參苓白術(shù)散對克羅恩病大鼠炎癥因子IL-1β、IL-1、IL-17C、IL-10及IL-4的影響

李前昆，賓東華，尹園緣，鄒巍瑩，劉穎，黃靜雯，程揚，劉密，王萍，余煉

〔摘要〕 目的 觀察參苓白術(shù)散對克羅恩病（Crohn's disease， CD）大鼠白細胞介素-1β（interleukin-1β， IL-1β）、白細胞介素-1（interleukin-1， IL-1）、白細胞介素-17C（interleukin-17C， IL-17C）、白細胞介素-10（interleukin-10， IL-10）、白細胞介素-4（interleukin-4， IL-4）的影響。方法 將60只SD大鼠隨機分為空白組、模型組、美沙拉嗪組（0.21 g·kg－1·d-1）、參苓白術(shù)散低劑量組、參苓白術(shù)散中劑量組、參苓白術(shù)散高劑量組（5.88、11.76、23.59 g·kg-1·d-1），每組10只，雌雄各半。將5% 2，4，6-三硝基苯磺酸（2，4， 6-trinitrobenzene sulfonic acid， TNBS）與50%乙醇按1∶1比例混合成TNBS灌腸液，并按3 mL·kg-1的劑量進行CD造模，造模成功后空白組及模型組給予生理鹽水灌胃，其余組給予相應(yīng)藥物灌胃。14 d后進行大鼠結(jié)腸黏膜損傷指數(shù)（colon macroscopic damage index， CMDI）評分；HE染色觀察結(jié)腸組織的病理學(xué)改變，ELISA法檢測各組大鼠血清中IL-1β、IL-1、IL-17C、IL-10及IL-4的含量。結(jié)果 與空白組比較，模型組大鼠CMDI評分明顯升高（P＜0.01），病理學(xué)改變可見上皮固有層內(nèi)的單管狀的大腸腺稀少且功能形態(tài)產(chǎn)生異常，出現(xiàn)淋巴濾泡增生，血清中IL-1β、IL-1、IL-17C水平明顯升高（P＜0.01），IL-10、IL-4明顯下降（P＜0.01）；與模型組比較，美沙拉嗪組、參苓白術(shù)散低、中劑量組及參苓白術(shù)散高劑量組CMDI評分降低（P＜0.05或P＜0.01），病理學(xué)改變可見結(jié)腸組織黏膜上皮細胞不同程度炎癥反應(yīng)及單管狀腺體破壞，參苓白術(shù)散低劑量組可見少量血管擴張出血，美沙拉嗪組、參苓白術(shù)散低劑量組、參苓白術(shù)散中劑量組、參苓白術(shù)散高劑量組IL-1β、IL-17C、IL-1水平下降，IL-10、IL-4水平升高（P＜0.05或P＜0.01）；與美沙拉嗪組比較，參苓白術(shù)散低劑量組、參苓白術(shù)散中劑量組IL-1β、IL-17C水平升高（P＜0.05），參苓白術(shù)散低劑量組IL-1升高（P＜0.01），參苓白術(shù)散高劑量組IL-1水平降低（P＜0.01），IL-10、IL-17C水平升高（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論 參苓白術(shù)散有助于減輕CD模型大鼠的腸道炎癥反應(yīng)，修復(fù)腸道黏膜損傷，其作用機制可能與調(diào)節(jié)CD模型大鼠炎癥因子IL-1、IL-17C、IL-1β、IL-10及IL-4的水平有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 克羅恩?。粎④甙仔g(shù)散；炎癥因子；白細胞介素；美沙拉嗪

〔中圖分類號〕R285.5? ? ? ?〔文獻標志碼〕A? ? ? ? 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０23.08.004

Effects of Shenling Baizhu Powder on inflammatory factors IL-1β，

IL-1， IL-17C， IL-10， and IL-4 in Crohn's disease rats

LI Qiankun1， BIN Donghua2， YIN Yuanyuan2， ZOU Weiying2， LIU Ying2， HUANG Jingwen2，

CHENG Yang2， LIU Mi1， WANG Ping3， YU Lian1*

1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 2. The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007， China; 3. Changde Wuling District Center for Disease Control and

