李芳， 劉小紅， 黃靜， 張耀光， 王志堅(jiān)

西南大學(xué) 水產(chǎn)學(xué)院/淡水魚(yú)類(lèi)資源與生殖發(fā)育教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/水產(chǎn)科學(xué)重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,重慶 400715

維氏氣單胞菌(Aeromonasveronii)為革蘭氏陰性菌,廣泛分布于各種水生環(huán)境中,可導(dǎo)致魚(yú)類(lèi)發(fā)生細(xì)菌性敗血癥(motile aeromonas septicaemia,MAS).據(jù)報(bào)道,維氏氣單胞菌感染翹嘴鲌(Culteralburnus)[1]、 虹鱒(Oncorhynchusmikiss)[2]、 泥鰍(Misgurnusanguillicaudatus)[3]、 鱖魚(yú)(Sinipercachuatsi)[4]、 雜交鱘(Acipenserbaerii♀×Acipenserschrenckii♂)[5]、 斑點(diǎn)叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)[6]、 黃顙魚(yú)(Pelteobagrusfulvidraco)[7]、 克氏原螯蝦(Procambarusclarkia)[8]等水產(chǎn)動(dòng)物,可直接導(dǎo)致宿主發(fā)病或死亡．

根據(jù)病癥,MAS大致分為兩種類(lèi)型： 急性出血型敗血癥,表現(xiàn)為出血、 彌散性壞死和組織水腫[9-10]； 慢性潰瘍型綜合癥,以真皮潰瘍形成為典型特征[11-12].病癥表現(xiàn)往往與致病菌攜帶的毒力因子密切相關(guān),而維氏氣單胞菌的毒力因子主要有溶血素HlyA,氣溶素AerA,熱不穩(wěn)定型細(xì)胞興奮性腸毒素Alt,熱穩(wěn)定型細(xì)胞腸毒素Ast,極性鞭毛蛋白FlaA,側(cè)鞭毛蛋白LafA,絲氨酸蛋白酶AspA,細(xì)菌3型分泌系統(tǒng)內(nèi)膜成分AscV和AexT,纖毛蛋白BfpA和BfpG,σ54依賴(lài)性轉(zhuǎn)錄因子VasH,志賀樣病毒Stx-1和Stx-2,外膜蛋白OmpA和脂肪酶Lip等[13-16]．

胭脂魚(yú)(Myxocyprinusasiaticus)是亞口魚(yú)科魚(yú)類(lèi)在亞洲分布的唯一單型屬、 種,其體型別致,顏色艷麗,具有“亞洲美人魚(yú)”的美稱(chēng),極具研究和觀(guān)賞價(jià)值.近年來(lái),由于胭脂魚(yú)野外資源驟減,已被列為我國(guó)二級(jí)保護(hù)動(dòng)物[17].雖然胭脂魚(yú)人工繁殖已經(jīng)成功,但養(yǎng)殖過(guò)程中病害頻發(fā)成為限制其健康養(yǎng)殖的重要因素.據(jù)報(bào)道,維氏氣單胞菌感染可造成胭脂魚(yú)嚴(yán)重患病,進(jìn)而導(dǎo)致巨大的經(jīng)濟(jì)損失[18],但至今有關(guān)胭脂魚(yú)感染維氏氣單胞菌的組織病理研究還未見(jiàn)報(bào)道．

我們已在患病胭脂魚(yú)組織中成功分離到1株強(qiáng)致病性維氏氣單胞菌BBAv1[19],該菌株將被運(yùn)用于本研究的人工感染實(shí)驗(yàn)中.通過(guò)觀(guān)察A.veronii感染后胭脂魚(yú)腎(中腎、 頭腎)、 脾臟和肝臟的顯微和超微結(jié)構(gòu)變化,組化染色觀(guān)察腸道在感染前后黏液細(xì)胞數(shù)量和類(lèi)型變化,結(jié)合黑色素巨噬細(xì)胞中心(Melano-macrophage centres,MMC)在組織中的變化情況來(lái)評(píng)價(jià)各組織病理?yè)p傷程度以及在抗A.veronii感染中的免疫功能發(fā)揮狀況,以此為胭脂魚(yú)感染A.veronii的組織病理學(xué)和抗菌免疫反應(yīng)研究提供參考．

