牛人工授精技術(shù)要點探析

何榮奇

（柳州市融安縣長安鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村綜合服務(wù)中心，廣西 融安 545400）

為有效提高肉牛群體質(zhì)量，擴大肉牛良種覆蓋率，各地區(qū)畜牧獸醫(yī)技術(shù)人員不斷學(xué)習(xí)牛人工授精技術(shù)操作規(guī)程，掌握牛人工授精技術(shù)要點，以此在品種改良、擴繁擴育方面充分發(fā)揮人工授精技術(shù)優(yōu)勢。但是在基層地區(qū)牛人工授精技術(shù)操作過程中，仍然存在成功率低、母牛受胎率低等瓶頸問題，基于此，文章展開以下探究，分析牛人工授精工作成功率低的原因，之后總結(jié)人工授精技術(shù)規(guī)程與操作要點，為相關(guān)從業(yè)者提供可參考性建議。

1 肉牛養(yǎng)殖中使用人工授精技術(shù)的原因及優(yōu)勢

牛人工授精技術(shù)主要指通過人為操作，采集公牛精液，對精液進行保存與處理，之后在母牛發(fā)情期借助相應(yīng)器具把公牛精液輸送到母牛子宮內(nèi)，以此來達到母牛受孕的目的，通過該種技術(shù)方法替代公母牛自然交配，該技術(shù)在20世紀50年代就開始推廣，如今已經(jīng)成為各養(yǎng)殖場常見的肉牛妊娠控制技術(shù)之一。

與傳統(tǒng)自然交配相比，利用人工授精技術(shù)可有效提高公牛配種效率和精液利用率[1]。通常情況下，如果利用自然交配，一頭公牛每次射精只能使一頭母牛懷孕，而為了提高養(yǎng)殖場經(jīng)濟效益，多數(shù)養(yǎng)殖戶在肉牛飼養(yǎng)過程中，母牛飼養(yǎng)數(shù)量遠遠超過公牛，因此在自然交配情況下，必然出現(xiàn)公牛精液供不應(yīng)求情況，部分母牛不能受精受孕。而采用人工授精技術(shù)可將公牛精液一次性注射到幾十頭，甚至數(shù)百頭母牛體內(nèi)，從而提高配種效率，有效擴大良種公牛（精液）使用率，增加優(yōu)良家畜數(shù)量。其次，在傳統(tǒng)自然配種下，要想使得全養(yǎng)殖場母牛得到均勻配種，必然會從外界引入種公牛，而與活畜運輸成本相比，精液運輸費用更低，可以跨地區(qū)、跨省市、跨國流通，具有長遠積累性經(jīng)濟效益。

2 牛人工授精工作中成功率低的原因

當前部分基層地區(qū)肉牛養(yǎng)殖場戶均可意識到人工授精妊娠技術(shù)的優(yōu)勢與特點，且該技術(shù)在肉牛妊娠、良種繁育過程中應(yīng)用率較高，已經(jīng)實現(xiàn)常態(tài)化推廣，但是從具體人工授精操作技術(shù)成功率方面來看，家庭養(yǎng)殖場和規(guī)?；B(yǎng)殖基地仍然存在牛受胎率低、人工授精操作成功率低等問題。根據(jù)多年肉牛擴繁擴育研究經(jīng)驗，文章將牛人工授精成功率低的原因概括為以下幾個方面：

2.1 對母牛發(fā)情期判定不準

部分配種員在牛人工授精技術(shù)操作中，難以合理掌握母牛發(fā)情時間、排卵時間和發(fā)情癥狀[2]。通常情況下，多數(shù)配種員認為只要同欄舍內(nèi)有母牛騎跨其他牛就可認定為母牛發(fā)情，之后便通過輸精方法，將公牛精液輸送到母牛體內(nèi)，但往往受精成功率較低。產(chǎn)生這一問題的根本原因在于：多數(shù)配種員對母牛發(fā)情癥狀的判定存在誤區(qū)，不能否認的是“騎跨其他母?！边@一表現(xiàn)確實為發(fā)情癥狀的典型表征，但僅此還不夠，必須結(jié)合正常卵泡發(fā)育情況、生殖道變化情況才可綜合判定母牛是否發(fā)情。

