鹿廣玲，田 鑫，王蘭周，張建永

(1.遵義醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，貴州 遵義 563099；2.遵義醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)藥理教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室暨特色民族藥教育部國(guó)際合作聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，貴州 遵義 563099；3.貴州天地藥業(yè)有限責(zé)任公司，貴州 興義 562400)

直立式聚丙烯輸液袋作為常用的藥品包裝材料，采用全密閉輸液方式[1]；可直立擺放[2]；重量輕且不易破碎；生產(chǎn)成本低[3]；性質(zhì)穩(wěn)定，無毒無味且廢物處理不產(chǎn)生毒害[4]。較之其他包裝材料更受醫(yī)務(wù)人員青睞。然而直立式聚丙烯輸液袋中所采用的聚丙烯材料在成型、儲(chǔ)存和使用過程中一旦受到金屬離子、熱、光照等外界因素影響，易發(fā)生老化降解，從而導(dǎo)致其物理化學(xué)性能下降，因此在生產(chǎn)過程中通常會(huì)加入抗氧劑以延緩其老化過程[5-7]。但是隨之而來的聚丙烯材料在與藥品長(zhǎng)期直接接觸過程中，抗氧劑會(huì)存在不同程度向藥品遷移溶出的現(xiàn)象[8]，抗氧劑本身有明確的生物毒性會(huì)影響藥物的性質(zhì)，甚至對(duì)人體有害[9]。依據(jù)國(guó)食藥監(jiān)注[2012]267號(hào)《化學(xué)藥品注射劑與塑料包裝材料相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》，對(duì)于抗氧劑必須進(jìn)行藥品與包裝材料的相容性研究，以證實(shí)包裝材料與制劑具有良好的相容性。歐洲藥典抗氧劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定單個(gè)抗氧劑含量不超過0.3%,且抗氧劑總量不超過0.3%[10]。所以需要嚴(yán)格控制直立式聚丙烯輸液袋中抗氧劑的含量，以保證和提高產(chǎn)品質(zhì)量。

本實(shí)驗(yàn)參照歐洲藥典9.0版等[11-12]采用高效液相色譜法建立了直立式聚丙烯輸液袋中抗氧劑1010、抗氧劑168 的含量測(cè)定方法，并用于產(chǎn)品檢測(cè)，為采用直立式聚丙烯輸液袋包裝的注射液等提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 UV-1900紫外可見分光光度計(jì)(日本島津公司)；LC-2010AHT高效液相色譜儀(日本島津公司)；SPD-20A高效液相色譜儀(日本島津公司)；AE240天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；FST18000二級(jí)反滲透裝置(山東淄博華周制藥設(shè)備有限責(zé)任公司)；KQ-500DA型超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.1.2 試劑 抗氧劑1010對(duì)照品(CAS號(hào)：6683-19-8，批號(hào)：M08A7D12647，純度：98%)和抗氧劑168對(duì)照品(CAS號(hào)：31570-04-4，批號(hào)：K09A7Y128 36，純度：98%)均由源葉生物提供；甲醇、乙腈、四氫呋喃為色譜純；其他試劑均為分析純；水為純化水。

1.1.3 樣品 直立式聚丙烯輸液袋由生產(chǎn)企業(yè)貴州天地藥業(yè)有限責(zé)任公司提供，其原料聚丙烯樹脂216由中國(guó)石油天然氣股份有限公司蘭州石化分公司提供(塑料助劑含抗氧劑1010與抗氧劑168)。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Welch XB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-四氫呋喃-水(63∶30∶7)；流速：1.5 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；進(jìn)樣體積：20 μL。

1.2.2 空白溶劑制備 取四氫呋喃和乙腈適量，配制成體積比為1∶1的混合液，即得。

1.2.3 對(duì)照品儲(chǔ)備溶液的制備 精密稱取抗氧劑1010、168適量，以空白溶劑稀釋制成每1 mL分別約含2.4 mg的混合溶液，即得。

1.2.4 對(duì)照品溶液的制備 精密量取10 mL對(duì)照品儲(chǔ)備液于100 mL容量瓶中，以空白溶劑定容，即得。

1.2.5 供試品溶液的制備 直立式聚丙烯輸液袋剪碎(或聚丙烯樹脂)取2.0 g置于250 mL圓底燒瓶中。向圓底燒瓶中加入80 mL甲苯作為萃取溶劑，煮沸回流1.5 h后停止加熱并放置于室溫條件下冷卻到60 ℃，之后邊攪拌邊向圓底燒瓶中加入120 mL甲醇，混合后用砂芯漏斗過濾，用適量甲苯和甲醇混合液(40∶60)沖洗玻璃棒、圓底燒瓶和漏斗，合并濾液與洗液并稀釋到250 mL，搖勻。取50 mL濾液于蒸發(fā)皿中60 ℃水浴揮干，用適量空白溶劑溶解殘余物，并定容至5.0 mL，即得。

2 結(jié)果

2.1 專屬性 取空白溶劑、對(duì)照品溶液、供試品溶液按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果供試品溶液與對(duì)照品溶液色譜峰的保留時(shí)間基本一致，抗氧劑1010(5.9 min)、抗氧劑168(15.9 min)，且分離度均大于1.5，理論塔板數(shù)均大于7 000?？瞻兹軇┰谙鄳?yīng)的保留時(shí)間內(nèi)未檢測(cè)到色譜峰，本法具有較好的專屬性(見圖1)。

A：空白溶劑；B：對(duì)照品溶液；C：直立式聚丙烯輸液袋供試品；D：聚丙烯樹脂供試品；標(biāo)識(shí)峰中：1：抗氧劑1010；2：抗氧劑168。

