甘露寡糖對(duì)波紋龍蝦葉狀幼體生長(zhǎng)的影響

何藝賓 黃標(biāo)武 林金華

摘要：為探索甘露寡糖（mannose-oligosaccharides，MOS） 對(duì)波紋龍蝦葉狀幼體生長(zhǎng)的促進(jìn)作用，本研究設(shè)置3個(gè)試驗(yàn)組，分別投喂用不同濃度甘露寡糖強(qiáng)化的鹵蟲，統(tǒng)計(jì)各試驗(yàn)組培養(yǎng)3d、5d、7d后波紋龍蝦葉狀幼體的成活率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，1#餌料組（0.4 %甘露寡糖強(qiáng)化）培養(yǎng)3d、5d、7d的成活率分別為（72.5±2.5）%、（57.5±2.5）%、（42.5±2.5）%，明顯高于其它試驗(yàn)組。餌料中添加甘露寡糖可提高波紋龍蝦葉狀幼體的成活率，甘露寡糖最佳添加濃度為0.4 %。

關(guān)鍵詞：甘露寡糖；波紋龍蝦；葉狀幼體；生長(zhǎng)發(fā)育

中圖分類號(hào)：S962 ????文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

基金項(xiàng)目：廈門海洋職業(yè)技術(shù)學(xué)院海洋生物學(xué)院2019年高層次人才科研專項(xiàng)。

作者簡(jiǎn)介：何藝賓（1981-），男，講師。研究方向： 海洋生物技術(shù)， E-mail： 59948397@qq.com．

波紋龍蝦 （Panulirus homarus）屬于節(jié)肢動(dòng)物門，甲殼綱，十足目， 龍蝦科， 龍蝦屬，分布于印度洋-西太平洋海域，常棲息在水質(zhì)清新的巖礁有沙地帶。波紋龍蝦不僅肉味鮮美具有極高的食用價(jià)值 ， 而且在工業(yè)、醫(yī)藥及工藝欣賞等方面也具有一定的價(jià)值，深受人們的喜愛(ài)。近年來(lái)，波紋龍蝦的人工養(yǎng)殖越來(lái)越引起人們的關(guān)注，然而中國(guó)海區(qū)龍蝦資源缺乏，以捕撈天然龍蝦苗種進(jìn)行人工養(yǎng)殖無(wú)法滿足長(zhǎng)期需求［1］。

波紋龍蝦的幼體分為葉狀幼體和游龍蝦幼體。由于葉狀幼體期較長(zhǎng)，餌料組成較復(fù)雜，葉狀幼體人工培育迄今還是世界難題［2］。目前國(guó)內(nèi)關(guān)于波紋龍蝦人工繁殖的報(bào)道較少，陳昌生等（2003年）對(duì)波紋龍蝦早期葉狀幼體培育進(jìn)行了初步研究，經(jīng)過(guò) 69 d培育獲得了蛻皮8次的幼體。劉慧玲等（2008年）研究發(fā)現(xiàn)將藻類與鹵蟲作為餌料喂食波紋龍蝦早期葉狀幼體，培育效果較好，經(jīng)過(guò) 54 d培育獲得了脫皮9次的葉狀幼體［3］。波紋龍蝦人工育苗技術(shù)迄今仍未突破，嚴(yán)重阻礙了波紋龍蝦人工養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。

甘露寡糖是從酵母培養(yǎng)細(xì)胞壁中提取的一類新型抗原活性物質(zhì)，具有提高成活率、促進(jìn)生長(zhǎng)和提高免疫力等作用，已作為飼料添加劑廣泛用于飼料工業(yè)［4-5］。張炎灼［6］等（2014年）報(bào)道在大黃魚飼料中添加0.2 %甘露寡糖能有效促進(jìn)大黃魚幼魚生長(zhǎng)并提高幼魚的抗病能力。Sang［7］等（2010年）報(bào)道餌料中添加甘露寡糖不僅能夠促進(jìn)錦繡龍蝦幼體的生長(zhǎng)，而且還能提高波紋龍蝦幼體的成活率。本研究中先用甘露寡糖對(duì)鹵蟲幼體進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化，進(jìn)而喂食波紋龍蝦葉狀幼體，研究甘露寡糖對(duì)波紋龍蝦葉狀幼體生長(zhǎng)發(fā)育的影響，為波紋龍蝦的人工繁育提供一種新的思路。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

