吳康秀,黎志國,劉穗萍,蘇鴻君,熊敏敏*
頭頸鱗狀細(xì)胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)發(fā)生于口腔、咽喉和喉部的黏膜上皮,是頭頸癌最常見的惡性腫瘤[1]。超過60%的HNSCC 患者在診斷時(shí)表現(xiàn)出局部轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,預(yù)后較差[2]。因此,研究HNSCC 預(yù)后評估的生物標(biāo)志物,對于判斷HNSCC 疾病進(jìn)展和改善預(yù)后具有重要意義。
糖基化作為一種翻譯后修飾,是指在酶的催化下,將糖基轉(zhuǎn)移到蛋白質(zhì)或脂質(zhì)上的過程,參與細(xì)胞黏附、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫調(diào)節(jié)等多種生理過程[3]。糖基化異??赡苡绊懠?xì)胞的增殖、黏附、轉(zhuǎn)移、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化,在癌癥的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用。糖基化異常有多種機(jī)制,包括糖基轉(zhuǎn)移酶基因表達(dá)水平異常[4-6]、糖基轉(zhuǎn)移酶分泌過程中定位異常[7]、分子伴侶活性異常[8]等。例如乳腺癌中唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因ST6GALNAC5 的過表達(dá)會促進(jìn)腫瘤的腦轉(zhuǎn)移[9]。而敲低乳腺癌細(xì)胞系的ST6GALNAC2 基因會導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移的增加[10]。唾液酸轉(zhuǎn)移酶ST6GALNAC1 將唾液酸添加到絲氨酸或蘇氨酸殘基的α-2,6 鍵上,在各種腫瘤中異常表達(dá),已被證明與胃癌、乳腺癌和前列腺癌的不良預(yù)后相關(guān)[11],還有研究發(fā)現(xiàn)ST6GALNAC1 的異常表達(dá)與膀胱癌免疫細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)相關(guān)[12],但其在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中的作用尚不清楚。
在這項(xiàng)研究中,我們旨在研究ST6GALNAC1在HNSCC 中的預(yù)后和免疫作用,評估其作為HNSCC 生物標(biāo)志物的價(jià)值。主要的研究內(nèi)容包含:糖基轉(zhuǎn)移酶差異基因的篩選、基因表達(dá)分析、生存曲線分析、免疫細(xì)胞景觀分析、相關(guān)通路分析、實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。本研究將為探究ST6GALNAC1 在HNSCC的發(fā)病、臨床預(yù)后和免疫治療中的潛在功能提供新依據(jù)。
從腫瘤基因組圖譜(The Cancer Genome Atlas,TCGA)數(shù)據(jù)庫中獲取HNSCC 的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)和HNSCC 患者的臨床信息數(shù)據(jù)(表1),并根據(jù)從GENCODE 獲得的GeneSymbol 和ENSG_ID 的 轉(zhuǎn)錄本注釋信息,將ENSG_ID 映射到GeneSymbol 上,最終獲得了轉(zhuǎn)換后的HNSCC 全基因組表達(dá)譜。由參考文獻(xiàn)獲得參與糖基化過程的173 個(gè)糖基轉(zhuǎn)移酶基因[13]。
表1 TCGA 數(shù)據(jù)庫中HNSCC 患者的臨床信息