2.2 線性關(guān)系 取抗氧劑1010、168對(duì)照品適量，精密稱定，加空白溶劑溶解并分別稀釋成每1 mL中約含0.48 mg的溶液作為抗氧劑1010、168的線性儲(chǔ)備溶液。將線性儲(chǔ)備溶液依次稀釋成抗氧劑1010濃度為2.362、4.724、47.236、236.180、283.416 μg/mL；抗氧劑168濃度為4.724、9.447、47.236、236.180、283.416 μg/mL的線性溶液。按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。表1的結(jié)果顯示：抗氧劑1010與抗氧劑168分別在2.362～283.416 μg/mL，4.724～283.416 μg/mL濃度范圍內(nèi)，呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

表1 抗氧劑1010、168的回歸方程與相關(guān)系數(shù)

2.3 檢測(cè)限與定量限 取“1.2.4”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液加空白溶劑稀釋，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，當(dāng)信噪比S/N約為4∶1時(shí)，抗氧劑1010、抗氧劑168 的檢測(cè)限分別為0.945、1.890 μg/mL。當(dāng)信噪比S/N約為10∶1時(shí)，抗氧劑1010、抗氧劑168的定量限分別為2.362、4.724 μg/mL。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批供試品(批號(hào)：D25210612)6份，按“1.2.5”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。抗氧劑1010和抗氧劑168含量測(cè)定結(jié)果的RSD分別為2.14%和3.71%。

2.5 中間精密度試驗(yàn) 在不同時(shí)間，由不同人員分別精密稱取同一批供試品(批號(hào)：D25210612)6份，按“1.2.5”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件分別用LC-2010AHT高效液相色譜儀(日本島津公司)與SPD-20A高效液相色譜儀(日本島津公司)進(jìn)樣，記錄色譜圖?？寡鮿?010和抗氧劑168兩次含量測(cè)定結(jié)果的RSD分別為2.22%和3.57%，表明方法具有良好的準(zhǔn)確度和精密度。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 將“1.2.5”項(xiàng)下供試品溶液放置于室溫下，分別在0、6、12、18、24、30、48 h按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果抗氧劑1010和抗氧劑168峰面積的RSD分別為3.25%和4.37%，抗氧劑1010和抗氧劑168溶液在48 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗(yàn) 取上述重復(fù)性考察項(xiàng)下的供試品，分別加入“1.2.3”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備溶液適量，按“1.2.5”項(xiàng)下方法操作，分別制成低、中、高三個(gè)系列混合溶液。每個(gè)濃度平行制備3份，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。計(jì)算樣品回收率(見表2)。

表2 抗氧劑1010、168的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.8 樣品的測(cè)定 取9個(gè)不同批號(hào)的直立式聚丙烯輸液袋，按“1.2.5”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定峰面積并計(jì)算含量，單個(gè)抗氧劑含量均不超過0.10%,且抗氧劑總量均不超過0.15%(見表3)。

表3 直立式聚丙烯輸液袋中抗氧劑含量測(cè)定結(jié)果(%)

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 歐洲藥典中對(duì)檢測(cè)波長(zhǎng)沒有明確的規(guī)定，本研究分別取一定質(zhì)量濃度的抗氧劑1010、抗氧劑168以及其混合溶液在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)抗氧劑1010在276 nm處、抗氧劑168在271 nm處、混合溶液在276 nm處有強(qiáng)吸收帶。參考文獻(xiàn)[13-15]本實(shí)驗(yàn)取“1.2.4”，“ 1.2.5”項(xiàng)下對(duì)照品溶液和供試品溶液分別在270、276、280 nm處進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明：在280 nm處，測(cè)得雜質(zhì)峰少，樣品分離度好，更有利于檢測(cè)。故選擇280 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相的選擇 歐洲藥典中流動(dòng)相為乙腈-四氫呋喃-水(60∶30∶10)，本研究分別以乙腈、乙腈-甲醇(1∶1)、甲醇、乙腈-四氫呋喃-水(63∶30∶7)為流動(dòng)相，結(jié)果表明：流動(dòng)相為乙腈-四氫呋喃-水(63∶30∶7)時(shí)，待測(cè)物峰型好，分離度均達(dá)到1.5以上，且出峰時(shí)間適中。故選擇乙腈-四氫呋喃-水(63∶30∶7)為流動(dòng)相。

3.3 樣品處理方法的選擇 本研究以甲苯作為提取溶劑，分別對(duì)供試品超聲1.0、1.5、2.0 h，加熱回流1.0、1.5、2.0 h，結(jié)果表明：采用加熱回流作為提取方法，提取效果更好更完全且加熱回流1.5 h后，待測(cè)物可基本被完全提取。故選擇加熱回流1.5 h作為提取方法。

3.4 聚丙烯輸液袋中抗氧化劑的含量測(cè)定方法 目前對(duì)直立式聚丙烯輸液袋質(zhì)量研究的報(bào)道很少。且經(jīng)聯(lián)機(jī)檢索，未查詢到直立式聚丙烯輸液袋在境外批準(zhǔn)上市的信息。國(guó)內(nèi)直立式聚丙烯輸液袋雖已批準(zhǔn)多年，但未見頒布國(guó)家藥包材標(biāo)準(zhǔn)。本研究可為直立式聚丙烯輸液袋在生產(chǎn)加工過程中加入合理用量的抗氧劑提供參考，使其在提高輸液袋穩(wěn)定性的同時(shí)不會(huì)影響制劑安全。

本文建立了一種測(cè)定直立式聚丙烯輸液袋中抗氧劑1010、168含量的高效液相色譜方法，可為直立式聚丙烯輸液袋的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。