子宮頸癌組織中miR-153和Survivin的表達及其臨床意義

劉淑允

子宮頸癌為常見惡性腫瘤，在臨床具有較高的發(fā)病率，且近年發(fā)病逐漸趨于年輕化。由于子宮頸癌在發(fā)病早期無明顯癥狀，多數(shù)患者經(jīng)臨床檢查確診時已處于中晚期，威脅生命安全[1-2]。臨床應(yīng)探尋更為合理的篩查措施和診斷方式，以盡早檢查出子宮頸癌前病變，保障患者健康及生命安全[3-4]。微小RNA-153(miR-153)為非編碼單鏈RNA分子，參與生物體細胞增殖、凋亡等多種調(diào)控，其異常表達與各種婦科腫瘤的發(fā)生聯(lián)系緊密[5]。而生存素(Survivin)為抗凋亡基因，與人體多數(shù)腫瘤的發(fā)生、預(yù)后有關(guān)[6]。但臨床關(guān)于miR-153與Survivin在子宮頸癌患者癌組織內(nèi)的表達的相關(guān)研究報道較為缺乏，還有待進一步研究?；诖?，本研究以58例子宮頸癌患者為研究對象，分析兩者在子宮頸癌患者癌組織內(nèi)的表達與意義。結(jié)果示下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院2018年3月至2019年3月診治的58例子宮頸癌患者為研究對象，采集所有患者的癌組織(觀察組)與癌旁組織(對照組)。研究經(jīng)醫(yī)學倫理委員會批準。納入標準：患者均經(jīng)病理檢查證實；患者的病歷資料齊全；術(shù)前均未服用抗腫瘤藥物或接受任何放、化療者；患者納入遵從自愿原則，依從性較高，簽署知情同意書。排除標準：存有其他惡性腫瘤者；合并免疫系統(tǒng)病癥者；存在神經(jīng)疾患者；存有肝腎等重要臟器功能嚴重不全者；存有精神疾患或難以進行正常交流者；存有全身性感染者；合并血液系統(tǒng)疾病者。所有患者年齡30～64歲，平均年齡(50.79±2.38)歲；體重指數(shù)18.7～26.9 kg/m2，平均體重指數(shù)(23.57±0.64)kg/m2；腫瘤直徑：≥4 cm 31例，<4 cm 27例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有34例，無24例；臨床分期：20例Ⅰ期，13例Ⅱ期，25例Ⅲ期。

1.2 方法

標本采集：于施行手術(shù)時，取患者的癌組織與癌旁組織標本，以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)法檢測miR-153，以免疫組化法檢測Survivin。檢測方法：(1)RT-PCR法：以RT-PCR法測定轉(zhuǎn)染效果，Trizol法提取組織內(nèi)的總RNA，之后嚴格依據(jù)試劑盒步驟提取核酸，制備逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系，最終以2-ΔΔCt法計算miR-153水平。 (2)免疫組化法：選擇2組的標本予以石蠟切片的制備，以一般方法脫蠟、包埋、切片，把切片置在0.01 mol/L枸櫞酸鈉緩沖液內(nèi)，施以15 min加熱，以此對抗原修復(fù)；取出后以0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)溶液施行3次清洗，加入過氧化氫溶液進行25 min孵育，然后再一次的以PBS溶液清洗5次，加入5%山羊血清，在室溫條件下進行10 min封存，之后滴加一抗在4 ℃冰箱內(nèi)過夜，第2天用PBS清洗3次，滴加二抗，在室溫條件下孵育30 min；二氨基聯(lián)苯胺(DAB)染色，蘇木精復(fù)染，脫水、透明與封固，在鏡下觀察，另外以空白PBS液當成陰性對照。結(jié)果評判：依據(jù)細胞染色程度與染色細胞百分率予以綜合評分，0分：無著色；1分：黃色；2分：棕黃色；3分：黃褐色。依照陽性細胞百分率評分：0分：<10%；1分：≥10%～40%；2分：>40%～70%；3分：>70%。以上兩項得分相加，滿分在2分及以上為高表達，反之為低表達。

1.3 觀察指標

(1)2組miR-153、Survivin表達情況。(2)miR-153、Survivin表達與子宮頸癌患者臨床病理特征關(guān)系。(3)miR-153、Survivin表達與子宮頸癌患者預(yù)后關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 2組miR-153、Survivin表達對比

