劉燕，高春辰，，厲勵(lì)，馮清華，吳明華，李文磊

1 南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 南京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，南京210023；2 東部戰(zhàn)區(qū)空軍醫(yī)院；3 南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院/江蘇省中醫(yī)院

最新的流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，每年約有1 500 萬(wàn)人遭受腦血管病的折磨，其中約80%為缺血性腦卒中患者［1］。由于條件限制，很大一部分缺血性腦卒中患者因錯(cuò)過(guò)最佳溶栓或取栓時(shí)間窗而導(dǎo)致嚴(yán)重后遺癥［2］，這些患者肢體運(yùn)動(dòng)功能障礙發(fā)病率高達(dá)90%［3］，即使經(jīng)過(guò)康復(fù)治療，60%的患者依舊存在持續(xù)性的肢體功能障礙［4］，嚴(yán)重影響其生活自理能力，還可能導(dǎo)致卒中后焦慮、抑郁、社會(huì)疏離等多種并發(fā)癥［5］，給患者及其家庭和社會(huì)都帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。已有研究［6］表明，通過(guò)促進(jìn)疾病條件下受損的神經(jīng)元芽生或再生成為新的軸突，重塑神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，或通過(guò)誘導(dǎo)未分化的神經(jīng)元細(xì)胞向病灶周圍遷移，代替壞死神經(jīng)元建立新的神經(jīng)環(huán)路，可顯著改善缺血性腦卒中的預(yù)后。誘導(dǎo)由神經(jīng)元遷移、軸突發(fā)芽再生、側(cè)支形成、新突觸形成介導(dǎo)的神經(jīng)組織再生重塑是缺血性腦卒中長(zhǎng)期有效的治療方法，但是臨床尚無(wú)療效確切的藥物，因此探索促進(jìn)軸突生長(zhǎng)的藥物及其機(jī)制是現(xiàn)代神經(jīng)醫(yī)學(xué)面臨的緊要問(wèn)題。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，梓醇在保護(hù)神經(jīng)、促進(jìn)軸突生長(zhǎng)進(jìn)而改善缺血性腦卒中癥狀方面具有一定的積極作用。梓醇能夠保護(hù)大腦神經(jīng)系統(tǒng)，抑制大鼠缺血再灌注后神經(jīng)元凋亡，從而減少大腦損傷［7］，促進(jìn)大鼠皮質(zhì)脊髓束重塑和軸突芽生，同時(shí)可促進(jìn)皮質(zhì)神經(jīng)元軸突增長(zhǎng)，進(jìn)而促進(jìn)偏癱患側(cè)肢體感覺(jué)及其活動(dòng)能力的恢復(fù)。以上研究提示梓醇對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)作用，同時(shí)對(duì)神經(jīng)再生修復(fù)和肢體運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)具有促進(jìn)作用，但具體的作用機(jī)制尚不明確。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)PTEN、mTOR 是控制軸突內(nèi)在生長(zhǎng)能力的關(guān)鍵信號(hào)通路，而OPN、IGFR 與PTEN 的相互作用能夠調(diào)控mTOR 信號(hào)通路，進(jìn)而激活軸突內(nèi)在生長(zhǎng)能力，以促進(jìn)軸突的發(fā)芽和生長(zhǎng)［8］。SH-SY5Y 細(xì)胞在形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理功能方面與神經(jīng)細(xì)胞有共同之處，在ATRA 誘導(dǎo)下SH-SY5Y可成功分化為成熟神經(jīng)元，適合觀察細(xì)胞及軸突的生長(zhǎng)變化，故常用于神經(jīng)元保護(hù)、軸突生長(zhǎng)和突觸連接等方面的研究［9-10］。氧糖剝奪是在細(xì)胞水平上模擬缺血/低氧的刺激模型。通過(guò)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)條件的改變，包括將細(xì)胞放入低氧箱加之更換無(wú)糖的培養(yǎng)基，模擬細(xì)胞在缺血/低氧情況下的損傷，細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生壞死、凋亡、自噬等現(xiàn)象。缺血性卒中是供應(yīng)大腦的大動(dòng)脈栓塞，而大腦主要?jiǎng)用}的閉塞會(huì)引發(fā)下游微血管的繼發(fā)血栓形成［11-12］，這些血栓會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)血管血流不暢、灌注不足，氧糖量減少。氧糖剝奪模擬體內(nèi)腦缺血過(guò)程，而其治療的關(guān)鍵是時(shí)間窗內(nèi)溶栓、取栓恢復(fù)血液的再灌注，但是再灌注會(huì)致使原缺血腦組織發(fā)生繼發(fā)性損傷。如神經(jīng)細(xì)胞凋亡增加、活性氧產(chǎn)生增加，產(chǎn)生喪失機(jī)能、加速老化、免疫機(jī)能衰退的嚴(yán)重后果，以上稱為腦缺血再灌注損傷，復(fù)氧復(fù)糖則模擬再灌注的過(guò)程。所以氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖模型常用于腦卒中缺血再灌注的離體實(shí)驗(yàn)。2021年8月—2022年6月，本研究通過(guò)建立氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖損傷SH-SY5Y 細(xì)胞模型，觀察梓醇對(duì)模型細(xì)胞是否有修復(fù)作用，并探討了其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞、藥物、試劑及儀器 SH-SY5Y 細(xì)胞由中國(guó)科學(xué)院干細(xì)胞庫(kù)提供。梓醇（純度≥97%，貨號(hào)：A0215，成都曼思特生物科技有限公司）。實(shí)驗(yàn)試劑：CCK-8 試劑盒（貨號(hào)：KGP902，凱基生物）；0.25%Trypsin-EDTA（貨號(hào)：25200056，美國(guó)Gibco 公司）；MEM/F12 完全培養(yǎng)基（貨號(hào)：ZQ-1205，上海中喬新舟生物科技有限公司）；ATRA（美國(guó)Sigma 公司）；兔源抗IGF1（貨號(hào)：182408，英國(guó)Abcam 公司）、兔源抗GAP43（貨號(hào)：DF7766，中國(guó) Affinity 公司）、兔源抗p-S6、β-Ⅲ-tubulin、IGFR、P-IGFR（貨號(hào)分別為4857、5568、9750、3024，美國(guó)CST 公司）、小鼠源抗NeuN、mTOR、GAPDH、兔源抗OPN、PTEN、羊抗小鼠二抗、CoraLite594 抗小鼠二抗、CoraLite488 抗兔二抗（貨號(hào)分別為66836、66888、60004、22952、22034、SA00013-7、SA00013-2，中國(guó) Proteintech 公司）、羊抗兔二抗（BOSTER）。實(shí)驗(yàn)儀器：三氣培養(yǎng)箱（美國(guó)Nuaire 公司）、倒置相差顯微鏡（日本Olympus 公司）、熒光倒置顯微鏡（日本Nikon 公司）、激光共聚焦顯微鏡（德國(guó)Zeiss 公司）、金屬水浴鍋（德國(guó)GFL 公司）、低溫離心機(jī)（美國(guó)Thermo 公司）、化學(xué)發(fā)光儀（美國(guó)BIO-RAD 公司）、酶標(biāo)儀（美國(guó)BIOTEK 儀器有限公司）。

