第3、4 代丙型肝炎病毒抗體ELISA 檢測試劑在血站血液檢測中的作用分析

朱曉晨

丙型病毒性肝炎可以通過血液進行傳播,且傳染性較強,HCV 慢性感染能引發(fā)肝臟慢性炎癥壞死與纖維化,少部分患者會發(fā)生肝硬化以及肝細(xì)胞癌(HCC),對患者的身體健康以及生命安全造成了嚴(yán)重影響,隨著當(dāng)下社會逐漸對疾病的認(rèn)知,丙型病毒性肝炎已經(jīng)列為嚴(yán)重的社會與公共衛(wèi)生問題。HCV 1989 年發(fā)現(xiàn),后經(jīng)過深入研究發(fā)現(xiàn)了多種檢測方式［1,2］。國內(nèi)外HCV ELISA 試劑已經(jīng)逐漸完善并廣泛應(yīng)用于臨床診斷,但上述試劑屬于檢查試劑范疇,當(dāng)下國內(nèi)多數(shù)選擇3 代ELISA 試劑對丙型病毒性肝炎進行診斷,盡管第3 代試劑較之第4 代價格較低,但是可能發(fā)生更高的假陽性率以及漏診情況。本研究選擇2 種國產(chǎn)ELISA 試劑對標(biāo)本檢出HCV 陽性樣本采用RIBA 檢測診斷結(jié)果,現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1材料來源 選取2019 年7 月～2020 年7 月本血站無償獻血者中經(jīng)過2 種HCV ELISA 檢測后至少1 種試劑檢測結(jié)果為陽性的樣本150 份。

1.2方法 選擇第3 代(北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司)以及第4 代(珠海麗珠試劑股份有限公司)ELISA 試劑。RIBA 由MP 生物醫(yī)學(xué)公司提供,使用RIBA 對150 份陽性標(biāo)本進行檢測。

2 結(jié)果

2.1HCV ELISA 試劑檢測結(jié)果分析 150 份標(biāo)本中,2 種ELISA 試劑檢測結(jié)果均為陽性的標(biāo)本125 份,1 種試劑檢測結(jié)果陽性的標(biāo)本25 份,其中第3 代ELISA 試劑檢測結(jié)果陽性150 份,第4 代ELISA 試劑檢測結(jié)果陽性125 份。125 份2 種ELISA 試劑檢測結(jié)果均為陽性的樣本經(jīng)過RIBA 驗證,確定陽性樣本120 份,陽性率為96%；20 份第3 代ELISA 試劑單獨檢測結(jié)果陽性的標(biāo)本經(jīng)RIBA 驗證,確定陽性1 份,陽性率為5%(1/20)；5 份第4 代ELISA 試劑單獨檢測結(jié)果陽性的標(biāo)本經(jīng)RIBA 驗證,確定陽性2 份,陽性率為40%(2/5)。說明2 種ELISA 試劑對HCV 檢測均為陽性的檢測準(zhǔn)確率較高。

2.2假陽性與真陽性標(biāo)本的S/CO 值對比 150 份標(biāo)本經(jīng)RIBA 驗證,假陽性標(biāo)本25 份,真陽性標(biāo)本125 份。真陽性標(biāo)本S/CO 值(＞1.0 且≤10.0)高于假陽性標(biāo)本(＞1.0 且≤2.0)。說明對于HCV ELISA 試劑應(yīng)當(dāng)確定S/CO 界限值,小于界限值的標(biāo)本應(yīng)當(dāng)選擇RIBA驗證。

2.3假陽性標(biāo)本的RIBA 條帶分析 影響假陽性結(jié)果出現(xiàn)的RIBA 條帶中,Core 條帶16 條,占比為64%；NS3-1 條帶5 條,占比為20%；NS3-2 條帶2 條,占比為8%；NS4 條帶2 條,占比為8%,無NS5 條帶。說明Core 條帶使ELISA 試驗結(jié)果呈現(xiàn)假陽性的幾率很高,NS5 條帶不會影響ELISA 試驗結(jié)果。

3 討論

HCV 的傳播途徑為血液傳播,并且感染性較強,所以,需要關(guān)注的是如何快速準(zhǔn)確的診斷,其對于患者的治療意義較大［3,4］。關(guān)于引發(fā)肝損害的機制,當(dāng)下認(rèn)定與激活病毒特異性細(xì)胞毒性T 細(xì)胞有關(guān),也有可能是通過非特異性炎性反應(yīng)細(xì)胞產(chǎn)出細(xì)胞因子,尤其是γ 干擾素所導(dǎo)致。丙型肝炎主要的傳播途徑為血液和血制品,導(dǎo)致慢性肝炎或者病情發(fā)展為肝硬化以及肝癌,所以,有必要建立一種對HCV 具有高靈敏度、高特異性以及高穩(wěn)定性的檢測措施,對丙型肝炎感染的早期診斷以及治療意義重大［5］。隨著醫(yī)學(xué)研究的不斷深入,醫(yī)療技術(shù)也隨之更新,檢測方式呈現(xiàn)多元化［6］。在臨床應(yīng)用中,會發(fā)生不同試劑對同一項目的檢查此類情況,但是,其檢測功能和效果并不穩(wěn)定,所以進行對比測試的同時,需要明確和結(jié)果是否一致［7］。在常規(guī)結(jié)果對比當(dāng)中,需要采取確認(rèn)與驗證實驗,還需要對精密度情況進行判定。血液作為珍惜資源,抗-HCV陽性是成品作廢的主要因素,根據(jù)相關(guān)要求,獻血者的血液檢測需要高靈敏度,以此來保證血液的安全性,同時還要有低假陽性率,降低血液浪費量［8,9］。ELISA 是檢測抗-HCV 的主要方法,其優(yōu)勢在于高靈敏度、強特異性以及高自動化程度,并且檢測成本較低［10,11］。但是其缺陷在于可能發(fā)生假陽性結(jié)果,主要原因為標(biāo)本溶血、細(xì)菌感染、長期保存等。在本研究中,在使用第3、4 代ELISA 試劑中,任何一種試劑結(jié)果呈現(xiàn)陽性血液都無法利用于臨床,使得血液報廢,同時獻血者也會被列入黑名單中,無法進行獻血,此類方式盡管可以保證血液安全,同時有浪費資源的缺陷。根據(jù)相關(guān)研究表明,相對于第3 代試劑,第4 代抗-HCV ELISA試劑的優(yōu)點在于有足夠高的靈敏度,能確保血液安全性,同時出現(xiàn)的假陽性更少,能有效提升檢出率,也減少了血液浪費,降低獻血者的流失［12,13］。

綜上所述,HCV ELISA 檢測試劑均存在一定假陽性,尤其是S/CO 值較低的,或者2 種試劑中有1 種試劑呈現(xiàn)陰性結(jié)果,需要考慮是否為HCV 假陽性,同時針對于RIBA 條帶分析發(fā)現(xiàn),Core 條帶會使得ELISA結(jié)果呈現(xiàn)假陽性,為減少不確定結(jié)果,是否將帶條帶Core 報告作為陰性,還需要深入研究。