QuEChERS-氣相色譜法測定茶葉中格螨酯殘留量

◎王同珍，柯麗群，張泳儀

（廣東省中鼎檢測技術(shù)有限公司，廣東 東莞 523000）

我國是茶葉生產(chǎn)和消費大國，規(guī)?；铇涞姆N植離不開農(nóng)藥的使用，因此難以避免農(nóng)藥殘留問題[1-4]?！妒称钒踩珖覙?biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763-2021）中規(guī)定了茶葉中106 項農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)[5]，包括格螨酯的最大殘留量，然而目前尚未有格螨酯檢測的相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)?；诖?，本文建立一種基于QuEChERS 前處理技術(shù)結(jié)合氣相色譜測定茶葉中格螨酯殘留的檢測方法，以供相關(guān)人員參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

普通茶葉，市場采購。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)格螨酯（純度≥99.5%，德國DR.Ehrenstorfer 公司）；正己烷、丙酮、乙腈（色譜純，美國Merck 公司）；無水硫酸鎂（優(yōu)級純，天津科密歐）；醋酸鈉（優(yōu)級純，天津大茂）；乙二胺-N-丙基硅烷（PSA，40～63 μm，上海安譜）；0.22 μm有機(jī)濾膜（天津津滕公司）實驗室用水為Milli-Q超純水；乙腈（色譜純，美國Sigma 公司）。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 7890B 氣相色譜儀（美國安捷倫公司）；BSA224S 電子天平（精度為0.000 1 g，美國賽多利斯公司）；METTLERMS105 電子天平（精度為0.000 01 g，美國梅特勒公司）；VX-Ⅲ多管渦旋振蕩器（安簡科技公司）；M64 高通量平行濃縮儀（萊伯泰科公司）；GTR16-2 高速冷凍離心機(jī)（北京時代北利公司）。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品前處理

將茶葉樣品放入樣品粉碎機(jī)中粉碎，樣品全部過20 目的標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)篩，得到均勻的茶葉樣品。稱取2.5 g試樣于50 mL 塑料離心管，加10 mL 水靜置30 min，加入10 mL 乙腈、6 g 硫酸鎂、1.5 g 醋酸鈉，劇烈振蕩1 min 后，6 500 r·min-1離心3 min，吸取6 mL 上清液到含900 mg 硫酸鎂及150 mgPSA 的15 mL 離心管中，渦旋混勻1 min。6 500 r·min-1離心3 min，準(zhǔn)確吸取2 mL 上清液于15 mL 離心管中，氮吹濃縮至近干，1 mL 丙酮復(fù)溶，過0.22 μm 有機(jī)濾膜，供GCECD 儀器分析。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1 mg·mL-1）：稱取10 mg 格螨酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（精確至0.000 01 g）于10 mL 容量瓶，用正己烷定容至刻度，混勻，避光-18 ℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)中間液（5 μg·mL-1）：準(zhǔn)確移取格螨酯儲備液（1 mg·mL-1）125 μL 到25 mL 容量瓶，正己烷定容至刻度，混勻，避光-18 ℃保存。

基質(zhì)工作液：稱取不含格螨酯的茶葉陰性樣品2.5 g試樣于50 mL 塑料離心管，加10 mL 水靜置30 min，加入10 mL 乙腈、6 g 硫酸鎂、1.5 g 醋酸鈉，劇烈振蕩1 min 后，6 500 r·min-1離心3 min，吸取6 mL 上清液到含900 mg 硫酸鎂及150 mg PSA 的15 mL 離心管中，渦旋混勻1 min。6 500 r·min-1離心3 min，準(zhǔn)確吸取2 mL 上清液于15 mL 離心管中，氮吹濃縮至近干，加入1 mL 相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液復(fù)溶，過微孔濾膜，配制成0.005 μg·mL-1、0.010 μg·mL-1、0.020 μg·mL-1、0.050 μg·mL-1、0.100 μg·mL-1、0.200 μg·mL-1、0.500 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3.3 儀器條件

檢測器：Agilent 7890B（ECD）；色譜柱：Agilent 19091J-413 HP-5（30 m×320 μm，0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度：280 ℃；進(jìn)樣量：1 μL；柱箱升溫程序：130 ℃（0.5 min）→40 ℃（1.0 min）→220 ℃（1.0 min）→25 ℃（1.0 min）→300 ℃（1.0 min）；載氣流量：2 mL·min-1；檢測器溫度：340 ℃。