波紋龍蝦：由廈門海滄某水產(chǎn)種苗有限公司提供。

主要實(shí)驗(yàn)試劑：甘露寡糖購(gòu)自Sigma公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 抱卵波紋龍蝦培育

從養(yǎng)殖池中將抱卵的波紋龍蝦挑選出來(lái)，放入網(wǎng)箱暫養(yǎng)于水泥池（約 30 m2）中，鹽度 30 ‰，水溫保持在28～29℃，早晚各投喂新鮮花蛤 1次，花蛤投喂前先用高猛酸鉀中浸泡10 min，充氣，隔天清理花蛤殼并更換10 %的水，暫養(yǎng)過(guò)程中注意觀察卵的顏色變化。

1.2.2 葉狀幼體培育

從暫養(yǎng)池中將卵的顏色為棕紅色的波紋龍蝦挑選出來(lái)，放入新的水泥池繼續(xù)培養(yǎng)7～10 d后可孵出葉狀幼體，燈誘收集龍蝦幼體，培養(yǎng)于新的水泥池中，密度：2萬(wàn)～3萬(wàn)尾/m3，鹽度 30 ‰，水溫保持在28～29℃，pH保持在8.0～8.2，第一天投喂鹵蟲幼體，第二天投喂鹵蟲和豐年蟲各半，第三天以后投喂豐年蟲，早晚各投喂2次，定期觀察葉狀幼體的形態(tài)變化并記錄各期所用時(shí)間。

1.2.3 甘露寡糖對(duì)波紋龍蝦葉狀幼體成活率的影響

設(shè)置3個(gè)試驗(yàn)組，每組1個(gè)重復(fù)，投喂餌料分別為1#餌料：鹵蟲，0.4 %甘露寡糖強(qiáng)化；2#餌料：鹵蟲，0.2 %甘露寡糖強(qiáng)化；3#餌料：鹵蟲。各隨機(jī)選取20尾剛孵化出來(lái)的葉狀幼體，移入5 L的容量瓶中充氣培養(yǎng)，鹽度 30 ‰。每天投喂餌料2次早上9∶00和 下午17∶00，分別培養(yǎng)3d、5d、7d后統(tǒng)計(jì)各試驗(yàn)組的存活率。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理

采用GraphPad Prism 5軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 波紋龍蝦受精卵顏色變化觀察

波紋龍蝦受精卵發(fā)育過(guò)程中會(huì)發(fā)生顏色變化，培養(yǎng)初期為橘黃色，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，卵的顏色逐漸加深，變?yōu)樽丶t色，如圖1所示。

2.2 葉狀幼體形狀觀察

波紋龍蝦葉狀幼體每蛻皮1次即為一個(gè)新的發(fā)育時(shí)期，其肝胰臟、第 1步足外肢羽狀剛毛的對(duì)數(shù)等形態(tài)特征會(huì)發(fā)生相應(yīng)的變化。本研究以第 1足外肢羽狀剛毛的對(duì)數(shù)為分期標(biāo)準(zhǔn)， 5對(duì)羽狀剛毛時(shí)期為發(fā)育Ⅰ期，6對(duì)羽狀剛毛時(shí)期為發(fā)育Ⅱ期，以此類推。隨著發(fā)育時(shí)期的進(jìn)行，葉狀幼體肝胰臟逐漸變大、中葉瓣?duì)钸吘墐?nèi)陷程度也逐漸加深。不同發(fā)育時(shí)期的第 1步足外肢羽狀剛毛對(duì)數(shù)，如圖2所示。