使用R 軟件Limma 包對HNSCC 表達(dá)譜進(jìn)行差異基因篩選,以獲得腫瘤組和正常組間的差異基因,將篩選結(jié)果繪制成火山圖,篩選標(biāo)準(zhǔn):|log2(fold change)|>1,P<0.05。將以上篩選出的差異基因和173 個(gè)糖基轉(zhuǎn)移酶基因?qū)Ρ龋玫紿NSCC 糖基轉(zhuǎn)移酶差異表達(dá)基因,繪制韋恩圖。本研究利用UALCAN[14](http://ualcan.path.uab.edu/)門 戶 網(wǎng)站上的TGCA 分析得到了ST6GALNAC1 mRNA 水平表達(dá)數(shù)據(jù)及其與HNSCC 患者不同臨床病理特征的相關(guān)性。同時(shí),通過UALCAN 數(shù)據(jù)庫上的臨床蛋白質(zhì)組學(xué)腫瘤分析聯(lián)盟(CPTAC)數(shù)據(jù)集和人類蛋白組圖譜(HPA)數(shù)據(jù)庫[15]獲得了ST6GALNAC1 在正常組織和HNSCC 腫瘤組織的蛋白表達(dá)數(shù)據(jù)。
本研究從GEPIA2[16]可視化網(wǎng)站上獲取HNSCC 的總體生存(overallsurvival,OS)曲線和無病生存(disease free survival,DFS)曲線。以ST6GALNAC1 基因表達(dá)量的中位數(shù)作為閾值將HNSCC 腫瘤樣本分成高表達(dá)組和低表達(dá)組,以月為單位進(jìn)行繪圖,假設(shè)檢驗(yàn)采用對數(shù)秩檢驗(yàn)。
通 過TIMER2.0[17](Tumour Immune Estimation Resource,Version2,http://timer.cistrome.org/)數(shù)據(jù)庫的Immune 版塊對ST6GALNAC1 表達(dá)與腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的相關(guān)性進(jìn)行分析。以ST6GALNAC1 基因表達(dá)量的中位數(shù)作為閾值將HNSCC 腫瘤樣本分成高表達(dá)組和低表達(dá)組?;赥CGA 數(shù)據(jù)庫中的HNSCC 的轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜,使用R 軟件IOBR 包選擇ESTIMATE、EPIC、Xcell 算法計(jì)算兩組樣本的免疫浸潤細(xì)胞評分。從TCGA 數(shù)據(jù)庫獲得HNSCC 免疫檢查點(diǎn)基因和HLA 基因表達(dá)譜,利用Sangerbox 在線畫圖工具繪制箱型圖來可視化兩組樣本免疫檢查點(diǎn)基因和HLA 基因的表達(dá)差異結(jié)果,檢驗(yàn)方法采用秩和檢驗(yàn)。
使用STRING[18]工具(https://string-db.org/)構(gòu)建ST6GALNAC1 及其相關(guān)蛋白的相互作用網(wǎng)絡(luò)。通過GEPIA2 工具獲得ST6GALNAC1 相關(guān)的前100個(gè)靶基因,將ST6GALNAC1 與前5 名相關(guān)基因進(jìn)行成對基因相關(guān)性分析,通過Sangerbox 在線畫圖工具來分析和可視化GO 和KEGG 分析,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異設(shè)為P<0.05。
1.6.1 細(xì)胞來源 人舌鱗癌細(xì)胞Cal27 和從口腔分離出來的人正常成纖維細(xì)胞(Normal Fibroblast,NF)來源于中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院口腔科黃志權(quán)課題組的贈送。
1.6.2 細(xì)胞處理和蛋白樣品的制備 將人舌鱗癌細(xì)胞Cal27 和NF 種到6 cm 的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,待細(xì)胞密度長到80%左右時(shí),用無菌PBS 洗滌3 次,加入200 μL 細(xì)胞裂解液(100 mM Tris-Hcl(pH6.8),1 mM EDTA-Na2,1×蛋白酶抑制劑,2% SDS,1 mM PMSF),室溫靜置5 min 后,將裂解液轉(zhuǎn)移至無菌EP 管中,95℃金屬浴變性30 min,用12 000 r/min 的轉(zhuǎn)速離心10 min,取上清,采用BCA試劑盒測定蛋白濃度,用裂解液將各組蛋白溶液的濃度和體積調(diào)成一致,加入loading buffer,混勻,95 ℃金屬浴煮5 min。
