蔣蒨 譚茂蘭 鄭磊 陳雨婷 張熙

【摘 要】 目的：建立測定糖降腎康顆粒中總木脂素苷含量的方法。方法：采用雙波長紫外分光光度法，在200～400 nm范圍內(nèi)對牛蒡苷對照品溶液、綠原酸對照品溶液以及糖降腎康顆粒供試品溶液進行掃描，在牛蒡苷對照品溶液紫外掃描圖中確定最大吸收波長280 nm為測定波長λ1；在綠原酸對照品溶液紫外掃描圖中，確定檢測波長（λ1=280 nm）的等吸收點波長350 nm為參比波長λ2；以牛蒡苷為對照品，測定糖降腎康顆粒中總木脂素苷的含量。結(jié)果：該方法的精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性良好，在0.00795～0.07155 mg·mL-1濃度范圍內(nèi)，牛蒡苷的濃度與吸光度差值呈線性相關(guān)，r=0.9999，平均回收率為100.8%，RSD為1.04%（n=6）；三批糖降腎康顆粒中含總木脂素苷以牛蒡苷計，均不少于20%。 結(jié)論：采用等吸收雙波長紫外分光光度法測定總木脂素含量方法操作簡便，準(zhǔn)確度、精密度、穩(wěn)定性良好，可作為糖降腎康顆粒中總木脂素苷的含量測定和質(zhì)量控制方法。

【關(guān)鍵詞】 糖降腎康顆粒；牛蒡子；總木脂素苷；等吸收雙波長紫外分光光度法

【中圖分類號】R284.1?? 【文獻標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2023）03-0032-04

Determination of Total Lignosides in Tangjiangshenkang Granules

by Two-wavelength Ultraviolet Spectrophotometry

JIANG Qian TAN Maolan ZHENG Lei CHEN Yuting ZHANG Xi

Chongqing Kerui Pharmaceutical（Group） Co.，LTD.，Chongqing 400060，China

Abstract：Objective To establish a determination method for the content of total lignosides in Tangjiangshenkang granules.Method By two-wavelength ultraviolet spectrophotometry （TWUS）， scan arctiin control solution， chlorogenic acid control solution and tangjiangshenkang granule test solution in the range of 200-400nm. In the ultraviolet scanning diagram of arctiin reference solution， the maximum absorption wavelength of 280nm was determined as the determination wavelength λ1. Determine the detection wavelength in the ultraviolet scanning diagram of chlorogenic acid reference solution（λ1= 280nm）， and 350nm is the reference wavelengthλ2；The content of total lignosides in tangjiangshenkang granules was determined with arctiin as the reference substance.Result The precision， accuracy， and durability of this method were fine. The concentration of arctiin was linearly correlated with the absorbance difference in the range of 0.00795-0.07155 mg·mL-1 （r=0.9999）. The average recovery of arctiin was 100.8%， and the RSD value was 1.04% （n=6）. Calculated as arctiin， three batches of tangjiangshenkang granules contain no less than 20% of total lignosides.Conclusion The method has the advantages of simple operation， good accuracy， precision and reliable stability. It can be used as the content determination and quality control method of total lignosides in Tangjiangshenkang granules.

Keywords：Tangjiangshenkang Granules; Fructus Arctii;Total Lignanoids; Two-wavelength Ultraviolet Spectrophotometry

糖降腎康顆粒是由單味藥材牛蒡子，經(jīng)現(xiàn)代工藝提取加工制成的中藥制劑，目前為臨床上唯一的一個作用機理明確、作用成分清楚的，用于治療糖尿病腎病的藥物［1］，其主要活性組分為牛蒡子提取物中的木脂素類化合物 ［2］。因此，糖降腎康顆粒中總木脂素苷的含量是該品種的重要質(zhì)量指標(biāo)。