1.2 SH-SY5Y 細(xì)胞的分組、氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖細(xì)胞損傷模型的建立、梓醇的加入 將SH-SY5Y 細(xì)胞分為梓醇組、模型組、誘導(dǎo)組、對(duì)照組。對(duì)照組：SHSY5Y細(xì)胞不做任何處理；誘導(dǎo)組：用ATRA誘導(dǎo)SHSY5Y 細(xì)胞72 h，將其誘導(dǎo)為成熟神經(jīng)元；模型組：ATRA 誘導(dǎo)72 h 后，將完全培養(yǎng)基換成無(wú)糖的EBSS溶液置于三氣培養(yǎng)箱（氧氣1%，二氧化碳5%，氮?dú)?4%）4 h，氧糖剝奪結(jié)束后換回完全培養(yǎng)基，復(fù)氧12 h；梓醇組：細(xì)胞經(jīng)模型組同樣處理后，加入含不同濃度梓醇（50、100、200 μmol/L）的完全培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)72 h。經(jīng)ATRA 誘導(dǎo)SH-SY5Y 分化3 d后，出現(xiàn)顯著的形態(tài)學(xué)改變，表現(xiàn)為神經(jīng)元的特點(diǎn)，突起充分伸展，維持較長(zhǎng)的長(zhǎng)度。SH-SY5Y 經(jīng)NeuN（神經(jīng)元的特異核蛋白）、β-Ⅲ-tubulin（神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)蛋白）抗體染色，陽(yáng)性率達(dá)95%以上。提示在ATRA 誘導(dǎo)下，SH-SY5Y 可成功分化為成熟神經(jīng)元細(xì)胞（圖1）。