Prevention， Changde， Hunan 415000， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To observe the effects of Shenling Baizhu Powder （SLBZP） on interleukin-1β （IL-1β）， interleukin-1 （IL-1）， interleukin-17C （IL-17C）， interleukin-10 （IL-10）， and interleukin-4 （IL-4） in rats with Crohn's disease （CD）. Methods A total of 60 SD rats were randomly divided into blank group， model group， mesalazine group （0.21 g·kg-1·d-1）， low-， medium-， and high-dose SLBZP groups （5.88， 11.76， 23.59 g·kg-1·d-1， respectively）， 10 rats in each group， half male and half female. Five percent of 2， 4， 6-trinitrobenzene sulfonic acid （TNBS） and fifty percent ethanol were mixed into TNBS enema at a ratio of 1：1， and CD modeling was conducted by the enema at a dose of 3 mL·kg-1. After successful modeling， the blank group and model group were given normal saline by gavage， while the other groups were given corresponding drugs by gavage. After 14 days， the colon macroscopic damage index （CMDI） of rats was scored; HE staining was used to observe the histopathological changes of colon; ELISA was adopted to determine the content of IL-1β， IL-1， IL-17C， IL-10， and IL-4 in serum of rats in each group. Results Compared with the blank group， CMDI score of the model group increased significantly （P<0.01）; the pathological changes showed that the single tubular large intestine glands in the epithelial lamina propria were sparse with abnormal forms and function， and hyperplasia of lymphoid follicles appeared; the serum levels of IL-1β， IL-1， and IL-17C increased significantly （P<0.01）， but the serum levels of IL-10 and IL-4 decreased significantly （P<0.01）. Compared with the model group， CMDI scores of mesalazine group as well as medium- and high-dose SLBZP groups significantly decreased （P<0.05 or P<0.01）; the pathological changes showed different degrees of inflammation response in mucosal epithelial cells of colon tissue and destruction of single tubular glands in mesalazine group and low-， medium-， and high-dose SLBZP groups， and a small amount of blood vessel dilation and bleeding in low-dose SLBZP group; the levels of inflammatory factors in mesalazine group and low-， medium-， and high-dose SLBZP groups decreased （P<0.05 or P<0.01）. Compared with mesalazine group， the levels of IL-1β and IL-17C in low- and medium-dose SLBZP groups increased （P<0.01）; IL-1 level in low-dose SLBZP group increased （P<0.01）; in high-dose SLBZP group， IL-1 level decreased （P<0.01）， but IL-10 and IL-17C levels increased （P<0.05 or P<0.01）. Conclusion SLBZP is helpful in alleviating intestinal inflammation and repairing intestinal mucosal damage in CD model rats， and its mechanism of action may be related to regulating the levels of inflammatory factors IL-1， IL-17C， IL-1β， IL-10， and IL-4.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 Crohn's disease; Shenling Baizhu Powder; inflammatory factors; interleukin; mesalazine

克羅恩病（Crohn's disease， CD）作為炎癥性腸病（inflammatory bowel disease， IBD）的一種臨床類型，是一種多發(fā)性、局限性的慢性腸道炎癥性疾病，可累及從口腔至肛門的整個胃腸道[1]。研究表明，近年來CD的發(fā)病率逐漸升高，且有低齡化趨勢[2-3]。據(jù)報道，我國CD的發(fā)病率呈現(xiàn)顯著增長的趨勢，地區(qū)發(fā)生率可達1.22/10萬人[4]。CD的病因尚未明確，其發(fā)病多由遺傳、感染、環(huán)境等多種因素共同作用導(dǎo)致[5]。CD的主要臨床表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作性腸道炎癥，嚴重時可見腸道潰瘍及全身癥狀，如腸梗阻、腸腔狹窄、瘺管形成，甚至腹腔內(nèi)的膿腫，影響患者進食，進而導(dǎo)致營養(yǎng)不良、貧血、低蛋白血癥等，對患者的身體健康及生活質(zhì)量造成嚴重影響[6-7]。CD尚無根治的辦法，在經(jīng)過治療后癥狀可緩解，但CD治療周期長，病情易反復(fù)，纏綿難愈，故如何促進CD患者的腸道黏膜愈合、組織學(xué)緩解是目前臨床工作中急需解決的問題。