1 材料與方法

1.1 人工感染實(shí)驗(yàn)魚(yú)

實(shí)驗(yàn)所用胭脂魚(yú)(體質(zhì)量為20.20±1.92 g,全長(zhǎng)為126.80±3.90 mm)購(gòu)買(mǎi)自眉山市東坡區(qū)一養(yǎng)殖場(chǎng).實(shí)驗(yàn)魚(yú)養(yǎng)殖于室內(nèi)循環(huán)水系統(tǒng)中,水溫控制在28±0.50 ℃,溶氧7.00±0.50 mg/L,光周期為12L∶12D.在每天的9： 00和17： 00分別投喂1次商品飼料,每次投喂量為魚(yú)體質(zhì)量的1%,投喂2 h后用虹吸吸走糞便和殘餌,同時(shí)換水1/4.暫養(yǎng)2周后選擇體表無(wú)傷、 狀態(tài)良好的個(gè)體開(kāi)始感染實(shí)驗(yàn).將保存于-80 ℃的維氏氣單胞菌毒力菌株BBAv1進(jìn)行菌體復(fù)蘇,后利用分光光度法和菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定并調(diào)節(jié)菌液濃度為2.0×108cfu/mL(即24 h的半致死濃度)[19].實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)選取20尾胭脂魚(yú)作為攻毒對(duì)象,腹腔注射200 μL菌液； 對(duì)照組隨機(jī)選取20尾胭脂魚(yú)注射相同劑量的無(wú)菌PBS(磷酸鹽緩沖溶液).注射完成后,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組10尾/組分別養(yǎng)殖于獨(dú)立的循環(huán)水系統(tǒng)中等待取材,期間記錄實(shí)驗(yàn)魚(yú)發(fā)病時(shí)間和死亡情況．

1.2 取材

注射感染后,選取5尾處于瀕死狀態(tài)(沉于缸底,呼吸緩慢,失去刺激反應(yīng)能力)的胭脂魚(yú),用MS-222(100 mg/L)麻醉后進(jìn)行解剖取材.將取出的腎(中腎、 頭腎)、 脾臟、 肝臟和腸道(按長(zhǎng)度等分為前腸、 中腸和后腸)用波恩氏液固定,經(jīng)梯度酒精脫水,二甲苯透明,石蠟包埋后,進(jìn)行常規(guī)石蠟切片,厚度為5 μm,HE染色后,在Nikon DXM1200顯微鏡下拍照.與此同時(shí),另取一部分腸道用卡諾氏液固定,后用于A(yíng)B-PAS染色．

為了觀(guān)察組織亞顯微結(jié)構(gòu)層面的病理變化,將中腎、 頭腎、 脾臟和肝臟用預(yù)冷于-4 ℃的2.5%戊二醛固定,固定好的樣本經(jīng)0.1 mol/L(pH 值為7.4)磷酸緩沖液漂洗3次,后經(jīng)1%四氧化鋨固定2 h,經(jīng)梯度酒精脫水,丙酮置換,環(huán)氧樹(shù)脂浸透、 包埋后,制成60 nm的超薄切片,醋酸鈾和枸櫞酸鉛染色后,用H-7500型電鏡觀(guān)察,Gatan-780 CCD拍照．