SH-SY5Y 經(jīng)ATRA 誘導(dǎo)后經(jīng)氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖0、0.5、1、1.5、2、4、6、8 h后，細(xì)胞的存活率分別為100%、87.25% ± 7.27%、67.50% ± 3.11%、70.25% ± 4.50%、64.50% ± 3.42%、58.00% ±6.48%、45.50% ± 1.29%、41.50% ± 3.00%，細(xì)胞的存活率呈時(shí)間依賴性遞減，細(xì)胞在4 h 達(dá)到58%（P＜0.0001），此時(shí)既對(duì)細(xì)胞造成一定的損傷，又保證大部分的細(xì)胞存活，符合后期給藥觀察的條件，所以確定4 h為后期實(shí)驗(yàn)的最佳造模時(shí)間。

1.3 細(xì)胞活力的檢測(cè) 采用CCK-8 法。取上述各組對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的神經(jīng)細(xì)胞SH-SY5Y 以1×104/mL 接種于96 孔板，100 μL/孔，待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)結(jié)束后，在每孔加入10 μL CCK-8 溶液與100 μL 完全培養(yǎng)基的混合液，置于37 ℃恒溫箱繼續(xù)培養(yǎng)3 h，反應(yīng)結(jié)束后，使用酶標(biāo)儀于490 nm 波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度值。

1.4 細(xì)胞遷移、穿越能力的觀察 采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)。取模型組及梓醇組細(xì)胞，待細(xì)胞匯合度達(dá)到80%～90%后，用無(wú)菌的100 μm 槍頭沿直尺在皿底進(jìn)行劃痕，PBS 清洗1 遍后，分別于處理后0 、48 h 在顯微鏡下拍照。以劃痕兩個(gè)邊緣為界，使用Image J 軟件測(cè)量?jī)蓚€(gè)邊緣之間的面積，取均值。

注：圖A 為ATRA 誘導(dǎo)3 d 后SH-SY5Y 細(xì)胞的形態(tài)；圖B 為ATRA 誘導(dǎo)3 d 后采用β-III-tubulin、NeuN 進(jìn)行免疫熒光染色的SH-SY5Y 細(xì)胞（熒光倒置顯微鏡，×200）。

1.5 細(xì)胞軸突長(zhǎng)度的測(cè)算 采用免疫熒光染色法。將對(duì)照組、ATRA 誘導(dǎo)組、模型組、梓醇組細(xì)胞接種于共聚焦小皿，培養(yǎng)結(jié)束后，免疫熒光固定液固定細(xì)胞20 min，PBST 浸洗，加入山羊血清封閉60 min，去除血清封閉液，利用β-Ⅲ-tubulin、NeuN抗體進(jìn)行免疫熒光染色，于4 ℃孵育過(guò)夜。用PBST洗凈一抗后，同時(shí)加入CoraLite594 抗小鼠、CoraLite488抗兔二抗稀釋液常溫避光孵育1 h，用PBST洗凈二抗后，加入含DAPI 的抗免疫熒光淬滅液，等待5 min，在激光共聚焦顯微鏡下觀察并收集圖像，并使用Image J測(cè)量軸突長(zhǎng)度，取均值。

