劉光斌 張宇博 王艷 趙麗萍 張玉葉 毛和平

摘要：目的：對(duì)五根湯口服液的加速穩(wěn)定性及長(zhǎng)期穩(wěn)定性進(jìn)行考察。方法：根據(jù)加速穩(wěn)定性及長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)方法，檢測(cè)五根湯口服液的性狀、PH 值、相對(duì)密度。采用 TLC 法對(duì)其主要成分葛根、紅花、大黃、山豆根、板藍(lán)根進(jìn)行鑒別。40℃±2℃，相對(duì)濕度為75%±5%的條件下放置6個(gè)月，溫度為25℃±2℃，相對(duì)濕度為60%±5%的條件下放置24個(gè)月期內(nèi)外觀性狀，測(cè)定、PH 值、相對(duì)密度、微生物及其主要活性成分葛根、紅花、大黃、山豆根、板藍(lán)根的變化；采用高效液相色譜法檢測(cè)口服液中葛根素的含量變化。結(jié)果：密封貯存24個(gè)月期內(nèi)五根湯口服液的外觀性狀、PH 值、相對(duì)密度、微生物等變化均在合格范圍內(nèi)， 其主要活性成分葛根、紅花、大黃、山豆根、板藍(lán)根穩(wěn)定，口服液中葛根素的含量幾乎無(wú)變化。結(jié)論：五根湯口服液直接接觸藥品的包裝材料能夠保證制劑在有效期內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定。

關(guān)鍵詞：五根湯口服液;穩(wěn)定性; TLC；HPLC

中圖分類(lèi)號(hào)：R286.0??????????????????????????? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

五根湯口服液是我院根據(jù)內(nèi)蒙古老中醫(yī)李鳳林先生治療小兒發(fā)燒的處方優(yōu)化后通過(guò)一定工藝提取濃縮制備而成的院內(nèi)中藥制劑。處方由葛根，板藍(lán)根，蘆根，山豆根，白茅根等八味藥材組成，具有解表清里，解肌和營(yíng)，調(diào)和氣血，清熱解毒，并有抗病毒、抑制細(xì)菌和消炎作用[1-3]。主要治療傷風(fēng)感冒、流行性感冒、扁桃體炎、猩紅熱等疾病所導(dǎo)致的發(fā)熱，還可治療不明原因發(fā)熱等癥。為了保證藥品在貯藏及使用期間的質(zhì)量控制，根據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑注冊(cè)管理辦法》中關(guān)于申報(bào)資料的相關(guān)要求，以及《原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性指導(dǎo)原則》（《中國(guó)藥典》2020年版四部通則9001）中口服液穩(wěn)定性考察的有關(guān)內(nèi)容，對(duì)五根湯口服液的初步穩(wěn)定性進(jìn)行了試驗(yàn)研究。內(nèi)容包括制劑外觀性狀、鑒別、檢查、相對(duì)密度、pH 值、含量測(cè)定、衛(wèi)生學(xué)檢查等指標(biāo)、通過(guò)加速試驗(yàn)6個(gè)月和長(zhǎng)期試驗(yàn)24個(gè)月，為確定五根湯口服液的有效期及儲(chǔ)存條件提供依據(jù)。

1檢測(cè)與方法

1.1儀器

LC-2010AHT 型高效液相色譜儀（日本島津），島津 LC solution 工作站；AUW220D電子分析天平（日本島津）；TU-1221紫外-可見(jiàn)分光光度儀（北京普析通用）；數(shù)碼超聲波清洗機(jī)（廣東固特超聲股份有限公司）； BHS-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（上海馳唐電子有限公司）； HX-TLC-3H型薄層顯色加熱板（武漢恒信世紀(jì)科技有限公司）；ZF-20A型暗箱四用紫外分析儀[驥輝分析儀器（上海）有限公司]；SLD-I 型薄層顯色噴霧泵（天津市思利達(dá)科技有限公司）；PHS-3E 型 pH 計(jì)（上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司）；雙槽展開(kāi)缸（10 cm×10 cm，上海信宜儀器廠(chǎng)）；LRH-80F型細(xì)菌培養(yǎng)箱（上海量壹科學(xué)儀器有限公司）；MJX-80S 霉菌培養(yǎng)箱（上海旌派儀器有限公司）；硅膠G 薄層板（青島海洋化工有限公司）。