1.3 組織病理特征定量與半定量描述

用于組織顯微結(jié)構(gòu)觀(guān)察的每個(gè)樣本取5張切片,每張切片隨機(jī)選取10個(gè)視野(每個(gè)視野面積為400×300 μm2)進(jìn)行觀(guān)察,即每個(gè)樣本均進(jìn)行50個(gè)視野的觀(guān)察.使用Image-Pro Plus 6.0圖像測(cè)量軟件,對(duì)各組織觀(guān)察視野中所含MMC分別進(jìn)行計(jì)數(shù)和面積測(cè)量,并計(jì)算單位面積中MMC所占比值[20].另外,根據(jù)Sun等[21]的方法對(duì)各組織病理程度進(jìn)行評(píng)估,即根據(jù)某一病理現(xiàn)象在所觀(guān)察切片視野中出現(xiàn)的頻率高低,將病理程度劃分為無(wú)病理現(xiàn)象(-,0%),輕度(+,≤25%),中度(++,25%～50%)和重度(+++,≥50%)．

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

2 結(jié)果

2.1 死亡率統(tǒng)計(jì)

實(shí)驗(yàn)組在維氏氣單胞菌注射后6 h開(kāi)始陸續(xù)發(fā)病,統(tǒng)計(jì)至感染后24 h,實(shí)驗(yàn)組死亡率為48.66%,顯著高于對(duì)照組(p<0.05),且實(shí)驗(yàn)組死亡大多發(fā)生在感染后14～24 h之間．

2.2 組織MMC響應(yīng)情況

未受感染時(shí),脾臟中單個(gè)MMC面積最大(p<0.05),中腎中MMC數(shù)量最多,相對(duì)面積最大(p<0.05)(表1).維氏氣單胞菌感染后,各組織中MMC變化明顯,表現(xiàn)為中腎、 頭腎、 脾臟和肝臟中的單個(gè)MMC面積分別增大了1.25,1.20,1.13和1.20倍； 中腎、 頭腎和脾臟中MMC數(shù)量分別增加了1.76,1.73和2.20倍； 中腎、 頭腎和脾臟中MMC占比分別增大了2.12,2.96和3.92倍.總體來(lái)看,中腎、 頭腎和脾臟中MMC各指標(biāo)變化趨勢(shì)基本一致,而肝臟在感染前后其MMC數(shù)量和占比均未發(fā)生顯著變化.值得一提的是,脾臟中MMC數(shù)量和占比在感染前后變化最大．

表1 維氏氣單胞菌感染對(duì)胭脂魚(yú)中腎、 頭腎、 脾臟和肝臟MMC指標(biāo)的影響

2.3 組織病理程度評(píng)價(jià)

維氏氣單胞菌感染后,胭脂魚(yú)各組織出現(xiàn)了一系列相同的病理特征(表2),如組織出血、 溶血,內(nèi)皮細(xì)胞損傷,組織壞死以及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)等.同時(shí),一些特殊的病理特征也出現(xiàn)在不同的組織中,如MMC響應(yīng)僅出現(xiàn)在中腎、 頭腎、 脾臟和中腸組織中,細(xì)胞空泡化僅出現(xiàn)在肝臟組織中．

表2 維氏氣單胞菌感染后,胭脂魚(yú)中腎、 頭腎、 脾臟、 肝臟和腸道病理程度評(píng)價(jià)(n=5)

2.4 維氏氣單胞菌感染對(duì)腎、 脾、 肝和腸組織結(jié)構(gòu)的影響

2.4.1 中腎

胭脂魚(yú)中腎組織包含了腎小管、 腎小球以及排泄管等結(jié)構(gòu),這些結(jié)構(gòu)之外為腎間質(zhì),腎間質(zhì)主要包含了一些擬淋巴組織,其間可見(jiàn)淋巴細(xì)胞、 粒細(xì)胞、 巨噬細(xì)胞等,MMC在HE染色下呈棕黃色至棕褐色,形態(tài)并不規(guī)則(圖1a).維氏氣單胞菌感染后,腎小球腫脹變形,腎間質(zhì)大量出血并伴隨著溶血,局部組織壞死,大量淋巴細(xì)胞和MMC浸潤(rùn)組織(圖1b)．