CD歸屬于中醫(yī)學(xué)“腸澼”“痢疾”“腹痛”等范疇，基本病機為濕熱相蒸，瘀毒內(nèi)蘊[8]。參苓白術(shù)散是健脾滲濕之代表方，具有益氣健脾、滲濕止瀉的功效，其臨床應(yīng)用有助于緩解CD患者腹痛、腹瀉等癥狀[9]。在長期臨床實踐中，中醫(yī)藥在治療CD上表現(xiàn)出獨特的優(yōu)勢，如有效解決臨床上CD患者的臨床癥狀、減少疾病復(fù)發(fā)率、提高患者生活水平、減少因CD疾病過程中導(dǎo)致的各類并發(fā)癥產(chǎn)生等。針對CD脾虛為本、濕濁為標病機特點，常選用參苓白術(shù)散為基礎(chǔ)方靈活加減用藥，個體化治療，有效提高CD的緩解率，降低復(fù)發(fā)率。本課題組前期臨床研究已經(jīng)證實柳氮磺吡啶栓劑配合參苓白術(shù)散加減方保留灌腸治療潰瘍性結(jié)腸炎有較好的療效[10]。因此，本文建立CD大鼠模型，旨在從腸道炎癥角度出發(fā)，探究參苓白術(shù)散治療CD的作用機理，為臨床應(yīng)用中醫(yī)藥治療CD提供理論及實驗依據(jù)。

1 材料

1.1? 動物

SPF級SD大鼠60只，每組10只，雌雄各半，體質(zhì)量180～200 g，購于湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，實驗動物許可證編號：SCXK（湘）2019-0004。動物飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院實驗中心，飼養(yǎng)溫度24～26 ℃，相對濕度50%～70%，自由攝食飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，符合湖南中醫(yī)藥大學(xué)動物倫理委員會標準（倫理委員會審查編號：ZYFY20220228-01）。

1.2? 藥物

白扁豆、陳皮、山藥、砂仁、薏苡仁、白術(shù)、茯苓、人參、甘草、桔梗、蓮子均購自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院門診藥房（批號分別為NG21121301、SX21122701、TH21122903、SL22011102、SX21122705、SL22010401、CK22011006、200501、TH22010406、TH22010404、200401），經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑中心鑒定，符合用藥標準。

1.3? 主要試劑及儀器

美沙拉嗪顆粒（中國醫(yī)藥集團有限公司，批號：H20143164）；4%多聚甲醛（北京白鯊易科技有限公司，批號：BL539A）；二甲苯、無水乙醇（湖南匯虹試劑有限公司）；蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin staining， HE）染色液（Wexis，規(guī)格：2500 mL）；中性樹膠（中國上海標本模型廠，規(guī)格：100g）；2，4，6-三硝基苯磺酸（2，4，6-trinitrobenzene sulfonic acid， TNBS）、戊巴比妥鈉（Sigma Corporation of America，批號：P2297、P3761）；大鼠白細胞介素（IL-1、IL-10、IL-1β、IL-4、IL-17C）ELISA試劑盒（批號：ED30193、ED30194、ED30206、ED30217、SU-BN39249）、酶標儀（型號：Rayto RT-6100）均購自廈門侖昌碩生物科技有限公司；生物組織攤烤片機（武漢俊杰電子有限公司，型號JK-6）；光學(xué)顯微鏡（德國萊卡公司，型號：DM2000 LED）；超凈工作臺（蘇州集團安泰空氣技術(shù)有限公司，型號：BBS-SDC）；蓋玻片、載玻片（江蘇世泰實驗器械有限公司，型號：10212440C、188105W）；微量移液器（德國Eppendorf公司，型號：Q37553）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（常州中誠儀器制造有限公司，型號：DHG-9101-3A）；高速冷凍離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司，型號：H2100R）。

