性組，陽性為陽性組，其中陽性組的RV陽性為RV組，HuCV陽性為HuCV組，AdeV陽性為AdeV組，AstV陽性為AstV組。均符合《兒童急性感染性腹瀉病診療規(guī)范（2020年版）》中的急性腹瀉診斷標準［4］。納入標準：（1）月齡28～59 d，平均月齡（13.4±2.36）月齡。（2）具有食欲不振、嘔吐、惡心、腹痛及腹瀉等臨床癥狀。（3）每日排便次數(shù)≥3次。（4）糞便性狀異常，性狀主要為稀便、蛋花樣、水樣便、黏液便或膿血便等。（5）未服用抗菌藥物。（6）大便高倍鏡檢查白細胞數(shù)≤5個/HP。（7）患兒的監(jiān)護人均簽署了知情同意書。排除標準：（1）由其他疾病引起的急性腹瀉。（2）合并重癥營養(yǎng)不良。（3）合并有心血管、肝、腎或者造血系統(tǒng)疾病。（4）合并中度脫水或者低血容量性休克。（5）大便細菌培養(yǎng)致病菌陽性。本臨床研究項目均經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核批準執(zhí)行。

1.2 方法

1.2.1 病毒檢測 均采用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶的鏈反應（RT-PCR）法，RV、HuCV、AdeV和AstV的引物，均來自于高度保守堿基序列，根據(jù)美國生物醫(yī)學信息中心已發(fā)布的RV、HuCV、AdeV和AstV基因序列設計引物，各型基因PCR引物及測序由賽默飛世爾科技有限公司所提供，RT-PCR反應系體的試劑盒購自賽默飛世爾科技有限公司。

1.2.2 心肌酶及同工酶檢測 肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和乳酸脫氫酶（LDH）檢測：儀器使用日立7070全自動生化分析儀，試劑使用日立原裝試劑。

1.2.3 標本采集 （1）血清標本采集，入院后治療前，所有患兒均于清晨抽取空腹靜脈血15 mL，置于37℃靜置醫(yī)用恒溫水浴箱30 min，接著置于低速常溫離心儀上3 500 r/min離心15 min，然后提取血清，最后置于-20℃醫(yī)用低溫箱備用。（2）大便采集標本，采集自然排出新鮮的糞便，不可混人尿液，糞便盛器應潔凈干燥，用無菌棉簽取中央部分糞便或黏液膿血部分2～5 g置于培養(yǎng)瓶內(nèi)或50～100μL水樣便置于采樣管內(nèi)，蓋緊塞子送檢。

1.3 觀察指標

（1）分析嬰幼兒病毒性腹瀉病原構(gòu)成情況。（2）比較分析嬰幼兒病毒性腹瀉各組的心肌酶及同工酶濃度水平。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗。計數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 嬰幼兒病毒性腹瀉病原構(gòu)成情況

四種病毒（RV、HuCV、AdeV和AstV）陰性的占30.14%為陰性組，陽性率占69.86%為陽性組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。其中陽性組的RV占35.98%為RV組，HuCV占12.51%為HuCV組，AdeV占4.38%AdeV組，AstV占2.01%為AstV組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.2 分析嬰幼兒病毒性腹瀉各組的心肌酶及同工酶濃度水平

陽性組的CK、CK-MB、AST和LDH的濃度水平均高于陰性組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；RV組、HuCV組、AdeV組與AstV組的CK、CK-MB、AST和LDH的濃度水平均高于陰性組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；RV組、HuCV組、AdeV組與AstV組之間的CK、CK-MB、AST和LDH的濃度水平，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 嬰幼兒病毒性腹瀉各組的心肌酶及同工酶濃度水平（±s）U/L

表2 嬰幼兒病毒性腹瀉各組的心肌酶及同工酶濃度水平（±s）U/L

組別陽性（n=765）HRV（n=558）HuCV（n=137）AdeV（n=48）AstV（n=22）陰性（n=330）t陽性與陰性比較值P陽性與陰性比較值t HRV與陰性比較值P HRV與陰性比較值t HuCV與陰性比較值P HuCV與陰性比較值t AdeV與陰性比較值P AdeV與陰性比較值t AstV與陰性比較值P AstV與陰性比較值CK 139.8±14.6 132.3±16.4 137.5±13.3 136.3±14.3 135.8±15.8 65.5±10.1 38.342 0.001 35.435 0.001 36.321 0.001 37.123 0.001 38.342 0.001 CK-MB 36.3±3.7 38.6±5.3 34.6±6.4 32.7±5.8 37.8±3.4 12.7±3.7 30.421 0.001 29.345 0.001 28.453 0.001 30.123 0.001 29.645 0.001 AST 96.1±11.4 98.5±12.3 92.1±10.7 93.1±13.5 97.1±12.5 36.8±7.9 35.645 0.001 34.765 0.001 35.321 0.001 35.645 0.001 35.354 0.001 LDH 246.7±18.8 253.3±19.9 261.3±17.9 256.9±16.6 243.3±17.6 124.5±17.4 46.922 0.001 45.443 0.001 44.565 0.001 46.922 0.001 44.224 0.001