2.4.2 頭腎

頭腎組織中包含了大量的紅細(xì)胞、 淋巴細(xì)胞、 粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,且組織局部可觀(guān)察到粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的聚集區(qū)(圖1c).維氏氣單胞菌感染后,頭腎組織發(fā)生急性出血,且出血部位被大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),同時(shí)可見(jiàn)局部組織壞死(圖1d)．

2.4.3 脾臟

胭脂魚(yú)脾臟可分為明顯的紅髓和白髓,紅髓主要由各個(gè)發(fā)育階段的紅細(xì)胞組成,白髓主要包含了淋巴細(xì)胞、 粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,組織中MMC多見(jiàn)于橢圓體和血管周?chē)?圖1e).維氏氣單胞菌感染后,脾臟出現(xiàn)出血、 溶血和組織壞死現(xiàn)象,與此同時(shí),紅細(xì)胞退化變性也被觀(guān)察到,主要表現(xiàn)為胞質(zhì)淺染呈淡紅色(圖1f)．

2.4.4 肝臟

胭脂魚(yú)肝臟細(xì)胞可分為兩種： 明細(xì)胞和暗細(xì)胞,組織中可見(jiàn)肝血竇和膽小管等結(jié)構(gòu),組織部分區(qū)域有些許小空泡(5.68±0.13 μm)(圖1g).維氏氣單胞菌感染后,肝細(xì)胞核發(fā)生固縮,組織局部血細(xì)胞凝集,大片肝組織嚴(yán)重空泡化(8.07±0.12 μm)(圖1h)．

a圖中RT為腎小管,MMC為黑色素巨噬細(xì)胞中心,Go為腎小球； b圖中Er為大量紅細(xì)胞,*為溶血現(xiàn)象； c圖中L為淋巴細(xì)胞,G為粒細(xì)胞； d圖中*為溶血現(xiàn)象,曲線(xiàn)圖包圍為血鐵黃素沉積； e圖中Rp為紅髓,Wp為白髓； f圖中MM為感染后脾臟組織中的黑色素巨噬細(xì)胞,MMC為黑色素巨噬細(xì)胞中心； g圖中He為肝細(xì)胞,BD為膽小管,HS肝血竇； h圖中顯示肝細(xì)胞嚴(yán)重空泡化．圖1 維氏氣單胞菌感染前、 后胭脂魚(yú)腎、 脾、 肝的組織結(jié)構(gòu)

2.4.5 腸道

胭脂魚(yú)腸道可大致分為前腸、 中腸和后腸,結(jié)構(gòu)相似,均由粘膜層、 粘膜下層、 肌肉層和漿膜層組成,粘膜層可被進(jìn)一步劃分為粘膜上層和固有層.顯然,胭脂魚(yú)前腸粘膜層最高(196.81±5.37 μm),中腸(129.75±8.98 μm)和后腸(126.23±9.11 μm)次之.維氏氣單胞菌感染后,腸道各部粘膜上層腫脹、 壞死,固有層和粘膜下層大量出血,淋巴細(xì)胞聚集于粘膜下層.與此同時(shí),肌肉層細(xì)胞腫脹或部分纖維化,漿膜層發(fā)生水腫(圖2).另外,腸道AB-PAS染色顯示胭脂魚(yú)腸道中包含4種類(lèi)型的黏液細(xì)胞(圖3)： Ⅰ型(紅色,中性),Ⅱ型(藍(lán)色,酸性),Ⅲ型(紫紅色,中性偏酸性)和Ⅳ型(藍(lán)紫色,酸性偏中性).從黏液細(xì)胞類(lèi)型來(lái)看,前腸和后腸以Ⅱ型黏液細(xì)胞為主,中腸以Ⅰ型黏液細(xì)胞為主.從黏液細(xì)胞數(shù)量來(lái)看,中腸黏液細(xì)胞最多,前腸和后腸次之.維氏氣單胞菌感染前后,中腸黏液細(xì)胞類(lèi)型和數(shù)量均未發(fā)生顯著變化,而前腸Ⅲ型和后腸Ⅳ型黏液細(xì)胞數(shù)量變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表3)．