2 方法

2.1? 參苓白術(shù)散藥液的制備

依據(jù)原方比例，參照現(xiàn)代臨床劑量（麩炒白術(shù)15 g、山藥15 g、茯苓15 g、人參15 g、白扁豆12 g、蓮子9 g、麩炒薏苡仁9 g、砂仁6 g、桔梗6 g、炙甘草10 g）[11]，將飲片混合后浸泡30 min，生藥量共112 g，按體表面積換算法：大鼠用藥劑量=（112 g生藥量×6.3）/成人體質(zhì)量60 kg=11.76 g·kg-1（中劑量），高、低劑量分別為23.59、5.88 g·kg-1，按1 mL/100 g計算大鼠灌胃容積，為2～3 mL。首先熬制高劑量藥液，計算生藥濃度為2.94 g·mL-1，藥物先使用12倍比例純凈水冷水浸泡30 min，再使用大火煮沸，煮沸后轉(zhuǎn)小火煎藥30 min，過濾，取藥液，藥渣進行第二次煎煮，二煎取10倍蒸餾水煎煮30 min，混合兩次藥液。將參苓白術(shù)散高劑量組藥液需要量單獨分裝，剩余藥液根據(jù)需要量分別稀釋2倍、4倍，為生藥量1.47、0.73 g·mL-1，對應(yīng)參苓白術(shù)散中、低劑量組，均存于4 ℃冰箱備用。

2.2? CD大鼠模型的制備

參考MORRIS[12]的造模方法，將5%TNBS與50%乙醇按1∶1比例混合成TNBS灌腸液，使用TNBS灌腸液3 mL·kg-1（含TNBS 80 mg·kg-1）灌腸制備CD模型，造模前24 h禁食、不禁水，提前稱量并計算灌腸量，使用2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，將大鼠倒置，予以液狀石蠟潤滑肛門及灌腸管，除空白組外均以TNBS灌腸液3 mL·kg-1（含TNBS 80 mg·kg-1）灌腸，灌腸結(jié)束將大鼠繼續(xù)倒立1 min促進灌腸液充分吸收，空白組大鼠用同體積滅菌水行灌腸操作，隔7天重復(fù)灌腸1次，共2次。大鼠食欲降低、體質(zhì)量減輕、伴有便血或稀便，每組隨機抽取2只大鼠處死，自肛門處向上取結(jié)腸（15±2） cm，沿縱軸剪開，用生理鹽水沖洗干凈，觀察大鼠結(jié)腸腸壁增厚、黏膜充血水腫或有潰瘍即為造模成功。原每組10只大鼠，造模后處死2只，本次造模期間余無死亡大鼠，剩余每組8只。

2.3? 動物分組及給藥

實驗大鼠使用亂數(shù)表法抽取樣本并將其分為空白組、模型組、美沙拉嗪組以及參苓白術(shù)散低、中、高劑量組，經(jīng)造模后處死操作，每組剩余8只。除正常組外其余各組均為CD模型大鼠，具體造模方法詳見“2.2”。所有大鼠均自由進食飲水，實驗組大鼠造模7天后開始使用灌胃針頭灌胃給藥。根據(jù)大鼠體表面積換算公式計算大鼠給藥劑量，大鼠每天給藥劑量＝成人臨床劑量×6.3（人與大鼠體表面積折算系數(shù)）/成人體質(zhì)量（60 kg）。給藥方法為美沙拉嗪組給予美沙拉嗪藥液（0.21 g·kg-1）灌胃，參苓白術(shù)散低、中、高劑量組給與參苓白術(shù)散藥液（5.88、11.76、23.59 g·kg-1·d-1）灌胃，將等量生理鹽水試劑按灌胃操作給空白組對照組和模型組進行處理，每天1次，連續(xù)14 d。