2.3 甘露寡糖對(duì)波紋龍蝦葉狀幼體成活率的影響

分別統(tǒng)計(jì)用3種不同餌料投喂3d、5d、7d后，各試驗(yàn)組中波紋龍蝦葉狀幼體的成活個(gè)數(shù)，并計(jì)算各試驗(yàn)組的存活率。從如圖3可知：投喂3天后，1#餌料組的成活率為（72.5±2.5）%，2#餌料組的成活率為（62.5±2.5）%，3#餌料組的成活率為（57.5±2.5）%；投喂5d后，1#餌料組的成活率為（57.5±2.5）%，2#餌料組的成活率為（47.5±2.5）%，3#餌料組的成活率為（37.5±2.5）%；投喂7d后，1#餌料組的成活率為（42.5±2.5）%，2#餌料組的成活率為（32.5±2.5）%，3#餌料組的成活率為（22.5±2.5）%；與其它試驗(yàn)組相比較，1#餌料組的成活率明顯高于2#餌料組和對(duì)照組。

3討論

由于波紋龍蝦葉狀幼體期較長(zhǎng)，餌料組成較復(fù)雜，波紋龍蝦人工育苗迄今仍未取得突破，未能形成產(chǎn)業(yè)化。波紋龍蝦葉狀幼體每蛻皮1次即為一個(gè)新的發(fā)育時(shí)期，但養(yǎng)殖水體不同、投喂的餌料不同，各發(fā)育時(shí)期的時(shí)間長(zhǎng)短也不相同。適合的餌料、合理的養(yǎng)殖密度是幼體人工培育成功的關(guān)鍵 。陳昌生等用魚油強(qiáng)化過(guò)的豐年蟲幼體投喂龍蝦幼體，經(jīng)過(guò) 69 d培育獲得了蛻皮 8 次的幼體。劉慧玲等扁藻加鹵蟲作為餌料投喂喂龍蝦幼體，經(jīng)過(guò) 54 d培育獲得了脫皮 9 次的幼體。本研究利用水泥池（約30 m2）進(jìn)行幼體培育，用 0.4 % 甘露寡糖、小球藻強(qiáng)化過(guò)的豐年蟲幼體投喂龍蝦幼體，經(jīng)過(guò) 37 d培育獲得了蛻皮 6 次的幼體，幼體的生長(zhǎng)速度介于陳昌生和劉慧玲報(bào)道的生長(zhǎng)速度之間，后續(xù)研究中將繼續(xù)對(duì)葉狀幼體的餌料組成進(jìn)行優(yōu)化。

近年來(lái)，甘露寡糖作為一種功能性寡糖，具有提高養(yǎng)殖動(dòng)物的生產(chǎn)性能、改善腸道微生物區(qū)系以及提高免疫功能等功能，已被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物飼料中。甘露寡糖對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)的促進(jìn)作用也越來(lái)越引起廣大科研工作者的興趣。于艷梅［8］等報(bào)道在黃顙魚飼料中添加甘露寡糖可顯著提高黃顙魚血液白細(xì)胞吞噬活性，降低餌料系數(shù)進(jìn)而促進(jìn)黃顙魚的生長(zhǎng)。胡凌豪［9］等（2019年）報(bào)道斜帶石斑魚飼料中添加寡聚糖通過(guò)提高腸道絨毛高度、絨毛寬度，改善幼魚腸道形態(tài)，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)吸收、消化，促進(jìn)幼魚的生長(zhǎng)。Lu z y［10］等（2020年）報(bào)道草魚飼料中添加甘露寡糖可顯著提升頭腎和脾臟的免疫功能，提高草魚的抗病能力。本研究發(fā)現(xiàn)甘露寡糖能提高波紋龍蝦葉狀幼體的成活率，甘露寡糖對(duì)龍蝦幼體生長(zhǎng)的促進(jìn)作用機(jī)理有待進(jìn)一步深入研究。

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