1.6.3 Western Blot 配制8%的分離膠和5%濃縮膠,將處理好的蛋白樣品等體積上樣,恒壓100 V電泳,溴酚藍(lán)條帶跑到距離凝膠底部約1 cm 處時(shí)即可停止電泳;恒壓100 V 轉(zhuǎn)膜,轉(zhuǎn)180 min;將PVDF 膜用5% BSA 在室溫下封閉30 min,使用1:1000 的ST6GALNAC1 兔抗體或1∶2000 的β-actin小鼠抗體在室溫下孵育膜1 h,用1×TBST 洗滌膜3 次后,加入1∶10 000 的HRP 綴合的羊抗兔IgG 抗體或HRP 綴合的羊抗鼠IgG 抗體,放室溫的搖床上孵育1 h,用1×TBST 洗滌膜3 次;將ECL 發(fā)光液配好,淋到膜上,浸軟完全,顯影。
使用總RNA 提取試劑盒(vazyme,RC112-01)提取細(xì)胞的總RNA,利用Hifair?Ⅲ1st Strand cDNA Synthesis SuperMix(Yeasen,11141ES60)、Hieff UNICON?Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix(Yeasen,11184ES08)來分別進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和qPCR,具體步驟參考相關(guān)的說明書。選GAPDH作為內(nèi)參。ST6GALNAC1 引物序列為上游:5′-AGCTCTGTGACCAGGTGAGT-3′;下游:5′-ATCCCTTCATCGTGTAGCCG-3′。GAPDH引物序列為上游:5′-ACAGTCAGCCGCATCTTCTT-3′;下 游:5′-GACAAGCTTCCCGTTCTCAG-3′。PCR 擴(kuò) 增 條 件:94℃2 min,94℃2 s,58 ℃20 s,72 ℃20 s,40 個(gè)循環(huán)。
根據(jù)所設(shè)定的顯著性和閾值,對TCGA 數(shù)據(jù)庫獲取的HNSCC 轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜進(jìn)行分析,對比癌組織和正常組織的基因表達(dá)水平,篩選得到在HNSCC 癌組織中異常表達(dá)的1399 個(gè)基因,其中800個(gè)基因表達(dá)升高,399個(gè)基因表達(dá)降低(圖1A)。其中,17 個(gè)糖基轉(zhuǎn)移酶基因表達(dá)異常(圖1B),分 別 是COLGALT1、EXT1、POGLUT2、GALNT2、CHPF、GALNT6、GALNT18、LARGE2、ALG3、XXYLT1表 達(dá) 增 加,GALNT12、GALNT5、FUT2、GCNT3、ST6GALNAC1、FUT6、FUT3 表達(dá)降低,唾液酸轉(zhuǎn)移酶ST6GALNAC1 基因在HNSCC 中表達(dá)顯著下調(diào)(圖1C-D)。
圖1 ST6GALNAC1 基因在HNSCC 中的表達(dá)分析
基于ULCAN數(shù)據(jù)庫挖掘,CPTAC 分析結(jié)果顯
示,ST6GALNAC1 蛋白在HNSCC 中表達(dá)下調(diào)(圖1E)。HPA 數(shù)據(jù)庫的免疫組化結(jié)果表明,與正常組織相比,ST6GALNAC1 在HNSCC 癌組織的表達(dá)顯著降低(圖1F)。以上結(jié)果表明,在HNSCC 癌組織中唾液酸轉(zhuǎn)移酶ST6GALNAC1 無論是在mRNA水平,還是蛋白水平均表達(dá)下調(diào)。
利用UALCAN 數(shù)據(jù)庫分析ST6GALNAC1 基因表達(dá)與HNSCC 患者臨床病理特征的相關(guān)性。ST6GALNAC1 基因表達(dá)與HNSCC 患者性別無相關(guān)性(圖2A)。隨著HNSCC 患者年齡的增加,或患者出現(xiàn)近端和遠(yuǎn)端淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,ST6GALNAC1 基因表達(dá)水平逐漸降低(圖2B、2C)。ST6GALNAC1 基因表達(dá)與HNSCC 患者的腫瘤分期存在負(fù)相關(guān)關(guān)系,但與腫瘤分化程度成正相關(guān)性(圖2D、2E)。
圖2 HNSCC 患者中ST6GALNAC1 的表達(dá)與不同臨床特征的相關(guān)性分析