3 討論

5歲以下嬰幼兒急性感染性腹瀉是發(fā)病率高且流行比較廣泛的傳染病，每年＞210萬嬰幼兒死于腹瀉疾病及其相關(guān)并發(fā)癥，對5歲以下嬰幼兒的健康危害嚴重也給國家和家庭帶來了比較沉重的經(jīng)濟負擔［5］。本研究對1 095例＜5歲腹瀉患兒的研究中，四種病毒（RV、HuCV，AdeV和AstV）陽性檢出率為69.86%，不論在發(fā)達國家還是在發(fā)展中國家，嬰幼兒病毒急性腹瀉都是非常普遍的，是許多國家5歲以下嬰幼兒死亡的主要病因，也是我國危害5歲以下嬰幼兒健康的主要疾?。?］，5歲以下嬰幼兒急性腹瀉病的主要病原為病毒，引起病毒性腹瀉最常見的病原主要包括RV、HucV、AdeV和AstV，這跟馬文超［7］研究結(jié)果一致，其中HuCV的陽性檢出率最高超過35%，高于葛桂芝等［8］研究結(jié)果，其次為RV與呂紅霞等［9］研究結(jié)果一致，這提示HuCV和RV一直是本地區(qū)引起嬰幼兒腹瀉的主要病原體。這也與于秋麗等［10］研究結(jié)果有差別，而與葉新華等［11］研究結(jié)果基本相一致，RV和HucV廣泛存在于我們的自然界，其傳染性非常強，患兒和隱性帶菌患兒均為傳染源，RV和HucV隨著患兒的糞便排出體外，都可以經(jīng)糞、口途徑傳播或者呼吸道傳播，患兒既可以散發(fā)也可以暴發(fā)流行。RV和HucV主要在患兒的十二指腸粘膜細胞中增殖，使患兒的十二指腸黏膜表面的絨毛變短或者鈍化，致使患兒有十二指腸表皮細胞內(nèi)a-半乳糖甘酶減少，從而影響患兒的腸道的正常吸收能力，使腸道內(nèi)呈高滲狀態(tài)，最終引起急性腹瀉。AdeV是80年代發(fā)現(xiàn)的一種嬰幼兒腹瀉病原，在世界范圍內(nèi)均有分布，發(fā)達國家檢出率為4%～10%，在發(fā)展中國家發(fā)生率為2%～3%。本課題研究中，AdeV檢出率為4.38%，與盛偉松等［12］報道基本一致。AstV也是引起5歲以下嬰幼兒急性腹瀉的重要病原之一，國外AstV感染檢 出率為2%～16%，本研究AstV的檢出率為2.01%，低于孫亞萍等［13］（4.2%）的報道，盡管本研究中發(fā)現(xiàn)，AdeV、AstV感染率遠遠低于RV及HuCV病毒，但因其可以散發(fā)，也可引起暴發(fā)，故應繼續(xù)觀察并評估AdeV和AstV的5歲以下嬰幼兒急性腹瀉患者。5歲以下嬰幼兒急性腹瀉病的主要病原與不同地域的環(huán)境因素密切相關(guān)，5歲以下嬰幼兒是預防病毒性腹瀉的重點人群，其流行毒株的多樣性和多變性，這提示研究者根據(jù)地區(qū)不同流行特點，因地制宜地對疾病進行有針對性的防治顯得尤為重要。

本研究結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，病毒性5歲以下嬰幼兒急性腹瀉患兒CK、CK-MB、AST和LDH的濃度水平均高于非病毒性5歲以下嬰幼兒急性腹瀉患者，同時，本研究結(jié)果顯示各類病毒性急性腹患兒心肌損傷差異無統(tǒng)計學意義，其主要原因：（1）5歲以下嬰幼兒處于生長發(fā)育階段，機體抵抗及防御能力不完善，經(jīng)病毒感染后，容易降低該患兒的抵抗及防御能力，更容易損傷腸道以外的其他臟器，容易導致病情繼續(xù)惡化。（2）病毒是侵犯患兒心肌細胞，病毒能分泌的毒素導致心肌細胞被侵害。（3）患兒高熱、頻繁嘔吐脫水后導致機體電解質(zhì)等物質(zhì)代謝紊亂，脫水情況越嚴重，心肌缺氧越重，繼續(xù)加重心肌組織代謝紊亂程度。（4）因心肌組織缺血與缺氧，引起心肌組織的氧自由基大量外放，并增強脂質(zhì)過氧化反應，導致心肌細胞損傷，累及患者心血管系統(tǒng)，最終損害患兒心肌。因此，心肌酶及同工酶除了可反映心肌細胞損害的發(fā)生及進展情況，同時，可將心肌酶及同工酶作為毒性腸炎嚴重程度的判定指標。RV、HucV、AdeV和AstV是一類全身性感染性病原體，除了侵犯患兒胃腸道外，還能引起患兒的心肌損害與病毒性心肌炎，甚至引發(fā)患兒心源性休克而猝死。故在臨床上治療病毒性5歲以下嬰幼兒急性腹瀉患兒時有必要同時作心肌酶及同工酶檢測和心電圖檢查，特別是心肌酶及同工酶的檢測，及早發(fā)現(xiàn)心肌損害，對心肌損害的患兒作心功能監(jiān)護及相應治療。

綜上所述，RV和HuCV是＜5歲急性腹瀉患兒主要病原，需要針對性地做好預防控制措施，RV、HuCV、AdeV和AstV病毒性急性腹瀉的患兒均伴有不同程度心肌損害，故在治療時應作心肌酶和同工酶的監(jiān)測。