麻文靜，嚴(yán)彩紅，趙曉旭，沈 君

北京商貿(mào)學(xué)校（北京市SPF技術(shù)研究與推廣中心），北京 100194

非洲豬瘟病是世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須報告的動物疫病之一，也是我國Ⅰ類動物傳染病[1]。隨著非洲豬瘟感染時間延長，出現(xiàn)感染后難以清除、發(fā)現(xiàn)新的弱毒株、潛伏期延長、癥狀不典型、短期內(nèi)難以發(fā)現(xiàn)等新特點，使得該病的防控形勢比較嚴(yán)峻。

1 病原特點

非洲豬瘟病毒歸屬于非洲豬瘟病毒科，僅1 個血清型，為單分子線狀的雙股DNA，有22 個基因型；基因組長度為170～190 kb[2]。其基因組長度在不同毒株之間，或者是同一毒株，不同代次之間，均呈現(xiàn)出多樣性。非洲豬瘟的基因可編碼200 多種蛋白質(zhì)，其中包含反轉(zhuǎn)重復(fù)區(qū)、共價閉合末端、發(fā)夾結(jié)構(gòu)等部分。非洲豬瘟病毒特征基因可編碼3 種酶（蛋白質(zhì)修飾酶、參與核苷酸、核酸代謝的酶）與2 種蛋白（分泌性蛋白、假定膜蛋白）[3]。

非洲豬瘟病毒粒子的繁衍速度很快，且其基因具有較高的突變頻率，進(jìn)而使得該病難以控制。同時，非洲豬瘟病毒對環(huán)境的適應(yīng)能力非常強，尤其是對低溫環(huán)境的抵抗力更強，如在5 ℃的血清中存活時間可達(dá)6年以上，但對于高溫環(huán)境抵抗力較弱，在56～60 ℃的環(huán)境中，持續(xù)30 min 以上即可滅活。非洲豬瘟的傳播媒介主要是鈍緣蜱。

2 傳播方式

非洲豬瘟病毒具有較為廣泛的傳播途徑，目前已知的循環(huán)傳播途徑有3 種：一是患病動物之間的傳播循環(huán)。如非洲野豬、疣豬等感染非洲豬瘟以后與家豬接觸，導(dǎo)致病毒進(jìn)入家豬體內(nèi)，進(jìn)而感染。二是軟蜱等吸血昆蟲與家豬之間的傳播循環(huán)。軟蜱叮咬病豬，非洲豬瘟病毒通過血液進(jìn)入軟蜱體內(nèi)，可在軟蜱體內(nèi)存活8年以上，而且蜱之間也可相互傳播[4]；而攜帶非洲豬瘟的軟蜱再次通過叮咬健康家豬引起健康豬群感染。除了軟蜱之外，蚊虻等吸血昆蟲也可傳播。三是家豬之間傳播循環(huán)，家豬中帶毒豬與病豬時刻在向外排毒，同時病豬或者帶毒豬的肉類產(chǎn)品等均為該病的傳染源；通過直接或者間接與健康豬群接觸，引起豬群發(fā)病。

非洲豬瘟感染的有效距離為2 m。該病可通過消化道與呼吸道進(jìn)入豬只的體內(nèi)，前者是健康豬群接觸含有非洲豬瘟病毒的病豬的排泄物或飼料、飲水、設(shè)備等傳染源[5]，引起感染發(fā)??；后者主要是健康豬吸入含有非洲豬瘟病毒的飛沫而引發(fā)感染。