2.4? 實驗指標檢測

2.4.1? 一般情況觀察及結(jié)腸黏膜損傷指數(shù)（colon macroscopic damage index， CMDI）評分? 觀察各組大鼠每天的進食、飲水、排便情況，評估大便性狀、體質(zhì)量變化及結(jié)腸黏膜損傷程度，評估大鼠是否有進食飲水量明顯減少，大便次數(shù)增多、不成形、便血以及體質(zhì)量減輕等表現(xiàn)，并根據(jù)取材后大鼠結(jié)腸黏膜損傷程度、有無潰瘍等進行CMDI評分[13]，具體評分標準：無損傷為0分；有輕度充血水腫無潰瘍?yōu)?分；充血水腫腸壁變厚為2分；高度充血水腫，且有直徑小于1 cm潰瘍?yōu)?分；3分基礎(chǔ)上潰瘍直徑大于1 cm為4分；如腸管與周圍組織有粘連則為5分。

2.4.2? HE染色觀察結(jié)腸組織病理改變情況? 取各實驗組大鼠一段有明顯病理改變的結(jié)腸組織，行脫水，包埋，固定操作并均勻切成以4 μm為標準的薄組織切片，最后烘干后脫蠟，蘇木精染色，再次脫水后使用二甲苯透明，封片。光學(xué)顯微鏡下觀察各組大鼠結(jié)腸組織病理變化。

2.4.3? ELISA法檢測各組大鼠血清中IL-1β、IL-1、IL-17C、IL-10、IL-4的含量? 使用雙抗體夾心法，用抗大鼠炎癥因子IL-1β、IL-1、IL-17C、IL-10、IL-4抗體包被于酶標板上，抗體與復(fù)合物結(jié)合，洗去表面雜質(zhì)，再加入辣根過氧化物酶標記的抗體，最終形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，洗去游離試劑成分，加入顯色底物，用酶標儀在450 nm波長處測光密度（optical density， OD）值，大鼠炎癥因子濃度與該值之間呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣品中炎癥因子的濃度[14]。

2.4.4? 統(tǒng)計學(xué)分析? 采用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件進行分析。實驗結(jié)果以“ｘ±s”表示，滿足正態(tài)分布采用方差分析進行多組間比較，方差齊用LSD法，方差不齊用Dunnett T3法；不滿足正態(tài)分布使用非參數(shù)檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1? 一般情況觀察及CMDI評分

空白組大鼠進食正常，糞便性狀正常。給藥14 d后，與空白組比較，模型組大鼠體質(zhì)量減輕，進食量減少，活動能力減弱，并出現(xiàn)稀便、大便帶血等情況，美沙拉嗪組及參苓白術(shù)散中、高劑量組大鼠體質(zhì)量較造模后升高，食欲好轉(zhuǎn)，且大便成型，無明顯便血。參苓白術(shù)散低劑量組部分大鼠體質(zhì)量降低、大便偶不成型。將各組大鼠結(jié)腸組織進行一般情況的解剖觀察，并進行CMDI評分。與空白組比較，模型組 CMDI評分明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，美沙拉嗪組及參苓白術(shù)散低、中、高劑量組CMDI評分降低（P＜0.01或P＜0.05）；與美沙拉嗪組比較，參苓白術(shù)散低劑量組CMDI評分明顯升高（P＜0.01），參苓白術(shù)散高劑量組CMDI評分明顯降低（P＜0.01）。詳見表1。

3.2? 對CD大鼠結(jié)腸組織病理形態(tài)的影響

空白組黏膜上皮組織完整，分布有吸收細胞和大量杯狀細胞，排列正常且密集并無形態(tài)上的改變，上皮固有層內(nèi)的單管狀大腸腺稠密且功能正常，黏膜肌層可見內(nèi)環(huán)行和外縱行的兩薄層平滑肌，黏膜下層可見成群脂肪細胞，漿膜完整，隱窩形態(tài)正常。與空白組比較，模型組CD大鼠黏膜上皮細胞已發(fā)生大量壞死脫落、杯狀細胞明顯減少、單管狀的腺體被破壞，各層可見大量炎癥細胞與免疫淋巴細胞浸潤，淋巴組織增生并有淋巴濾泡出現(xiàn)。美沙拉嗪組和參苓白術(shù)散各組結(jié)腸組織黏膜上皮細胞未出現(xiàn)明顯病理性脫落壞死，但見少量炎癥反應(yīng)產(chǎn)物浸潤及單管狀腺體破壞，參苓白術(shù)散低劑量組可見少量血管擴張出血。詳見圖1。