表3 維氏氣單胞菌感染對(duì)胭脂魚(yú)前腸、 中腸和后腸中黏液細(xì)胞的影響

a圖中MF為粘膜層,TP為固有層,MC為黏液細(xì)胞,SSE為復(fù)層扁平上皮； b圖中SSE為腫脹的復(fù)層扁平上皮,TP為固有層,L為浸潤(rùn)粘膜下層的淋巴細(xì)胞； c圖中G為粒細(xì)胞,L為淋巴細(xì)胞,M為肌肉層； d圖中Er為粘膜下層中的大量紅細(xì)胞,SSE為腫脹的復(fù)層扁平上皮,TP為固有層； e圖中SSE為復(fù)層扁平上皮,MF為粘膜層,TP為固有層,SM為粘膜下層,M為肌肉層； f圖中SSE為壞死的復(fù)層扁平上皮,TP為出血的固有層,SM為粘膜下層．圖2 維氏氣單胞菌感染前、 后胭脂魚(yú)腸道的組織結(jié)構(gòu)

4種類(lèi)型的黏液細(xì)胞： Ⅰ型(紅色,中性),Ⅱ型(藍(lán)色,酸性),Ⅲ型(紫紅色,中性偏酸性)和Ⅳ型(藍(lán)紫色,酸性偏中性)．圖3 維氏氣單胞菌感染前、 后胭脂魚(yú)腸道中的黏液細(xì)胞

2.5 維氏氣單胞菌感染對(duì)腎、 脾和肝超微結(jié)構(gòu)的影響

2.5.1 中腎

腎小球中的內(nèi)皮細(xì)胞緊貼系膜細(xì)胞基膜內(nèi)側(cè)進(jìn)行胞質(zhì)延伸,并在遠(yuǎn)端形成了許多微窗孔,足細(xì)胞胞質(zhì)也黏貼在系膜細(xì)胞基膜外側(cè),其胞質(zhì)形成了許多不規(guī)則的指狀突起(稱(chēng)為足突),上述結(jié)構(gòu)形成了腎小球過(guò)濾裝置(內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)微窗孔-系膜細(xì)胞基膜-足細(xì)胞胞質(zhì)足突)(圖4a).維氏氣單胞菌感染后,系膜細(xì)胞基膜腫脹,內(nèi)皮細(xì)胞形成的微窗孔消失,足細(xì)胞大量增生,足突大量融合,導(dǎo)致腎小球過(guò)濾裝置結(jié)構(gòu)嚴(yán)重變形(圖4b)．

2.5.2 頭腎

大量飽含顆粒物質(zhì)的中性粒細(xì)胞(含低電子密度的較大圓形顆粒)和嗜酸性粒細(xì)胞(含高電子密度的不規(guī)則顆粒)分散于頭腎組織中(圖4c).維氏氣單胞菌感染后,內(nèi)皮細(xì)胞嚴(yán)重壞死,細(xì)胞間隙增大,水腫明顯,巨噬細(xì)胞功能活躍,表現(xiàn)為內(nèi)含較大的吞噬泡(圖4d)．

2.5.3 脾臟

脾臟中可見(jiàn)形態(tài)完好的紅細(xì)胞、 網(wǎng)狀細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞(圖4e).維氏氣單胞菌感染后,網(wǎng)狀細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞腫脹壞死,組織中出現(xiàn)了大量的嗜酸性粒細(xì)胞(圖4f)．