其次,通過GEPIA2 數(shù)據(jù)庫研究ST6GALNAC1表達(dá)與HNSCC 患者生存時(shí)間之間是否有聯(lián)系,生存分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)ST6GALNAC1 表達(dá)能夠顯著影響HNSCC 患者的生存預(yù)后情況,具體表現(xiàn)為ST6GALNAC1-Low 組HNSCC 患者預(yù)后較差,總體生存時(shí)間(OS)和無病生存時(shí)間(DFS)縮短,而ST6GALNAC1-High 組患者則有良好臨床預(yù)后(圖3A、B)。綜上所述,ST6GALNAC1 表達(dá)降低與HNSCC 患者的臨床病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,和不良預(yù)后生存相關(guān),ST6GALNAC1 可能是一個(gè)有價(jià)值的能夠預(yù)測HNSCC 患者生存時(shí)間的預(yù)后標(biāo)志物。
圖3 ST6GALNAC1 表達(dá)水平HNSCC 患者的生存預(yù)后分析
我們利用TIMER2.0 數(shù)據(jù)庫分析ST6GALNAC1表達(dá)與HNSCC 腫瘤組織微環(huán)境腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)的相關(guān)性。TIMER,TIDE,XCEL,MCPCOUNTER,EPIC 算法的結(jié)果顯示ST6GALNAC1表達(dá)與HNSCC中CAFs浸潤呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(圖4A)。進(jìn)一步,我們基于HNSCC 的基因表達(dá)譜,使用R 軟件IOBR 包選擇ESITMATE、EPIC、Xcell 算法評估ST6GALNAC1-High 組和ST6GALNAC1-Low 組HNSCC 患者的免疫細(xì)胞浸潤情況。ESITMATE 算法結(jié)果顯示,和ST6GALNAC1-High 組 相 比,ST6GALNAC1-Low 組HNSCC 患者的基質(zhì)細(xì)胞、免疫細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞純度評分較高,說明ST6GALNAC1-Low 組HNSCC患者的基質(zhì)細(xì)胞、免疫細(xì)胞浸潤程度較高,腫瘤細(xì)胞的含量也較高(圖4B)。EPIC 算法結(jié)果發(fā)現(xiàn),ST6GALNAC1-Low 組患者的CAFs、巨噬細(xì)胞、CD4 T細(xì)胞和NK細(xì)胞的比例升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖4C)。同樣地,Xcell 算法結(jié)果表明,ST6GALNAC1-Low 組患者大多數(shù)免疫細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的比例也是明顯增加的(圖4E)。另外,我們還觀察到ST6GALNAC1-Low 組患者絕大部分的HLA 基因和免疫檢查點(diǎn)基因表達(dá)的顯著上調(diào),而ST6GALNAC1-High組患者則是相反的趨勢(圖4D、4F)。綜上所述,在HNSCC 中,ST6GALNAC1 表達(dá)降低與各類免疫細(xì)胞浸潤增加、免疫檢查點(diǎn)基因和HLA 基因表達(dá)上調(diào)相關(guān)。
圖4 ST6GALNAC1 表達(dá)與HNSCC 中免疫細(xì)胞景觀的相關(guān)性分析
為了給后續(xù)的機(jī)制研究提供思路,我們進(jìn)一步挖掘與ST6GALNAC1 相關(guān)的基因,并分析他們之間的聯(lián)系。利用STRING 在線工具進(jìn)行蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)網(wǎng)絡(luò)繪制,鑒定了20 個(gè)已有實(shí)驗(yàn)證明與ST6GALNAC1 相關(guān)的基因(圖5A)。然后,在GEPIA2 數(shù)據(jù)庫獲得前100 個(gè)ST6GALNAC1 相關(guān)基因,發(fā)現(xiàn)ST6GALNAC1表達(dá)與含V-Set 免疫球蛋白域蛋白2(VSIG2)、粘蛋白20(MUC20)、磷酸二酯酶4C(PDE4C)、脂肪酶H(LIPH)、巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶3(FUT3)的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(圖5B)。GO 和KEGG 富集分析揭示了ST6GALNAC1 及其相關(guān)蛋白主要參與蛋白糖基化過程,黏蛋白型O-聚糖生物合成和糖鞘脂生物合成過程(圖5C),ST6GALNAC1 及其相關(guān)蛋白的改變可能通過影響以上生物合成過程,進(jìn)一步改變癌細(xì)胞的生物學(xué)過程,從而影響HNSCC 的發(fā)生發(fā)展和免疫細(xì)胞的浸潤。