3.3? 對CD大鼠血清中IL-1β、IL-1、IL-17C、IL-10、IL-4水平表達的影響

與空白組比較，模型組大鼠血清指標突出表現(xiàn)為IL-1β、IL-1、IL-17C水平明顯升高，IL-10、IL-4明顯下降（P＜0.01）；與模型組比較，美沙拉嗪組及參苓白術(shù)散低、中、高劑量組IL-1β、IL-17C、IL-1水平下降，IL-10、IL-4水平升高（P＜0.05或P＜0.01）；與美沙拉嗪組比較，參苓白術(shù)散低、中劑量組IL-1β、IL-17C水平升高（P＜0.05），參苓白術(shù)散低劑量組IL-1升高（P＜0.01），參苓白術(shù)散高劑量組IL-1水平降低，IL-10、IL-17C水平升高（P＜0.05或P＜0.01）。詳見表2。

4 討論

IBD已成為一種全球性疾病，新興工業(yè)化國家IBD的發(fā)病率不斷上升，社會負擔較重[15]，CD作為IBD的一種臨床類型，在我國發(fā)病率及復(fù)發(fā)率日益增高，對IBD預(yù)防及治療研究刻不容緩?！端貑枴じ怪姓摗罚骸安∮猩俑故?，上下左右皆有根……病名曰伏梁……裹大膿血，居腸胃之外?！盋D歸屬于中醫(yī)學(xué)“伏梁”范疇，CD的發(fā)病多由脾胃之氣不足或脾腎陰陽兩虛所致，擴散至下焦腸道導(dǎo)致腸腑病變，邪入血絡(luò)，致使?jié)駸狃龆緝?nèi)聚，基本病機為濕熱相蒸，瘀毒內(nèi)蘊，其病位在水土之屬，病癥表現(xiàn)多樣且易反復(fù)?，F(xiàn)代研究顯示，中西醫(yī)結(jié)合療法有助于延長CD緩解期、控制病情發(fā)展，同時結(jié)合療法可減輕西藥中激素等的毒副作用及不良反應(yīng)[16]。

近幾年關(guān)于中醫(yī)藥治療CD的臨床實驗結(jié)果與研究報告提示，治療CD的主要機制包括抑制CD患者炎癥因子的表達、調(diào)節(jié)患者免疫功能等方面。BOURGONJE等[17]報道無血漿硫醇與炎癥生物標志物呈負相關(guān)，并且與CD的有利結(jié)果相關(guān)。前期臨床研究已經(jīng)證實柳氮磺吡啶栓劑配合參苓白術(shù)散加減方保留灌腸治療UC有較好的療效，腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）是IBD急性期和慢性期的關(guān)鍵促炎介質(zhì)，在IBD的促炎細胞因子產(chǎn)生中起關(guān)鍵作用[18]。周華等[19]研究發(fā)現(xiàn)參苓白術(shù)散可以通過調(diào)節(jié)腸道黏膜組織中白細胞介素-6（interleukin-6， IL-6）、IL-10及TNF-α細胞因子的功能來修復(fù)腸道黏膜屏障。研究表明，IL-1β能通過產(chǎn)熱、激活淋巴細胞和促進急性蛋白的合成等作用引起全身性或局部性損傷[20]。王聲勇等[21]研究結(jié)果顯示，CD患者Th17/Treg細胞以及IL-17/IL-10因子失衡，表明IL-17/IL-10是進一步導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的炎癥因子，參苓白術(shù)散能夠通過調(diào)節(jié)上述因子抑制炎癥反應(yīng)。IL-10為抑炎因子能通過抑制淋巴T細胞、免疫細胞等發(fā)揮保護腸道屏障功能、維持免疫系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)的功效[22]。IL-17是IBD的主要致病因子之一，抗IL-17中和抗體應(yīng)是理論上的治療藥物之一，然而針對CD患者使用中和抗體的治療方案卻矛盾地加重了腸道炎癥，表明IL-17細胞因子具有重要的穩(wěn)態(tài)功能[23-24]。有研究表明，參苓白術(shù)散中含有的人參皂苷Rg1具有減弱促炎反應(yīng)、增強先天免疫力并保留適應(yīng)性免疫力的作用，人參皂苷Rb1可能通過抑制炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激來減輕大鼠的腸道損傷[25]。因此，本實驗探究參苓白術(shù)散減輕CD大鼠腸道炎癥反應(yīng)及黏膜屏障損傷是否與調(diào)節(jié)IL-1β、IL-1、IL-17C、IL-10、IL-4炎癥因子的水平相關(guān)。