1.6 細(xì)胞中GAP43、OPN、p-IGFR、PTEN、mTOR、p-S6蛋白的檢測(cè) 采用Western blotting 法。收集誘導(dǎo)組、模型組、梓醇組細(xì)胞，用含苯甲基磺酰氟（PMSF）和蛋白酶抑制的RIPA 裂解液提取蛋白，采用BCA法測(cè)定蛋白濃度。SDS-PAGE 凝膠電泳條件：80 V、30 min，120 V、60 min。轉(zhuǎn)膜條件：250 mA 恒流電轉(zhuǎn)90 min，在冰上完成，使用脫脂奶粉常溫封閉1 h。封閉結(jié)束后，加入稀釋后的GAP43、OPN、p-IGFR、PTEN、mTOR、p-S6、GAPDH、β-actin 一抗4 ℃孵育過(guò)夜。洗凈一抗，加入二抗，常溫孵育2 h。洗凈二抗，最后用超敏ECL 發(fā)光液顯影，使用Image J 軟件進(jìn)行圖像分析。結(jié)果以各目的蛋白與內(nèi)參蛋白相對(duì)表達(dá)量的比值來(lái)表示。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS26.0、Graphpad Prism 9 軟件。正態(tài)分布分析采用Kolmogorovsmirnov 檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，多組之間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組SH-SY5Y 細(xì)胞存活率比較 梓醇50 μmol/L 組、梓醇100 μmol/L 組、梓醇200 μmol/L組、模型組、誘導(dǎo)組、對(duì)照組SH-SY5Y 細(xì)胞存活率分別為74.10% ± 6.40%、68.50% ± 6.39%、69.9% ±1.37%、51.47% ± 6.98%、107.66% ± 6.15%、100%。與對(duì)照組相比，誘導(dǎo)組存活率升高（t=12.36，P＜0.0001）；與誘導(dǎo)組相比，模型組存活率降低（t=10.45，P＜0.0001）；不同濃度梓醇組存活率均有升高（t值分別為4.136、3.113、4.496，P均＜0.05），各濃度組之間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 各組SH-SY5Y 細(xì)胞形態(tài)及軸突長(zhǎng)度比較 經(jīng)β-Ⅲ-tubulin 免疫熒光染色后，對(duì)照組細(xì)胞體圓潤(rùn)，軸突較短，胞體與胞體之間幾乎沒(méi)有軸突連接。誘導(dǎo)組細(xì)胞軸突較長(zhǎng)并且相互交織，形成神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)；與誘導(dǎo)組細(xì)胞相比，模型組細(xì)胞數(shù)量減少，胞體扁平，軸突回縮；與模型組比較，梓醇組神經(jīng)元數(shù)量增多，軸突長(zhǎng)度獲得一定的恢復(fù)。梓醇50 μmol/L 組、梓醇100 μmol/L 組、梓醇200 μmol/L 組、模型組、誘導(dǎo)組、對(duì)照組軸突長(zhǎng)度分別為（93.78 ± 8.66）、（91.22 ± 10.97）、（88.77 ± 8.68）、（42.99 ± 5.72）、（110.97 ± 9.8）、（39.71 ± 5.73）μm，與對(duì)照組相比，誘導(dǎo)組軸突長(zhǎng)度延長(zhǎng)；與誘導(dǎo)組相比，模型組軸突長(zhǎng)度縮短（t=21.59，P＜0.001）；不同濃度梓醇組神經(jīng)元軸突長(zhǎng)度均延長(zhǎng)（t分別為16.97、13.68、13.18，P均＜0.01），而不同濃度梓醇組之間比較，P＞0.05。

2.3 梓醇組、模型組SH-SY5Y 細(xì)胞遷移、軸突穿越能力觀察 48 h 后，梓醇50 μmol/L 組、梓醇100 μmol/L 組、梓醇200 μmol/L 組、模型組細(xì)胞劃痕面積分別為（275.56 ± 16.98）、（311.16 ± 3.87）、（237.12 ± 10.85）、（343.74 ± 11.18）μm2。與模型組相比，不同濃度梓醇組48 h 后的劃痕面積均?。╰分別為4.742、3.892、9.674，P均＜0.05），不同濃度梓醇組之間比較，P＞0.05。