2.5.4 肝臟

肝細(xì)胞中可見(jiàn)大量的線(xiàn)粒體、 糖原、 粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、 脂滴以及狄氏間隙中大量的肝細(xì)胞胞質(zhì)形成的微絨毛(圖4g).維氏氣單胞菌感染后,肝細(xì)胞中糖原消失,線(xiàn)粒體腫脹,髓樣小體增多,狄氏間隙遭到嚴(yán)重破壞,表現(xiàn)為微絨毛大量消失(圖4h)．

a圖中Mc為系膜細(xì)胞,Pe為內(nèi)皮細(xì)胞,Pc為足細(xì)胞,Pp為足細(xì)胞足突,Fd為腎小球過(guò)濾裝置,Bc為腎小囊； b圖中Pc為增生的足細(xì)胞； c圖中Np為包含顆粒物質(zhì)的中性粒細(xì)胞,Ep為嗜酸性粒細(xì)胞； d圖中有含大型吞噬泡的巨噬細(xì)胞； e圖中Er為紅細(xì)胞,L為淋巴細(xì)胞； f圖中En為腫脹壞死的內(nèi)皮細(xì)胞,R為網(wǎng)狀細(xì)胞,Ep為增多的嗜酸性粒細(xì)胞； g圖中Mi為線(xiàn)粒體,G為糖原,RER為粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng),LD為脂滴,DS為狄氏間隙,V為肝細(xì)胞微絨毛； h圖中DS為遭到破壞的狄氏間隙．圖4 維氏氣單胞菌感染前、 后胭脂魚(yú)腎、 脾、 肝的超微結(jié)構(gòu)

3 結(jié)論

3.1 維氏氣單胞菌感染的組織病理特征

眾多研究表明,維氏氣單胞菌感染將造成宿主產(chǎn)生一系列明顯的臨床病癥,如體表潰瘍、 皮膚發(fā)紅、 鰭條腐爛、 內(nèi)臟充血等,組織病理變化則主要為細(xì)胞壞死、 空泡化、 組織局部溶血、 炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等[1,5-6].總體而言,維氏氣單胞菌感染造成的病理特征基本相似,只是隨著感染劑量和時(shí)間以及毒力因子數(shù)量的增加,組織病理嚴(yán)重程度也隨之增加[2-4,7]．

3.2 組織中MMC的作用

魚(yú)類(lèi)組織中的黑色素巨噬細(xì)胞中心(MMC)不僅含有黑色素巨噬細(xì)胞(MM),還含有一定量的淋巴細(xì)胞[19],因此與哺乳類(lèi)的脾臟生發(fā)中心(splenic germinal centre,SGC)功能相似,對(duì)于漿細(xì)胞和記憶B細(xì)胞的增殖至關(guān)重要[22].研究發(fā)現(xiàn)MMC變化往往與感染性疾病、 慢性炎癥、 紅細(xì)胞代謝和組織損傷密切相關(guān)[23-24].與之類(lèi)似,本研究中維氏氣單胞菌感染導(dǎo)致胭脂魚(yú)腎臟、 脾臟組織中MMC大小、 數(shù)量均發(fā)生顯著變化,因此我們可以推測(cè)MMC在抗菌感染中可能發(fā)揮著重要作用.與此同時(shí),我們也觀(guān)察到感染前后肝臟中MMC變化不明顯,而這可能與肝臟中巨噬細(xì)胞遷移速度較慢有關(guān)[25].另外,由于脾臟中MMC在感染前后變化程度最大,因此我們也認(rèn)為脾臟中的MMC可以作為評(píng)價(jià)機(jī)體生理狀態(tài)的敏感標(biāo)記[26]．

3.3 病理現(xiàn)象背后的意義

中腎內(nèi)腎小球和腎小管等結(jié)構(gòu)和組織的完好對(duì)于其功能發(fā)揮至關(guān)重要.已有研究指出腎小球中的足細(xì)胞非常敏感,是諸多有毒物質(zhì)的靶細(xì)胞[27].本研究中維氏氣單胞菌感染使得足細(xì)胞增生、 足突大量融合,這可能是細(xì)菌毒力因子作用的結(jié)果.另外,腎小球?yàn)V過(guò)裝置變形在一定程度上意味著中腎對(duì)原尿的過(guò)濾功能會(huì)受損,但本研究中并未發(fā)現(xiàn)腎小管發(fā)生明顯變化,這可能與腎小管較強(qiáng)的自我修復(fù)能力有關(guān)[28-29].同樣,本研究發(fā)現(xiàn)MMC在中腎組織中較為常見(jiàn),且在細(xì)菌感染前后變化明顯,據(jù)MMC所具備的免疫功能推測(cè)胭脂魚(yú)中腎是具備一定免疫功能的,這在中腎轉(zhuǎn)錄組研究中得到證實(shí)[30]．