1.2試劑與樣品

葛根素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定院，110752-201816）；葛根對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院121551-201404）；紅花對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院120907-201412）。板藍(lán)根對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院121177-201608）?？鄥A對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院110805-200508）。大黃對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院120984-201202）。五根湯口服液中試樣品三批（20190225、2020190226、20190228）為酒鋼醫(yī)院制備；中試樣品試制規(guī)模均為10個(gè)處方量的生產(chǎn)規(guī)模，批量符合穩(wěn)定性試驗(yàn)的要求，樣品具有代表性，包裝形式與規(guī)格：采用10ml 端肩管制口服液瓶包裝，10mL/瓶×6支/盒。樣品包裝形式與擬上市包裝一致。甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

1.3藥材

試驗(yàn)用原藥材及輔料來(lái)源見(jiàn)表1所列。

表1試驗(yàn)用原藥材及輔料來(lái)源

按照中華人民共和國(guó)藥典2020版一部標(biāo)準(zhǔn)對(duì)表1中所有中藥飲片及輔料進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果均合格后方可制備制劑。

1.4觀察指標(biāo)[4-10]

1.4.1? 考察項(xiàng)目

參照《原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》（《中國(guó)藥典》2020年版四部通則9001）對(duì)口服液穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目要求，結(jié)合五根湯口服液穩(wěn)定性的要求，重點(diǎn)考察五根湯口服液的外觀性狀、pH 值、鑒別項(xiàng)、微生物限度、相對(duì)密度以及主要成分的含量測(cè)定。

1.4.2 定性與定量

（1）性狀：棕紅色至棕褐色的液體；氣微香；味甜，微苦。（2）定性測(cè)定：用 TLC 法對(duì)主要活性成分葛根、紅花、大黃、山豆根、板藍(lán)根的鑒別，在TLC 譜圖中，樣品溶

液和對(duì)照藥材、對(duì)照品溶液在相同位置顯相同顏色的斑點(diǎn)。（3）定量測(cè)定：采用高效液相色譜法測(cè)定口服液中葛根素的含量，本品每1mL含葛根以葛根素計(jì)，不得少于0.80（mg·mL-1）。（4）微生物限度：細(xì)菌小于100個(gè)/g；霉菌小于10個(gè)/g；不得檢出大腸桿菌及活螨。（5）相對(duì)密度不小于1.00；pH 值要求在4～6。

1.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

依據(jù)《中國(guó)藥典》2020年版四部通則0181口服液劑項(xiàng)下：“除另有規(guī)定外，口服液應(yīng)密封，置陰涼處貯存，口服液應(yīng)澄清。在貯存期間不得有發(fā)霉、酸敗、異物、變色、產(chǎn)生氣體或其他變質(zhì)現(xiàn)象，允許有少量搖支即易散的沉淀”。基于此規(guī)定，對(duì)五根湯口服液進(jìn)行以下的穩(wěn)定性試驗(yàn)項(xiàng)目。

（1）高溫試驗(yàn)

試驗(yàn)方法：分別隨機(jī)抽取本品三個(gè)批號(hào)各20支，除去外包裝，置60℃溫度下留樣儲(chǔ)存10 d 。在第0 d、第5 d 和第10 d 分別取樣，按五根湯口服液穩(wěn)定性考察項(xiàng)目進(jìn)行觀察與檢測(cè)。所得結(jié)果與第0 d 的考察項(xiàng)目結(jié)果進(jìn)行比較，考察五根湯口服液樣品在高溫試驗(yàn)條件下的穩(wěn)定性。外觀性狀、pH 值、鑒別項(xiàng)、微生物限度、相對(duì)密度以及主要成分的含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2所列。

（2）高溫試驗(yàn)小結(jié)