2.2 精液解凍溫度不適宜

精子質(zhì)量是影響牛人工授精操作成功率的重要因素，在輸精之前，配種員需將精液進行解凍，通常情況下，解凍方法有無水解凍杯解凍、水介質(zhì)解凍杯解凍、水浴鍋解凍這三種方式，多數(shù)農(nóng)村地區(qū)常見解凍方法為無水解凍杯解凍。但是在具體操作中，部分配種員在解凍精子時不能精準判斷凍精細管具體位置，取凍精時間過長，均超過10s，或者在解凍過程中解凍時間過短，解凍溫度過低或過高，直接影響輸精效果和受精成活率，如果操作嚴重失誤可能導(dǎo)致種公牛精子在復(fù)蘇過程中大量死亡，進而致使牛受胎率下降，增加整個養(yǎng)殖場地產(chǎn)犢間隔時長，加大農(nóng)村地區(qū)養(yǎng)殖戶母牛飼養(yǎng)成本。

2.3 精子活力低

在輸精之前，部分配種員不能對精子活力進行檢查，通常情況下，在采精時，每周采精1～2次最為適宜，如果采精頻次過高，將直接導(dǎo)致精子活力不強，或者多數(shù)精子未成熟，影響后續(xù)母牛受精能力。其次，在采精之后精子儲藏溫度、冷凍解凍溫度，光照與輻射，均可以直接影響精子代謝活動，引起精子內(nèi)外部變化，甚至如果光照過強，輻射過大，將直接對精子活力產(chǎn)生殺傷作用。此外，如果精子周圍液體環(huán)境滲透壓過高，也將影響精子活力，致使精子膨脹，內(nèi)部脫水，進而死亡，不利于肉牛人工授精成功率，因此在今后工作中，配種員在采精之后應(yīng)該做好精子貯藏與存放，輸精之前檢查精子活力，以此才能提高母牛受胎率。

2.4 輸精槍掌握不當，輸精太深

通常情況下，母牛的輸精部位有三處，分別為子宮角、子宮頸口和子宮體深部[3]。經(jīng)過多年理論研究和實踐探索，認為將精液輸?shù)侥概Ｗ訉m角內(nèi)最為適宜，不易損傷子宮黏膜，如果將精液輸送到子宮頸口，需要輸送的精子數(shù)量較大，且輸精之后精液容易倒流，致使母牛受胎率低，如果采用子宮體深部輸精，可能導(dǎo)致輸精槍插入太深，損傷子宮黏膜。但是在實際輸精過程中，部分配種員輸精管插入深度過深或過淺，直腸把握輸精方法操作不當，可能導(dǎo)致母牛子宮黏膜損傷或者其他炎癥出現(xiàn)，致使母牛妊娠率大大降低。

2.5 存在難孕牛

部分養(yǎng)殖場內(nèi)存在難孕母牛，即母牛有不孕癥或者存在永久性、暫時性繁殖障礙，將直接導(dǎo)致人工授精成功概率低[4]。通常情況下，青年牛20月齡不受孕，高產(chǎn)奶牛120d不受孕，或者母牛產(chǎn)后80d之內(nèi)，均屬于難孕牛，母牛不發(fā)情，或發(fā)情配種之后受胎率低，妊娠率低，或者在三個情期配種均不孕，或者參與配種70d從受孕，也可以劃分到難孕牛范疇。此時配種員應(yīng)判定難孕母牛是否為先天性不孕癥，比如生殖器官發(fā)育不完全、存在兩性畸形、異性孿生不孕以及其他生殖道疾病問題，如果經(jīng)科學(xué)診斷，母牛不屬于先天不孕癥，應(yīng)該從后天發(fā)育情況入手，判斷母牛是否存在營養(yǎng)性不孕、氣候性不孕、繁殖技術(shù)性不孕，以此提高母牛受胎率。