在糖降腎康顆粒標(biāo)準(zhǔn)以及相關(guān)文獻［3-4］ ，均采用牛蒡苷為對照品的紫外分光光度法測定總木脂素苷的含量。然而，根據(jù)牛蒡子的提取工藝，在糖降腎康顆粒中除了含有木脂素類化合物外，還含有少量的包括綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、咖啡酰奎寧酸類等在內(nèi)的有機酸 ［5-7］，在檢測波長280 nm下，有機酸的紫外吸收強度較大，對檢測結(jié)果影響較大。因此，試驗采用等吸收雙波長紫外分光光度法對糖降腎康中總木脂素苷的含量進行檢測，消除有機酸類化合物在測定波長下的干擾，提高總木脂素苷含量測定的準(zhǔn)確性。

1 儀器與材料

UV-2600紫外分光光度儀（日本島津）；KQ-500DV超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；XS105DU電子天平（十萬分之一，Mettler Toledo）；MS204S電子天平（萬分之一，Mettler Toledo）。

糖降腎康顆粒（重慶科瑞制藥集團有限公司，批號：2004L04979）；牛蒡苷（中國食品藥品檢定研究院，批號：110819-201611）；綠原酸（中國食品藥品檢定研究院，110753-201415）；甲醇，分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液配制

2.1.1 對照品溶液 綠原酸對照品溶液制備：精密稱取綠原酸對照品適量，加甲醇溶解，制成每1 mL含8 μg的溶液。牛蒡苷對照品溶液的制備：精密稱取牛蒡苷對照品適量，加甲醇溶解，制成每1 mL含0.08 mg的溶液。

2.1.2 供試品溶液 取糖降腎康顆粒適量，研細(xì)，取研細(xì)藥粉0.10 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加適量甲醇超聲處理30 min，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2 參比波長的確定 在200～400 nm范圍內(nèi)，對牛蒡苷對照品溶液、綠原酸對照品溶液以及糖降腎康顆粒供試品溶液進行掃描，結(jié)果顯示（如圖1所示），牛蒡苷在280 nm左右具有最大吸收；綠原酸在330 nm左右具有最大吸收，且綠原酸在280 nm左右也具有較大的吸收。因此，試驗采用等吸收雙波長紫外分光光度法，在綠原酸對照品溶液紫外掃描圖中，確定檢測波長（λ1=280 nm）在350 nm波長附近的等吸收點波長為參比波長λ2；再測定供試品溶液在檢測波長λ1（280 nm）和參比波長（λ2）處的吸光度，以吸光度差值計算總木脂素苷的含量，以消除有機酸類化合物對總木脂素苷含量測定的影響。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取牛蒡苷對照品溶液1.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、7.0 mL、9.0 mL分別置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，在測定波長λ1（280 nm）和參比波長λ2（351.4 nm）處測定吸光度，以吸光度差值ΔA（ΔA＝Aλ1－Aλ2）為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進行回歸計算，得到線性回歸方程為△A=10.019C+0.0086，牛蒡苷濃度0.00795～0.07155 mg·mL-1范圍內(nèi)與△A呈線性，相關(guān)系數(shù)r為 0.9999。

2.4 測定法 取供試品溶液適量，照紫外-可見分光光度法，測定在測定波長λ1（280 nm）和參比波長λ2（351.4 nm）處的吸光度，將吸光度差值△A（△A=Aλ1-Aλ2）代入線性回歸方程，計算牛蒡苷含量，以牛蒡苷含量計作總木脂素苷含量。

2.5 精密度試驗 精密量取牛蒡苷對照品溶液5.0 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，測定在測定波長λ1（280 nm）和參比波長λ2（351.6 nm）的吸光度，連續(xù)測定6次，計算吸光度差值ΔA（ΔA＝Aλ1－Aλ2）及ΔA的RSD值。6次吸光度差值ΔA平均值為0.405，RSD（n=6）為0.19%。