3 流行現(xiàn)狀

非洲豬瘟自2018年7月首次在遼寧省沈陽市某豬場被發(fā)現(xiàn)，隨后席卷我國大江南北，使我國生豬存欄量急速下降。但伴隨著國家隔離封鎖的政策以及豬場自身提高生物安全措施的實施，我國非洲豬瘟的暴發(fā)流行趨勢得到有效控制，降低了豬只的死亡率；2020年以后，該病逐漸發(fā)展為零星發(fā)生、無明顯臨床癥狀、低死亡率為主要特征的發(fā)病情況。中國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部報告稱2020年湖北省、云南省及四川省等3 個地區(qū)發(fā)生非洲豬瘟疫情，均為省外輸入違規(guī)調(diào)運生豬及其產(chǎn)品而引起[6]。2021年全國共報告發(fā)生非洲豬瘟疫情11 起，涉及8 個省份，撲殺生豬2 216 頭。目前，國內(nèi)非洲豬瘟仍然流行的關(guān)鍵因素有以下幾個方面：第一，非洲豬瘟具有很強的抗逆性；第二，非洲豬瘟的傳播方式比較復(fù)雜多樣；第三，利益驅(qū)使人類活動成為其傳播的推動作用；第四，養(yǎng)殖場傳統(tǒng)粗放式養(yǎng)殖模式以及對生物安全的認(rèn)識不足等。

4 診斷方法

4.1 臨床診斷

非洲豬瘟感染后，臨床上會表現(xiàn)出多種綜合癥，一般分為最急性、急性、慢性以及無癥狀。最急性一般表現(xiàn)為高溫（41～42 ℃），不吃、體表潮紅充血、發(fā)紺，1～4 d 內(nèi)死亡，發(fā)病率和死亡率達(dá)100%。而急性病例表現(xiàn)為皮膚潮紅、腸道出血、鼻腔出血，病死率為90%～100%。慢性病例主要表現(xiàn)為間歇熱、被毛粗亂、在耳、四肢腿內(nèi)側(cè)等部位皮膚壞死、潰瘍，關(guān)節(jié)腫大，生長受阻。剖檢后可見內(nèi)臟出血，主要是脾臟充血、壞死，腎臟有出血點，肝臟出血等癥狀[7]。但由于這些癥狀與豬皮炎與腎病綜合征、藍(lán)耳病、豬瘟的癥狀較為相似，難以鑒別；因此，需要進(jìn)行實驗室診斷來確診。

4.2 實驗室診斷

1）病原檢測。非洲豬瘟進(jìn)入豬機體后，在網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)（主要是單核細(xì)胞與巨噬細(xì)胞）中進(jìn)行繁殖[8]，之后進(jìn)入血液和淋巴液，隨血液循環(huán)與淋巴系統(tǒng)擴散致全身[5]。但病毒分離OIE 要求必須在BSL-3 及以上生物安全實驗室進(jìn)行；而且病毒主要集中的組織有扁桃體、淋巴結(jié)、肺臟、肝臟、血液以及脾臟，感染初期選擇前3種組織，中后期在上述組織中均可分離到非洲豬瘟病毒[9]。而紅細(xì)胞吸附試驗的原理是非洲豬瘟病毒進(jìn)入機體后，會在豬的單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞表面吸附，通過顯微鏡可觀察到特征性的“玫瑰花環(huán)”現(xiàn)象。本方法敏感性高、成本低廉，但周期長，并且目前已發(fā)現(xiàn)少量的“非血吸附”。雖然該方法敏感性高、成本低，但需要進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)，周期長，而且現(xiàn)已分離出少量的非洲豬瘟病毒。因此，目前病毒分離與紅細(xì)胞吸附試驗常作為ELISA、PCR 或FAT 檢測結(jié)果為陽性病例的確診參考試驗。

2）核酸檢測。實際臨床上應(yīng)用最為常用的檢測技術(shù)為有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測技術(shù)與環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)等。PCR 操作主要有3 個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成，即變性、退火、延伸等，靶序列兩端互補的寡核苷酸引物是其特異性的關(guān)鍵。PCR 具有敏感性高、時間短及特異性強的優(yōu)點；常用于血液、組織器官以及血清中的非洲豬瘟病毒基因組的檢測；特別是在感染初期，本檢測方法即可檢測出豬體內(nèi)的非洲豬瘟的病毒。該方法可檢測出已知的所有的非洲豬瘟的基因型（包括非血液吸附毒株和低毒力分離毒株），甚至是在滅活或者降解的樣品中也可檢測出該病毒基因。而實時熒光定量PCR 檢測的原理是在PCR 反應(yīng)的體系中加入熒光標(biāo)記的基因，進(jìn)而產(chǎn)生熒光信號并進(jìn)行實時收集積累。最后繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。該方法具有靈敏度高、不易交叉污染、時間短等優(yōu)點。