魚(yú)類(lèi)頭腎不僅是重要的免疫器官,同時(shí)也是造血和內(nèi)分泌調(diào)節(jié)器官[31].本研究中維氏氣單胞菌感染造成頭腎組織結(jié)構(gòu)嚴(yán)重?fù)p傷,這無(wú)疑會(huì)影響其正常功能的發(fā)揮.魚(yú)類(lèi)脾臟在造血、 B細(xì)胞分化和抗體生成等方面發(fā)揮著重要作用[32].本研究發(fā)現(xiàn)維氏氣單胞菌感染后脾臟中淋巴細(xì)胞、 MMC和粒細(xì)胞大量浸潤(rùn)組織,從組織學(xué)上也反映出特異性免疫反應(yīng)和非特異性免疫反應(yīng)都參與了機(jī)體的抗菌活動(dòng)．

環(huán)境污染物如鎘、 鋅、 銅、 氟等均可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)對(duì)象肝臟空泡化[33-35].本研究中維氏氣單胞菌感染也導(dǎo)致了胭脂魚(yú)肝臟空泡化,這說(shuō)明肝臟空泡化可能是肝臟應(yīng)激的一個(gè)普遍現(xiàn)象.另外,研究發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞中糖原消失、 線(xiàn)粒體腫脹,這似乎說(shuō)明肝臟糖代謝發(fā)生了紊亂； 而肝臟狄氏間隙結(jié)構(gòu)遭到嚴(yán)重破壞則可能是導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷甚至壞死的主要原因[36]．

黏液細(xì)胞中含有的水解酶、 免疫球蛋白和溶菌酶等物質(zhì)對(duì)于其消化吸收以及免疫功能的發(fā)揮非常重要,根據(jù)其內(nèi)含物質(zhì)的不同,黏液細(xì)胞可大致分為4種類(lèi)型[37].本研究發(fā)現(xiàn)Ⅱ型黏液細(xì)胞在前腸和后腸中占據(jù)主要優(yōu)勢(shì),這可能與其消化吸收和殺菌作用有關(guān)[38],而中腸中Ⅰ型黏液細(xì)胞數(shù)量最多,可能主要起到潤(rùn)滑腸道的作用.但總體而言,維氏氣單胞菌感染前后僅胭脂魚(yú)前腸Ⅲ型和后腸Ⅳ型黏液細(xì)胞數(shù)量發(fā)生了顯著變化,這可能是因?yàn)轲ひ杭?xì)胞的產(chǎn)生是一個(gè)為時(shí)較長(zhǎng)的過(guò)程,或者維氏氣單胞菌感染造成了腸道嚴(yán)重?fù)p傷以至于產(chǎn)生黏液細(xì)胞的功能受損,而本研究發(fā)現(xiàn)胭脂魚(yú)腸道在細(xì)菌感染后損傷嚴(yán)重,因此我們更傾向于第二種解釋?zhuān)?/p>

對(duì)致病菌而言,其毒力表現(xiàn)與之?dāng)y帶的毒力因子類(lèi)型和數(shù)量密切相關(guān)[39].本研究使用的毒力菌株BBAv1[7]攜帶的AerA和HlyA是導(dǎo)致宿主組織出血的關(guān)鍵毒力因子[40],而AerA,Alt,HlyA和Ast則與腸炎密切相關(guān)[41].總而言之,本研究諸多病理現(xiàn)象出現(xiàn)的原因均可由該菌株攜帶的毒力因子來(lái)解釋?zhuān)?/p>