2.6 重復(fù)性試驗 取糖降腎康顆粒（批號2004L04979），照“2.1.2” 項下制備供試品溶液，平行制備6份，按照“2.4測定法”對各供試品溶液進行檢測，計算總木脂素苷含量，并計算含量RSD值。糖降腎康顆粒中總木脂素苷平均含量為17.97%，RSD值為0.67%。

2.7 加樣回收率試驗 取已知總木脂素苷含量的糖降腎康顆粒（批號2004L04979）研細(xì)藥粉約50 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，精密加入一定量的牛蒡苷對照品（加入量與樣品中總木脂素苷含量比例約1∶1），照“2.1.2供試品溶液”中制備方法自“加甲醇適量”起，制備回收率供試品溶液，平行制備6份。按照“2.4測定法”對各供試品溶液進行檢測，計算回收率。結(jié)果顯示糖降腎康顆粒中總木脂素的平均回收率為100.8%，RSD（n=6）為1.04%。結(jié)果見表1。

2.8 穩(wěn)定性試驗 取糖降腎康顆粒（批號2004L04979）適量，照“2.1.2” 項下制備供試品溶液，分別于0 h、0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h按照“2.4測定法”項下測定各供試品溶液，計算各測定時間點吸光度差值ΔA及RSD值。結(jié)果顯示在4 h內(nèi)，糖降腎康顆粒中總木脂素苷吸光度差值ΔA的平均值為0.320，RSD（n=6）為0.67%，說明供試品溶液在4 h測定時間內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 樣品含量測定 另取糖降腎康顆粒3批，照“2.1.2” 項下制備供試品溶液，并按照“2.4測定法”對各供試品溶液進行測定，將吸光度差值ΔA代入線性回歸方程，計算總木脂素苷含量。同時采用單波長法，計算280 nm檢測波長下，供試品中總木脂素苷的含量。兩種方法對3批樣品的檢測結(jié)果見下表2。

3 討論

根據(jù)相關(guān)文獻［3-4］，木脂素類化合物結(jié)構(gòu)相似，總木脂素與牛蒡苷在同一波長（280 nm）下均有吸收；同時牛蒡苷為牛蒡子中木脂素類化合物主要成分，在顆粒中與總木脂素苷的基本比例為1∶2［4］，即在總木脂素苷中牛蒡苷的含量在50%。因此，選擇牛蒡苷作為對照品，采用紫外分光光度法測定糖降腎康顆粒中總木脂素苷的含量。

對牛蒡子提取物進行了研究，結(jié)果顯示，在提取物中存在10%左右的有機酸，主要為綠原酸、咖啡酸、3，4-二咖啡?？鼘幩?、3，5-二咖啡酰奎寧酸和1，5-二咖啡?？鼘幩岬龋?］。同時在糖降腎康顆粒供試品溶液紫外掃描圖中可見（如圖1所示），其紫外光譜圖是由木脂素苷類化合物和有機酸類化合物紫外光譜圖疊加而成。雖然在牛蒡子提取物中有機酸類化合物含量僅占10%左右［5］，但是在同一濃度下，有機酸的紫外吸收強度大于木脂素苷，從而導(dǎo)致在檢測波長280 nm下，有機酸仍然對總木脂素苷的含量測定有較大影響。因此，選擇采用等吸收雙波長法以消除有機酸對總木脂素苷含量測定的影響。同時，由于上述幾種有機酸的紫外吸收光譜較為相似，在330 nm 附近均具有最大吸收［8］，因此，參考山東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)中“金銀花提取物”含量測定方法［9］和相關(guān)文獻［10］，選擇綠原酸作為有機酸測定的對照品。

采用等吸收雙波長紫外分光光度法測定糖降腎康顆粒中的總木脂素苷，消除了有機酸的影響，由表2可知，等吸收雙波長測得的總木脂素苷含量比單波長法降低了約5%。通過方法學(xué)驗證，該方法的精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性均良好，簡便易行，為糖降腎康顆粒的質(zhì)量控制增加了新的思路。

參考文獻

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（收稿日期：2023-06-10 編輯：陶希睿）