2.4 各組SH-SY5Y 細(xì)胞中GAP43、OPN、p-IGFR、PTEN、mTOR、p-S6蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 與誘導(dǎo)組比較，模型組PTEN 相對(duì)表達(dá)量升高（P＜0.05），OPN降低（P＜0.05）；與模型組比較，不同濃度梓醇組GAP43、OPN、p-IGFR、mTOR 及其下游效應(yīng)分子p-S6 蛋白相對(duì)表達(dá)量均升高，PTEN 蛋白相對(duì)表達(dá)量降低（P均＜0.05），詳見(jiàn)表1。

表1 各組GAP43、OPN、p-IGFR、PTEN、mTOR、p-S6蛋白相對(duì)表達(dá)量比較（±s）

表1 各組GAP43、OPN、p-IGFR、PTEN、mTOR、p-S6蛋白相對(duì)表達(dá)量比較（±s）

注：與誘導(dǎo)組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別梓醇50 μmol/L 組梓醇100 μmol/L組梓醇200 μmol/L組模型組誘導(dǎo)組p-S6 2.26 ± 0.30**3.25 ± 0.26**3.70 ± 0.31**0.61 ± 0.14 1 GAP43 1.36 ± 0.01**1.18 ± 0.08*1.05 ± 0.03 0.94 ± 0.10 1 OPN 0.80 ± 0.01*1.03 ± 0.04**1.23 ± 0.06**0.64 ± 0.01##1 p-IGFR 1.81 ± 0.05 2.04 ± 0.08*2.07 ± 0.03*1.75 ± 0.02 1 PTEN 0.70 ± 0.03*0.73 ± 0.12*0.49 ± 0.08*1.24 ± 0.10#1 mTOR 1.65 ± 0.23**1.26 ± 0.13*1.21 ± 0.19*0.82 ± 0.03 1

3 討論

缺血性腦卒中發(fā)病原因主要在于動(dòng)脈粥樣硬化閉塞或血栓形成造成大腦區(qū)域供血不足，導(dǎo)致不可逆性的神經(jīng)元損傷和死亡，致使患者出現(xiàn)多種神經(jīng)功能缺損癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量［13］。在神經(jīng)功能恢復(fù)過(guò)程中，代償性軸突再生發(fā)芽、側(cè)支形成、新突觸形成及神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)再連接發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。因此，通過(guò)增強(qiáng)神經(jīng)再生重塑能力改善神經(jīng)功能缺損癥狀，是缺血性腦卒中的重要治療策略［14-15］。

中藥地黃因較好的臨床療效被廣泛應(yīng)用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病中，在缺血性腦卒中治療的常用中藥方中，如地黃飲子、羚羊角湯、左歸丸等都有地黃［16］，尤其既病之后“髓海不足”導(dǎo)致偏癱等后遺癥纏綿難愈，地黃填精益髓的功效發(fā)揮著尤為重要的作用［17］。梓醇是從地黃中提取的一種環(huán)烯醚萜類化合物，為地黃的主要化學(xué)成分［18］。越來(lái)越多的研究表明梓醇是治療腦缺血［19-20］、糖尿病腦病［21］和癡呆等老年神經(jīng)退行性疾病的潛在藥物，但梓醇作用的靶點(diǎn)和機(jī)制尚不明確，仍需進(jìn)一步研究和探索。