參苓白術(shù)散出自《太平惠民和劑局方·卷三》[26]，由蓮子（去皮），薏苡仁，縮砂仁，桔梗（炒令深黃色），白扁豆（姜汁浸，去皮，微炒），白茯苓，人參（去蘆），甘草（炒），白術(shù)，山藥組成。為四君子湯（參、苓、術(shù)、草）的基礎(chǔ)上加減而成，本方中君藥人參健升脾氣，山藥健脾補肺。臣藥白術(shù)燥化濕邪，茯苓淡滲利濕，蓮子補益中焦、澀止腸痢。扁豆、薏苡仁、縮砂仁能夠調(diào)暢中焦；桔梗升發(fā)五行之肺金。炙甘草以其甘溫之性能補能和能緩，大棗煎湯服用，調(diào)暢中焦氣虛。諸藥配伍，治脾虛濕勝者佳。參苓白術(shù)散作為中藥方劑，治療CD具有整體調(diào)節(jié)的獨特優(yōu)勢，在中醫(yī)辨證論治的基礎(chǔ)上可隨證加減，毒副作用小[27]。

本研究結(jié)果顯示，模型組CMDI評分明顯升高（P＜0.01），模型組大鼠血清中IL-1β、IL-1、IL-17C水平明顯升高，IL-10、IL-4明顯下降（P＜0.01），提示CD大鼠的病理炎癥反應(yīng)指標顯著異常，從臨床癥狀體征及數(shù)據(jù)得出炎癥反應(yīng)在CD病程中占據(jù)了極其重要的一部分。美沙拉嗪組及參苓白術(shù)散低、中、高劑量組CMDI評分均降低（P＜0.01），表明美沙拉嗪及參苓白術(shù)散各劑量組有治療效果，且參苓白術(shù)散高劑量組治療效果大于美沙拉嗪組。美沙拉嗪組及參苓白術(shù)散各組IL-1β、IL-1、IL-17C水平明顯下降（P＜0.05或P＜0.01），IL-10、IL-4明顯下降（P＜0.01）；病理學(xué)結(jié)果顯示，美沙拉嗪組和參苓白術(shù)散中、高、低劑量組結(jié)腸組織黏膜上皮細胞有一定程度脫落壞死，少量炎性細胞浸潤及腺體被破壞，參苓白術(shù)散低劑量組可并見少量血管擴張出血。與美沙拉嗪組比較，參苓白術(shù)散低、中劑量組IL-1β、IL-17C水平升高（P＜0.05），參苓白術(shù)散低劑量組IL-1升高（P＜0.01），參苓白術(shù)散高劑量組IL-1水平降低，IL-10、IL-17C水平升高（P＜0.05或P＜0.01）。參苓白術(shù)散不同劑量組中，參苓白術(shù)散高劑量（23.59 g·kg-1·d-1）組效果最佳。本實驗為參苓白術(shù)散在中醫(yī)治療CD緩解期的優(yōu)勢地位提供了實驗依據(jù)和理論支撐。

綜上所述，參苓白術(shù)散通過調(diào)控IL-1β、IL-1、IL-17C、IL-10、IL-4的表達減輕CD大鼠腸道炎癥反應(yīng)及黏膜屏障損傷情況，為中醫(yī)藥防治CD提供實驗依據(jù)與參考，同時有助于將參苓白術(shù)散廣泛推廣運用于臨床，縮短患者治療時間，節(jié)約醫(yī)療成本，產(chǎn)生較大的社會效益及經(jīng)濟效益。但本次研究大鼠未進行中醫(yī)證候分型，研究樣本量較小，仍需要進一步大樣本實驗佐證。

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（本文編輯? 蘇? 維）