五根湯口服液在高溫60℃條件下留樣考察10 d，與第0 d 的觀察及試驗(yàn)結(jié)果相比較，樣品外觀性狀沒(méi)有明顯變化，未發(fā)現(xiàn)口服液出現(xiàn)發(fā)霉、酸敗、異物、變色、產(chǎn)生氣體或其他變質(zhì)現(xiàn)象，各項(xiàng)試驗(yàn)考察指標(biāo)基本無(wú)變化，樣品穩(wěn)定性較好，說(shuō)明五根湯口服液在60℃條件下是比較穩(wěn)定的。

1.4.4 強(qiáng)光照射試驗(yàn)

（1）試驗(yàn)方法：分別隨機(jī)抽取本品三個(gè)批號(hào)各20支，除去內(nèi)包裝，置強(qiáng)光照射試驗(yàn)箱中，于照度為4500Lx±500Lx （25℃）的條件下留樣放置10 d，在第0 d、第5 d 和第10 d 分別取樣，按五根湯口服液穩(wěn)定性考察項(xiàng)目進(jìn)行觀察與檢測(cè)。所得結(jié)果與第0 d 的考察項(xiàng)目結(jié)果進(jìn)行比較，考察五根湯口服液樣品在強(qiáng)光照射試驗(yàn)條件下的穩(wěn)定性。外觀性狀、pH 值、鑒別項(xiàng)、微生物限度、相對(duì)密度以及主要成分的含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3所列。

（2）強(qiáng)光試驗(yàn)小結(jié)：五根湯口服液在照度為4500 Lx±500 Lx強(qiáng)光條件下留樣考察10 d，與第0 d 的觀察及試驗(yàn)結(jié)果相比較，樣品的外觀性狀沒(méi)有發(fā)生明顯變化，未發(fā)現(xiàn)口服液出現(xiàn)發(fā)霉、酸敗、異物、變色、產(chǎn)生氣體或其他變質(zhì)現(xiàn)象，各項(xiàng)試驗(yàn)考察指標(biāo)基本無(wú)變化，樣品穩(wěn)定性較好，說(shuō)明五根湯口服液在強(qiáng)光試驗(yàn)條件下是比較穩(wěn)定的。

1.4.5 加速試驗(yàn)

（1）試驗(yàn)方法：將本品三批（批號(hào)：20190225、

2020190226、20190228）模擬市售包裝，在溫度40℃±2℃，相對(duì)濕度75%±5%條件下留樣放置6個(gè)月，試驗(yàn)期間分別在第1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月末分別取樣一次，按五根湯口服液穩(wěn)定性考察項(xiàng)目進(jìn)行觀察與檢測(cè)。所得結(jié)果與第0月的考察項(xiàng)目結(jié)果進(jìn)行比較，考察五根湯口服液樣品在加速試驗(yàn)條件下的穩(wěn)定性。外觀性狀、pH 值、鑒別項(xiàng)、微生物限（2）加速試驗(yàn)小結(jié)：本品的加速試驗(yàn)結(jié)果表明，五根湯口服液在模擬市售包裝保護(hù)的情況下，在加速試驗(yàn)（40℃±2℃、RH 75%±5%）條件下放置6個(gè)月，與0月數(shù)據(jù)比較，樣品的各項(xiàng)穩(wěn)定性考察項(xiàng)目無(wú)明顯變化。加速試驗(yàn)是通過(guò)加快模擬市售包裝中藥品的化學(xué)或物理變化速度來(lái)考察藥品穩(wěn)定性。試驗(yàn)結(jié)果表明，五根湯口服液在加速試驗(yàn)條件下穩(wěn)定性良好。

1.4.6 長(zhǎng)期試驗(yàn)

（1）試驗(yàn)方法將本品三批（批號(hào)：20190225、

2020190226、20190228）模擬上市包裝樣品模擬市售包裝，在溫度25℃±2℃，相對(duì)濕度60%±10%條件下進(jìn)行試驗(yàn)，取樣時(shí)間點(diǎn)在第一年3個(gè)月末、6個(gè)月末、9個(gè)月末、12個(gè)月末分別取樣一次，第二年6個(gè)月末、12個(gè)月末分別取樣一次。按五根湯口服液穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目（外觀性狀、pH 值、薄層色譜鑒別項(xiàng)、微生物限度、相對(duì)密度和主要成分含量測(cè)定）檢測(cè)。結(jié)果與0月的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，觀察五根湯口服液樣品在長(zhǎng)期試驗(yàn)條件下的穩(wěn)定性，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5所列。