3 牛人工授精技術(shù)要點

3.1 科學(xué)掌握發(fā)情期

配種員應(yīng)該科學(xué)掌握母牛排卵時間、發(fā)情癥狀，通常情況下，母牛進入發(fā)情期之后，可能存在爬跨其他母牛情況，此時還應(yīng)該結(jié)合母牛外部表現(xiàn)、粘液滲出情況和直腸檢查法，判斷牛卵泡壁厚度。通常情況下，卵泡發(fā)育到1.5～2.0m，即視為發(fā)育良好，在進入到發(fā)情期之后，卵泡頂端有腫脹感，且卵泡壁較薄，同時陰道處有粘液滲出，粘液較為濃稠，滲出量大，將以上多種檢查方法相結(jié)合，可以降低母牛發(fā)情誤診率，避免造成誤配和精液浪費現(xiàn)象。在母牛發(fā)情結(jié)束后4～16h，視為母牛排卵時間，母牛表現(xiàn)逐漸由亢奮轉(zhuǎn)為安靜，臀部陰門腫脹感減退，有褶皺出現(xiàn)，且食欲基本恢復(fù)正常，陰道黏膜顏色呈暗紅色，粘液滲出量較小，且與發(fā)情時相比，濃度更為稀稠，卵泡壁較薄，子宮頸由外向內(nèi)更有彈性，有一處即破之感，此時為最佳輸精時間。

3.2 做好精液冷凍解凍

在種公牛精液采集之后，應(yīng)該做好精液冷凍與解凍，牛精液冷凍溫度最低不能低于零下0.6℃，在細管取出冷凍精液之后，先在空氣中停留幾秒，如果利用水浴解凍，0.25ml細管停留時間約在15s，解凍溫度在32℃左右。在冷凍和解凍過程中，所有與精液直接接觸的器具必須經(jīng)過嚴格滅菌消毒，尤其是裝解凍液和精液的容器，與配種員所需的鑷子，以此防止液氮罐內(nèi)出現(xiàn)污染現(xiàn)象，通常情況下，精子解凍溫度在32～38℃，如果低于32℃，將直接影響精子活力恢復(fù)，如果高于42℃，將直接使得種公牛精子迅速死亡。解凍后應(yīng)將精液從水浴中取出，不能長時間保存精液，尤其是細管冷凍精液，保存時間最多不能超過60min，如果是顆粒冷凍精液最高不能超過120min，否則將影響精子活力。如果解凍后需要遠距離運輸，應(yīng)將精子進行5℃低溫保存和攜帶，之后將解凍溫度調(diào)節(jié)到10～15℃，以此可以延長精子存活時間（可延長數(shù)小時左右）。

3.3 檢查精子活力

通常情況下，要想保證母牛受胎率，提高種公牛精液品質(zhì)，對于冷凍精液，其解凍后必須確保精子活力高于35%，精子畸形率必須小于18%，且前進運動精子數(shù)至少大于800萬個，細菌總數(shù)小于800個，才能保證用于母畜繁殖生產(chǎn)。因此在輸精之前配種員需對冷凍精液精子活力進行鑒定，取0.25ml細管凍精，在蒸餾水、載玻片、磷酸二氫鈉、顯微鏡、姬姆薩染料、3.0%氯化鈉溶液、磷酸氫二鈉等實驗材料輔助下，對冷凍精子畸形率、活力、菌落數(shù)和密度進行檢查。在檢查精子密度時，常利用血細胞計數(shù)器計數(shù)法，來判定1ml精液中所含精子數(shù)量，具體操作方法為，首先吸取公牛精液0.5ml，之后取3%氯化鈉溶液5ml.搖勻一min左右后將精液稀釋到200倍液，將血細胞計數(shù)器的計算室蓋上蓋玻片，利用600倍顯微鏡觀察，可計算出精子數(shù)量，為后續(xù)精子活力判定打下堅實基礎(chǔ)，通過該種方法及時淘汰不良精子，從而提高母牛受胎率。