觀察組miR-153相對表達量低于對照組，Survivin高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組miR-153、Survivin表達對比

2.2 miR-153、Survivin表達與子宮頸癌患者臨床病理特征關(guān)系

miR-153、Survivin表達與患者年齡、腫瘤大小、臨床分期無關(guān)，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

2.3 miR-153、Survivin表達與子宮頸癌患者預(yù)后關(guān)系

Kaplan-Meier結(jié)果顯示：miR-153低表達患者3年生存率低于miR-153高表達者，Survivin高表達患者3年生存率低于Survivin低表達者，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.117、4.203，P=0.043、0.040)。見圖1-2。

3 討論

受病毒感染、女性分娩次數(shù)等影響，子宮頸癌的發(fā)病率呈升高趨勢。子宮頸癌發(fā)病機制較為復(fù)雜，臨床尚未完全明晰，臨床多認為人乳頭瘤病毒(HPV)感染是子宮頸癌發(fā)生獨立危險因素，而抽煙、性生活開始過早等均參與該病的發(fā)生發(fā)展[7-8]。同時，子宮頸癌患病初期無明顯表現(xiàn)，導(dǎo)致多數(shù)患者忽視有關(guān)癥狀，進而錯失最佳治療時機[9-10]。臨床需探尋一快速有效的檢查措施，以提高疾病的早期診斷率，指導(dǎo)臨床施行個體化的治療，以增強病情控制效果。

臨床多項研究表明，基因、蛋白均會參與子宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展[11-12]。miRNA參與多條信號通路的調(diào)控，而miR-153為與腫瘤相關(guān)的miRNA之一[13]。miR-153在乳腺癌、導(dǎo)管腺癌內(nèi)表達均呈顯著降低態(tài)勢，可阻礙癌變細胞的增殖與侵襲，而在結(jié)直腸癌中則為過高表達水平，會間接強化癌變細胞的侵襲水平，促進疾病進展。Survivin屬目前篩選分離的分子量最小、凋亡抑制活性最強的抑制因子，其通過對半胱氨酸蛋白酶Caspase-3與Caspase-7活性予以阻礙，從而發(fā)揮抗凋亡作用，并通過對細胞周期的調(diào)控加速癌變細胞的增殖，在多個腫瘤細胞內(nèi)均呈高表達狀態(tài)[14-15]。但臨床關(guān)于miR-153與Survivin在子宮頸癌內(nèi)的相關(guān)分析研究報道較為缺乏，尚需進一步探究。本研究結(jié)果顯示：觀察組miR-153相對表達量低于對照組，Survivin高于對照組；miR-153、Survivin表達與患者年齡、腫瘤大小、臨床分期無關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；且Kaplan-Meier結(jié)果顯示：miR-153低表達者，Survivin高表達患者3年生存率較低。表明miR-153與Survivin參與子宮頸癌的發(fā)生發(fā)展，且miR-153越低、Survivin越高，則患者的生存率更低。其原因為miR-153有抑癌作用，其表達水平降低可能促使子宮頸癌細胞增殖；Survivin相對高表達會抑制子宮頸癌細胞凋亡，改變細胞周期，促使癌細胞增殖過度，與疾病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。但尚需值得注意的是，本次試驗還存有樣本量較少的局限性，可能會對本試驗結(jié)果精準性構(gòu)成一定干擾。因此，后續(xù)臨床還需持續(xù)完善試驗設(shè)計，不斷擴充樣本量，以此進行更深層次探究，進一步了解miR-153、Survivin與子宮頸癌的關(guān)系，繼而為臨床制定規(guī)范、個體化的診治措施提供更為可靠的指導(dǎo)，以最大程度地提高患者生存率。

表2 miR-153、Survivin表達與子宮頸癌患者臨床病理特征關(guān)系(例，%)

圖1 miR-153低表達者Kaplan-Meier生存曲線圖

圖2 Survivin高表達者Kaplan-Meier生存曲線圖

綜上所述，子宮頸癌患者癌組織內(nèi)的miR-153呈低表達，Survivin呈高表達狀態(tài)，兩項指標均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，且miR-153表達越低，Survivin表達越高，則患者生存率更低，臨床需予以高度重視。