圖5 ST6GALNAC1 相關(guān)基因的富集分析
為了驗(yàn)證ST6GALNAC1 的表達(dá),我們選擇人舌鱗癌細(xì)胞系(Cal27)來展開進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。通過Western Blot 和q-PCR 來 檢 測Cal27 的ST6GALNAC1 表達(dá)水平,結(jié)果顯示,與人口腔正常成纖維細(xì) 胞(Normal Fibroblast,NF)相 比,Cal27 細(xì) 胞ST6GALNAC1 的蛋白和mRNA 水平是表達(dá)下降的(圖6 A-B)。
圖6 Cal27 細(xì)胞的ST6GALNAC1 表達(dá)水平分析
ST6GALNAC1屬于唾液酸轉(zhuǎn)移酶家族,目前已經(jīng)在卵巢癌[19]、食管鱗狀細(xì)胞癌[20]、結(jié)腸癌[21]、膀胱癌[12]、前列腺癌[22]等腫瘤以及潰瘍性結(jié)腸炎[23]、子宮內(nèi)膜異位癥[24]等多種疾病中發(fā)現(xiàn)ST6GALNAC1的異常表達(dá)。本研究顯示ST6GALNAC1 在HNSCC癌組織中表達(dá)顯著下降,且ST6GALNAC1 的表達(dá)隨著患者年齡的增長和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)而降低,這表明ST6GALNAC1 是治療HNSCC 的潛在靶點(diǎn)。
此外,有研究表明ST6GALNAC1 的表達(dá)與預(yù)后生存狀態(tài)相關(guān)。研究人員發(fā)現(xiàn),ST6GALNAC1過表達(dá)會導(dǎo)致胃癌細(xì)胞腹腔轉(zhuǎn)移增強(qiáng)和小鼠生存期縮短[25]。本研究顯示ST6GALNAC1 表達(dá)降低與較差的OS 和DFS 相關(guān),說明ST6GALNAC1 是預(yù)測HNSCC 患者預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物。
腫瘤微環(huán)境(TME)由先天性免疫細(xì)胞、適應(yīng)性免疫細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和基質(zhì)組成,在腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮舉足輕重的作用,可以顯著影響臨床結(jié)果[26]。生物信息學(xué)工具的飛速發(fā)展使得科研人員能夠迅速全面了解腫瘤微環(huán)境的各類細(xì)胞浸潤情況,從而找到新的治療方向。在本研究中,我們分析了HNSCC 中ST6GALNAC1 表達(dá)與各類細(xì)胞浸潤的關(guān)系。結(jié)果顯示,在HNSCC 中,ST6GALNAC1表達(dá)與CAFs 浸潤呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,即ST6GALNAC1低表達(dá)的HNSCC 患者,CAFs 浸潤增加。CAFs 是腫瘤激活的成纖維細(xì)胞,是TME 中最豐富的基質(zhì)成分之一[27]。越來越多的證據(jù)表明,CAFs 與多種癌癥的不良預(yù)后相關(guān)[28,29]。我們還發(fā)現(xiàn),ST6GALNAC1 表達(dá)降低的HNSCC 患者,CD8+T 細(xì)胞、Th1、Th2、Treg、NK、NKT、巨噬細(xì)胞的比例增高。高密度的T 細(xì)胞,特別是激活的CTLs 和Th1 細(xì)胞與一些腫瘤的良好預(yù)后相關(guān),比如結(jié)腸癌、黑素瘤、胰腺癌和多發(fā)性骨髓瘤[30,31]。