而環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)是用于核苷酸擴增的單管技術(shù)，針對靶基因設(shè)計多種特異性引物，在利用具有復(fù)制活性的鏈置換DNA 聚合酶，在60～65 ℃的等溫環(huán)境下，15～60 min 內(nèi)對靶序列進(jìn)行擴增的核酸擴增反應(yīng)[10]。該方法不需提取核酸，對精密儀器要求低，并且可減少因病毒單個基因突變造成的假陰性情況，還具有特異性強、靈敏度高、檢測結(jié)果可視化的優(yōu)點。

3）抗體/抗原檢測。酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測范圍廣泛，因其特異性強、敏感性高、操作簡單，使得其成為臨床上實驗室內(nèi)檢測病毒抗體/抗原最為常見的檢測方法。本方法適用于大批量的檢測樣本，能夠及時快速地檢測出大群體內(nèi)非洲豬瘟病毒的抗體。另外，間接熒光抗體試驗也可進(jìn)行抗體水平的檢測；是一種利用熒光標(biāo)記的抗體進(jìn)行血樣中抗體檢測的檢測技術(shù)。標(biāo)記的抗體與檢測樣本中病原抗體結(jié)合，在熒光顯微鏡下成像，進(jìn)而測定出樣本中的抗體。而側(cè)向流動免疫色譜分析（試紙條法）可對抗原進(jìn)行檢測；本方法可直接檢測血液，進(jìn)而常用于現(xiàn)場檢測或者試驗基礎(chǔ)條件不足的場所進(jìn)行檢測；本方法主要層析技術(shù)，即在纖維層上利用毛細(xì)管的虹吸效應(yīng)，使得樣品從添加孔移動到層析材料上含有抗體的區(qū)域，如果含有相應(yīng)病毒，則與抗體結(jié)合，再結(jié)合顯色反應(yīng)，進(jìn)而短時間內(nèi)可直接獲得測試結(jié)果。

5 防控措施

5.1 加強引種檢測

無論是種豬還是斷奶仔豬，在引入本場之前應(yīng)做好非洲豬瘟的檢測，特別是種豬，需要間隔25 d，連續(xù)進(jìn)行2 次檢測，確定為陰性方可引進(jìn)。而斷奶仔豬需要對其母豬與自身進(jìn)行非洲豬瘟的檢測，確定為陰性后才能引入豬場。

5.2 進(jìn)場原料和人員檢測

在離豬場1～2 km 處建立臨時隔離倉庫與隔離點，進(jìn)場的所有原料均在此進(jìn)行中轉(zhuǎn)，提前7 d報備，使用過硫酸氫鉀等有效消毒劑進(jìn)行消毒處理48 h；之后進(jìn)行非洲豬瘟檢測，結(jié)果為陰性方可允許進(jìn)場。人員在此進(jìn)行洗澡消毒，更換衣服，隔離48 h，非洲豬瘟核酸檢測為陰性方可進(jìn)場。外來人員和車輛一律禁止進(jìn)入豬場。

5.3 銷售車輛消毒檢測

外運生豬車輛在中轉(zhuǎn)點采用過硫酸氫鉀等消毒劑進(jìn)行全面消毒，同時檢測非洲豬瘟核酸，陰性方可靠近裝豬臺；而內(nèi)部車輛也進(jìn)行消毒處理，生豬運到裝豬臺后，空車消毒后方可返回。同時，交易結(jié)束后對裝豬臺進(jìn)行徹底消毒，并進(jìn)行非洲豬瘟檢測，確保隔離措施到位。

5.4 發(fā)病處理

一旦發(fā)生非洲豬瘟，應(yīng)立即上報，及時無害化處理發(fā)病豬；豬場清場后，采用火堿、過硫酸氫鉀等有效消毒劑進(jìn)行全面徹底消毒，之后采用火焰噴槍等設(shè)備進(jìn)行火焰消毒；空欄6 個月以上方可裝豬。