1.3.4 計算公式

試樣中格螨酯含量的計算公式為

式中：x 為試樣中格螨酯的含量，mg·kg-1；c 為從基質(zhì)曲線中得到的被測樣液中格螨酯的溶液濃度，μg·mL-1；v 為試樣溶液的定容體積，mL；m 為試樣的稱取質(zhì)量，g；f 為試樣的稀釋倍數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 試樣前處理的選擇

茶葉樣品含水量較少，本研究稱取2 份2.5 g 不含格螨酯的陰性樣品，均添加0.10 mg·kg-1格螨酯標(biāo)液，一份樣品按照1.3.1 節(jié)進(jìn)行前處理，另一份樣品除不加入10 mL 水，其余步驟按照1.3.1 節(jié)進(jìn)行前處理，平行測定6 次，以格螨酯的回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）評價2 種不同的前處理，結(jié)果如表1 所示。結(jié)果表明，稱取樣品后，加入10 mL 水，能夠提高樣品的提取效率和試驗的穩(wěn)定性。

表1 樣品處理結(jié)果表

2.2 基質(zhì)效應(yīng)考察

基質(zhì)效應(yīng)指茶葉樣品中除格螨酯以外的其他成分對格螨酯測定值的影響，通常包括抑制或者增加格螨酯響應(yīng)2 個方面。合理評價基質(zhì)效應(yīng)的影響，并選擇適當(dāng)?shù)姆椒p少或者消除茶葉基質(zhì)對格螨酯的影響，可以提高格螨酯測定的準(zhǔn)確性。按照1.3.1 節(jié)進(jìn)行前處理，得到茶葉基質(zhì)溶液，分別用茶葉基質(zhì)溶液和正己烷試劑，配制基質(zhì)曲線與溶劑曲線（正己烷），對比相同質(zhì)量濃度格螨酯的峰面積，進(jìn)而評估茶葉的基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果如表2 所示，表明茶葉基質(zhì)對格螨酯有較強(qiáng)的抑制作用，格螨酯的茶葉基質(zhì)峰面積與提取溶劑峰面積的比值均小于0.70。因此，本研究選擇空白茶葉基質(zhì)曲線進(jìn)行定量，從而達(dá)到減小茶葉基質(zhì)影響的目的。

表2 基質(zhì)效應(yīng)考察表

2.3 線性范圍

以格螨酯的質(zhì)量濃度（X，μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制基質(zhì)曲線，結(jié)果見表3。由表3 可知，格螨酯在0.005～0.500 μg·mL-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2大于0.995，可通過基質(zhì)曲線方程對樣品中的格螨酯進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

表3 格螨酯基質(zhì)曲線方程表

2.4 定量限、加標(biāo)回收和精密度

稱取一系列陰性樣品2.5 g 試樣于50 mL 塑料離心管，添加濃度為0.010 mg·kg-1、0.050 mg·kg-1、0.500 mg·kg-1的格螨酯標(biāo)液，加10 mL 水靜置30 min，按照1.3.1 中的步驟進(jìn)行處理，所得樣液供GC-ECD 儀器分析，結(jié)果如表4 所示。在0.010 mg·kg-1添加水平下，格螨酯回收率為62.1%～73.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為5.39%（n=6）；在0.050 mg·kg-1添加水平下，格螨酯回收率為69.8%～80.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為6.11%（n=6）；在0.5 mg·kg-1添加水平下，格螨酯回收率為78.9%～95.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為7.93%（n=6）。結(jié)果表明，在0.010 mg·kg-1的添加水平下，能準(zhǔn)確地定量，回收率良好，信噪比大于10，故本方法定量限為0.010 mg·kg-1。

表4 格螨酯3 水平加標(biāo)回收結(jié)果表（n=6）

3 結(jié)論與討論

建立茶葉中農(nóng)藥殘留格螨酯的QuEChERS-氣相色譜測定方法。試樣經(jīng)復(fù)水，乙腈提取、QuEChERS 凈化，采用HP-5 色譜柱分離，電子捕獲檢測器（ECD）檢測，外標(biāo)法定量。在優(yōu)化實驗條件下，格螨酯在0.005～0.500 μg·mL-1線性良好，線性相關(guān)系數(shù)為0.997 3。在陰性樣品添加0.010～0.500 mg·kg-1的格螨酯，平行檢測6 次，回收率為62.1%～95.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.39%～7.93%。該方法靈敏度高、準(zhǔn)確性好、重復(fù)性好，適用于茶葉中格螨酯的殘留檢測。