mTOR 是調(diào)控神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)在生長(zhǎng)能力的關(guān)鍵信號(hào)通路，其下游蛋白p-S6 磷酸化表達(dá)水平可間接表征mTOR 活性，mTOR/p-S6 活性的增強(qiáng)與缺血性腦損傷后軸突再生能力密切相關(guān)。研究表明，梓醇能通過(guò)調(diào)控mTOR 信號(hào)通路來(lái)促進(jìn)大鼠軸突生長(zhǎng)和皮質(zhì)脊髓束芽生重塑，促進(jìn)坐骨神經(jīng)損傷修復(fù)，縮小梗死中心范圍，并促進(jìn)梗死周邊血管新生。PTEN 是抑制細(xì)胞內(nèi)在生長(zhǎng)能力的重要分子靶點(diǎn)，成年后高水平的PTEN 能夠抑制mTOR 通路，使成熟神經(jīng)元軸突芽生和再生能力顯著下降。研究［22-23］表明，抑制PTEN 表達(dá)，重新激活mTOR 通路，能夠促進(jìn)視神經(jīng)軸突和脊髓損傷后皮質(zhì)脊髓束軸突的顯著芽生、再生以及功能恢復(fù)。新近的研究［24］也提示，mTOR 通路相關(guān)蛋白OPN 在神經(jīng)再生修復(fù)過(guò)程中發(fā)揮重要作用，通過(guò)OPN 和IGF1聯(lián)合應(yīng)用，可實(shí)現(xiàn)視神經(jīng)軸突的顯著芽生和長(zhǎng)距離再生，促進(jìn)視覺(jué)功能恢復(fù)。本課題組前期研究也發(fā)現(xiàn)，OPN 可激活mTOR 通路激發(fā)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)在生長(zhǎng)能力，促使皮質(zhì)脊髓束軸突發(fā)芽和側(cè)支形成，促進(jìn)運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)［25］。進(jìn)一步的機(jī)制研究表明，OPN 能夠聚集、調(diào)動(dòng)細(xì)胞表面IGFR 受體，并誘導(dǎo)其磷酸化成為p-IGFR，進(jìn)而激活mTOR 通路，同時(shí)降低PTEN 表達(dá)，以減輕其對(duì)mTOR 通路的抑制作用，使細(xì)胞內(nèi)在生長(zhǎng)能力被充分調(diào)動(dòng)，細(xì)胞活力、遷移能力顯著增強(qiáng)，從而達(dá)到促進(jìn)軸突發(fā)芽和生長(zhǎng)作用的。

本研究使用ATRA將未分化的SH-SY5Y細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟的神經(jīng)元細(xì)胞，此時(shí)軸突相對(duì)較長(zhǎng)，便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)觀察，并使用神經(jīng)元特異性標(biāo)志蛋白NeuN 進(jìn)行鑒定，氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖模擬體內(nèi)腦缺血再灌注的過(guò)程，氧糖剝奪4 h、復(fù)氧復(fù)糖24 h，細(xì)胞死亡率達(dá)40%左右。研究證實(shí)梓醇可顯著增強(qiáng)經(jīng)氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖損傷后的SH-SY5Y 細(xì)胞活力，促進(jìn)軸突生長(zhǎng)，并提高其遷移、穿越能力。進(jìn)一步的機(jī)制研究顯示，梓醇可顯著促進(jìn)OPN、p-IGFR、mTOR 及其下游效應(yīng)分子p-S6 蛋白的表達(dá)，并抑制負(fù)性調(diào)控因子PTEN 蛋白的表達(dá)水平，提示梓醇可能通過(guò)調(diào)控OPN/p-IGFR/mTOR 信號(hào)軸參與對(duì)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)在生長(zhǎng)能力的調(diào)控，細(xì)胞活力、遷移能力顯著增強(qiáng)，提高健側(cè)神經(jīng)元向病灶側(cè)遷移，健側(cè)軸突生長(zhǎng)至患側(cè)，形成新的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)連接，縮小半暗帶的面積進(jìn)而發(fā)揮其對(duì)缺血缺氧條件下病灶神經(jīng)元再生修復(fù)的促進(jìn)作用，本研究結(jié)果還顯示，加入50 μmol/L、100 μmol/L、200 μmol/L 梓醇對(duì)SHSY5Y 細(xì)胞的活力，遷移、穿越能力及促進(jìn)軸突的生長(zhǎng)能力相當(dāng)，三者之間的比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，從效價(jià)方面考慮，將采用50 μmol/L 梓醇進(jìn)行后續(xù)相關(guān)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。

綜上所述，梓醇可能通過(guò)OPN/p-IGFR/mTOR 信號(hào)軸，增強(qiáng)氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖損傷后SH-SY5Y 細(xì)胞的活力，提高其遷移、穿越能力，并促進(jìn)軸突的生長(zhǎng)，進(jìn)而發(fā)揮其對(duì)缺血缺氧條件下神經(jīng)元的保護(hù)，神經(jīng)細(xì)胞的遷移及軸突再生修復(fù)作用。