（2）長(zhǎng)期試驗(yàn)小結(jié)在長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)（25℃±2℃，相對(duì)濕度60%±10%）條件下放置24個(gè)月，五根湯口服液3批樣品的觀性狀、pH 值、相對(duì)密度、薄層色譜鑒別、微生物限度和含量測(cè)定等各項(xiàng)考察指標(biāo)沒(méi)有顯著性變化，說(shuō)明本品在溫度25℃±2℃，相對(duì)濕度60%±10%條件下性質(zhì)基本穩(wěn)定。

3討論

根據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑注冊(cè)管理辦法》對(duì)醫(yī)院中藥制劑申報(bào)資料的要求，以及《原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》（《中國(guó)藥典》2020年版四部通則9001）中制劑穩(wěn)定性考察的有關(guān)內(nèi)容，對(duì)五根湯口服液的初步穩(wěn)定性進(jìn)行了試驗(yàn)研究。本品經(jīng)高溫試驗(yàn)條件下（60℃）10 d、強(qiáng)光試驗(yàn)（4500 Lx±500 Lx）條件下照射10 d，各項(xiàng)觀察指標(biāo)基本穩(wěn)定。加速試驗(yàn)（40℃±2℃、RH 75%±5%）6個(gè)月的考察結(jié)果表明，五根湯口服液3批樣品在模擬上市包裝條件下性質(zhì)基本穩(wěn)定，表明五根湯口服液在設(shè)定的試驗(yàn)條件下穩(wěn)定性良好。長(zhǎng)期試驗(yàn)（25℃±2℃，相對(duì)濕度60%±10%）24個(gè)月的考察結(jié)果表明五根湯口服液3批樣品在模擬上市包裝條件下性質(zhì)基本穩(wěn)定，說(shuō)明五根湯口服液直接接觸藥品的包裝材料能夠保證制劑在有效期內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定，相容性好，對(duì)制劑質(zhì)量穩(wěn)定性無(wú)顯著影響。根據(jù)穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果，本品的有效期初步確定為24個(gè)月。貯存條件確定為：密封保存。

參考文獻(xiàn)：

[1] 王永炎.中醫(yī)內(nèi)科學(xué)[M ].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1994：31，34，59，60.

[2] 郭博信.中醫(yī)是無(wú)形的科學(xué)[M ].山西：山西科學(xué)技術(shù)出版社，2013：261.

[3] 孫美鳳，楊貴林，王振，等.五根湯在成人上呼吸感染的應(yīng)用舉隅[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2016，35（4）：44-45.

[4] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（四部）[S].2015年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：354，378.

[5] 劉光斌，李懷彪.大黃通氣口服液的穩(wěn)定性研究[J].西部中醫(yī)藥，2013，26（11）：25-29．

[6] 姜芳寧，劉光斌，高穎.復(fù)神丸制劑的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)研究[J].甘肅科技縱橫，2021，50（8）：36-38.

[7] 虞慧華，李靜嫻，江春霞，等.知百安神口服液制備工藝優(yōu)化及穩(wěn)定性研究[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志，2021，39（6）：549-551.

[8] 王玉霞，劉文利，李麗，等.中藥制劑歸芪飲口服液穩(wěn)定性的研究[J].山東畜牧獸醫(yī)，2017，38（12）：1-3.

[9] 王海鋒，朱濤，楊海燕，等.四逆清帶口服液穩(wěn)定性研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2018，25（1）：60-62.

[10] 曾棋平，楊麗娜，王藝紅，等.氣血雙補(bǔ)口服液的穩(wěn)定性研究[J].藥學(xué)服務(wù)與研究，2017，17（5）：384-387.