3.4 規(guī)范輸精

配種員應(yīng)該掌握科學(xué)化、準確化輸精技術(shù)，實現(xiàn)規(guī)范輸精，必要時配種人可將第一次輸精法和二次輸精法相結(jié)合[5]。在母牛發(fā)情開始后的18～24h，進行第一次輸精，在第一次輸精之后約隔12～14h，進行第二次輸精，以此可以加大受胎率，受胎率可高達60%左右，對于部分發(fā)情時間延長的母牛，可進行第三次輸精，以此提高母牛妊娠率。在輸精操作之前，戴好長臂手套，按照操作規(guī)程，輸精器內(nèi)裝好備用精液，將左手伸入母牛直腸內(nèi)，清洗母牛外陰部并擦干，同時掏出糞便。用手找到子宮頸，隔著直腸壁握住子宮頸，利用中指、食指與大拇指固定，必要時可輕微調(diào)控宮頸位置，伸入直腸的手通過子宮頸后，將精液輸送至子宮頸內(nèi)，在輸精過程中，不可用力過猛，插入輸精管時必須小心謹慎，通常情況下，輸精深度不宜過深，以防穿透子宮壁或子宮頸。同時配種員也應(yīng)該注意到，部分母牛在輸精過程中較為緊張，其直腸壁收縮頻次過快，且子宮頸也向后移，為有效刺激腸壁，配種員可把手前伸，握住子宮頸向前推，以便輸精管插入，如果部分母牛子宮垂入腹腔，可以利用左手握住子宮頸慢慢上提，以便輸精管通過。當輸精管已經(jīng)達到子宮頸口時，個別情況下會遇到不好插入問題，產(chǎn)生這一現(xiàn)象的根本原因可能為部分已孕母牛假發(fā)情，或者母牛子宮頸張開度不好，頸口有疤痕，子宮內(nèi)有炎癥，此時配種員需停止輸精，對不好插入的原因診斷清楚，以防導(dǎo)致母牛子宮壁破損，或者由于強行深部輸精引起已孕母牛流產(chǎn)。

3.5 做好難孕牛治療

對于難孕牛，配種員應(yīng)在基層畜牧獸醫(yī)技術(shù)指導(dǎo)下，對不孕癥進行治療，其中對于先天性不孕癥，其治療方法主要有按摩卵巢子宮法、激素治療法和激光穴位照射法，農(nóng)村地區(qū)常用治療方法為激素治療法。比如肌肉注射PMSG1500IU，或者靜脈注射HCG5000IU，也可以使用苯甲酸雌二醇20mg，配合己烯雌酚20mg進行綜合治療；對于異性孿生不孕母牛，其染色體異常，同時母牛陰道短小，輸精器無法插入，在直腸檢查時不能判定正常卵巢發(fā)育情況和子宮狀況，因此對于該類母牛應(yīng)及時淘汰。如果是后天不孕癥母牛，應(yīng)對其不孕原因進行檢查，如果是營養(yǎng)型不孕，養(yǎng)殖戶應(yīng)該在日糧中補充維生素A、維生素D和維E以及礦物質(zhì)，其中維生素A每日補充20萬IU，可采用針劑注射法，每隔7d注射1次，連續(xù)注射3次，對于維生素D，每次注射10IU，每隔5d天注射1次，連續(xù)注射4次左右，并及時給予母牛室外運動和光照，對于維生素E，每次注射2ml左右，每隔7d使用3次，如果是繁殖技術(shù)性不孕，配種員應(yīng)強化技術(shù)操作，避免漏配、錯配和誤傷等現(xiàn)象發(fā)生。

4 結(jié)語

綜上所述，配種員應(yīng)該科學(xué)掌握母牛排卵時間、發(fā)情癥狀，結(jié)合母牛外部表現(xiàn)、粘液滲出情況和直腸檢查法，判斷牛卵泡壁厚度，做好精液冷凍與解凍，將一次輸精法和二次輸精法相結(jié)合，及時檢查精子活力，在基層畜牧獸醫(yī)技術(shù)指導(dǎo)下，對先天不孕癥母牛和后天不孕癥母牛予以科學(xué)治療，才能進一步提高牛人工授精成功率，加快母牛妊娠，突破母牛受胎率低等瓶頸問題，以此實現(xiàn)育種目的。