然而,也有證據(jù)表明,實(shí)體瘤中的許多T 細(xì)胞亞群參與了腫瘤的促進(jìn)、進(jìn)展或轉(zhuǎn)移,這些T 細(xì)胞亞群包括CD8+T 細(xì)胞[32]、產(chǎn) 生IFN-γ 的Th1 細(xì) 胞[33]、Th2 細(xì) 胞[34]、Th17 細(xì)胞[35]。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)是腫瘤微環(huán)境中最常見的免疫細(xì)胞之一,TAMs 主要促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長,可能是血管生成、腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移所必需的細(xì)胞[36],有研究發(fā)現(xiàn)含量高的TAMs 通常是與預(yù)后不良相關(guān)的[37]。Treg 細(xì)胞主要通過抑制機(jī)體的抗腫瘤反應(yīng)而發(fā)揮促腫瘤作用[38]。腫瘤微環(huán)境中的TAMs、Tregs、中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和髓系來源異質(zhì)性細(xì)胞(MDSCs)等具有免疫抑制特性的免疫細(xì)胞,會賦予癌細(xì)胞免疫逃逸機(jī)制,使其逃離CD8+T 細(xì)胞或NK 細(xì)胞介導(dǎo)的殺傷,增強(qiáng)癌細(xì)胞獲得新突變、進(jìn)化和快速生長的能力[39]。此外,我們還發(fā)現(xiàn)ST6GALNAC1 表達(dá)降低的HNSCC 大部分免疫檢查點(diǎn)基因和HLA 基因表達(dá)增高,表明ST6GALNAC1低表達(dá)患者免疫靶向治療獲益更大。
對ST6GALNAC1 相關(guān)基因進(jìn)行功能富集分析,發(fā)現(xiàn)他們主要參與蛋白糖基化過程,黏蛋白型O-聚糖生物合成和糖鞘脂生物合成過程,這也可能是ST6GALNAC1 參與HNSCC 發(fā)生發(fā)展的潛在機(jī)制。有報(bào)道指出,糖基轉(zhuǎn)移酶活性改變會導(dǎo)致糖基化過程不能順利進(jìn)行,從而暴露Tn 抗原,Tn抗原和半乳糖凝集素3(galectin3)結(jié)合,介導(dǎo)了腫瘤的轉(zhuǎn)移[40]。
最后,我們通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)了ST6GALNAC1 在Cal27 中是低表達(dá)的。盡管ST6GALNAC1 基因表達(dá)的增加在許多癌癥中促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移,但有研究發(fā)現(xiàn)它對起源于神經(jīng)組織的癌癥(如膠質(zhì)瘤)具有相反的作用[41],這可能是因?yàn)橥僖核峄谏窠?jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)和再生中起著關(guān)鍵作用,ST6GALNAC1 可能也是通過類似的機(jī)制對HNSCC產(chǎn)生影響的,然而,本篇論文僅對ST6GALNAC1 在HNSCC 中的表達(dá)進(jìn)行了體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,仍需要進(jìn)一步的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探究ST6GALNAC1 的功能以及機(jī)制。
綜上所述,本研究通過多個(gè)數(shù)據(jù)庫分析明確了ST6GALNAC1 表達(dá)與HNSCC 臨床預(yù)后和免疫細(xì)胞浸潤的關(guān)系,確定了ST6GALNAC1 相關(guān)的基因;還通過實(shí)驗(yàn)確認(rèn)了ST6GALNAC1 在Cal27 中是表達(dá)下調(diào)的。這些結(jié)果提示ST6GALNAC1 可能是一種新的、有前景的HNSCC 預(yù)后和免疫治療生物標(biāo)志物,相信這些發(fā)現(xiàn)可能為前瞻性功能實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ),并最終在臨床實(shí)踐中產(chǎn)生積極的影響。