胃癌前病變患者病變組織c-Myc蛋白表達(dá)情況及其與內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系▲

鄭 倩 譚 斌 曹慧秋 劉漢雄

(郴州市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科, 湖南省郴州市 423000)

胃癌前病變是指一類容易發(fā)生癌變的胃黏膜病理組織學(xué)變化,即胃黏膜的異型增生和腸上皮化生[1],這一階段是胃癌發(fā)生的關(guān)鍵階段,因此應(yīng)積極治療胃癌前病變以預(yù)防胃癌的發(fā)生。目前主要采用內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)(endoscopic submucosal dissection,ESD)治療胃癌前病變,臨床效果確切,但術(shù)后仍有部分患者復(fù)發(fā),影響患者的生命及生活質(zhì)量[2]。因此,分析胃癌前病變患者ESD術(shù)后復(fù)發(fā)的影響因素以指導(dǎo)臨床干預(yù)具有重要意義。原癌基因c-Myc(proto-oncogene c-Myc,c-Myc)是細(xì)胞增殖、分化和凋亡的重要調(diào)節(jié)因子,多種腫瘤的發(fā)生均與c-Myc的異常表達(dá)密切相關(guān)。王婧等[3]的研究顯示,乳腺癌組織的c-Myc表達(dá)陽性率較癌旁正常組織顯著升高,且c-Myc表達(dá)水平與癌癥臨床分期、病理分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān),c-Myc陽性表達(dá)者的無瘤生存期明顯短于陰性表達(dá)者。另有研究顯示,c-Myc是診斷早期胃癌的重要指標(biāo)[4]。但鮮見有研究報告c-Myc在胃癌前病變組織中的表達(dá)情況與患者ESD后復(fù)發(fā)的關(guān)系。鑒于此,本研究探討胃癌前病變患者病變組織的c-Myc蛋白表達(dá)情況及其與患者ESD后復(fù)發(fā)的關(guān)系,為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 回顧性分析2016年1月至2021年1月我院收治的143例胃癌前病變患者的臨床資料,其中男性86例、女性57例,年齡30～75(55.72±9.75)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)患者經(jīng)內(nèi)鏡及病理檢查確診為胃癌前病變,初次發(fā)病;(2)患者均成功行ESD;(3)患者依從性好,積極配合隨訪,有完整的隨訪資料與病歷資料。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)存在嚴(yán)重全身性疾病者;(2)存在凝血功能障礙者;(3)精神疾病患者;(4)合并有其他部位腫瘤者;(5)心、肝、腎功能嚴(yán)重受損者。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

1.2.1 收集患者的臨床資料:收集患者的性別、年齡、胃潰瘍病史、吸煙史、飲酒史、服用非甾體抗炎藥情況、不良心理情緒情況、飲食不規(guī)律情況、主食湯泡飯情況、進(jìn)食速度情況,以及病變組織、病變旁組織的c-Myc蛋白表達(dá)情況。其中,吸煙史定義為吸煙時間持續(xù)2年以上,吸煙量>5支/d;飲酒史定義為乙醇攝入量男性超過40 g/d,女性超過20 g/d,飲酒時間持續(xù)1年以上;不良心理情緒采用焦慮自評量表[5](Self-Rating Anxiety Scale,SAS)和抑郁自評量表[6](Self-Rating Depression Scale,SDS)進(jìn)行評估,SAS評分>50分或SDS評分>50分均可判定為存在不良心理情緒;飲食時間不固定判定為飲食不規(guī)律;每餐進(jìn)食所用時間<15 min判定為進(jìn)食速度快。

1.2.2 c-Myc蛋白表達(dá)情況的檢測:所有患者均接受ESD治療,將術(shù)中獲取的病變組織及病變旁組織采用4%中性甲醛固定后行石蠟包埋,常規(guī)制作厚度為4 μm的連續(xù)切片備用,采用免疫組化法檢測c-Myc蛋白表達(dá)情況。將切片常規(guī)脫蠟入水,加入枸櫞酸鹽緩沖液并煮沸10 min進(jìn)行抗原修復(fù),使用PBS沖洗3次,5 min/次,滴加山羊血清封閉液,室溫孵育20 min,甩去多余液體;滴加50 μL一抗(鼠抗人c-Myc抗體,稀釋比為1 ∶100,西安瑞禧生物科技有限公司,批號:1511073),室溫靜置1 h,使用PBS沖洗3次,5 min/次;滴加50 μL生物素標(biāo)記的羊抗鼠二抗(稀釋比為1 ∶200,西安瑞禧生物科技有限公司,批號:1510122),室溫靜置1 h,PBS沖洗3次,5 min/次;滴加50 μL堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液(上海懋康生物科技有限公司,批號:1916157),37 ℃孵育30 min,使用PBS沖洗3次,5 min/次;DAB(西安瑞禧生物科技有限公司,批號:1511142)顯色15 min,經(jīng)自來水充分沖洗后復(fù)染、脫水、透明、封片。在顯微鏡下觀察顯色結(jié)果,細(xì)胞胞漿被染成棕黃色為陽性,無著色為陰性。采用半定量計分方法評定染色強(qiáng)度評分,將染色強(qiáng)度棕黃色、橘黃色、淡黃色、無著色分別定義為強(qiáng)陽性、中陽性、弱陽性、陰性4個等級,分別記3、2、1、0分。每張切片選擇具有代表性的5個高倍視野,計算陽性細(xì)胞率,陽性細(xì)胞率=觀察視野中陽性細(xì)胞個數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%,陽性細(xì)胞率<5%為0分,5%～25%為1分,26%～50%為2分,51%～75%為3分,≥76%為4分。將染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞率的評分相乘,得分0分定義為陰性,1～4分定義為低陽性表達(dá),>4分定義為高陽性表達(dá)。陽性表達(dá)率=高陽性表達(dá)例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.2.3 預(yù)后評估:術(shù)后采用電話及門診復(fù)診等方式對患者進(jìn)行為期1年的隨訪,記錄患者復(fù)發(fā)情況。隨訪期間,根據(jù)胃鏡檢查結(jié)果提示胃黏膜的異型增生和腸上皮化生,則判定為復(fù)發(fā)。將隨訪期間復(fù)發(fā)的患者納入復(fù)發(fā)組,未復(fù)發(fā)的患者納入未復(fù)發(fā)組。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以(x±s)表示,組間比較采用兩獨立樣本t檢驗;計數(shù)資料以例數(shù)(百分比)表示,組間比較采用χ2檢驗;采用多因素Logistic回歸模型分析胃癌前病變患者ESD后復(fù)發(fā)的影響因素。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 病變組織及病變旁組織c-Myc蛋白表達(dá)情況的比較 胃癌前病變患者的病變組織c-Myc蛋白陽性表達(dá)率為74.13%(106/143),病變旁組織c-Myc蛋白陽性表達(dá)率為58.04%(83/143)。病變組織的c-Myc蛋白陽性表達(dá)率高于病變旁組織(χ2=8.253,P=0.004)。

2.2 復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組病變組織c-Myc蛋白表達(dá)情況的比較 隨訪1年間,有25例患者復(fù)發(fā),復(fù)發(fā)率為17.48%。復(fù)發(fā)組患者病變組織的c-Myc蛋白陽性表達(dá)率為92.00%(23/25),未復(fù)發(fā)組患者病變組織的c-Myc蛋白陽性表達(dá)率為70.34%(83/118),復(fù)發(fā)組患者病變組織的c-Myc蛋白陽性表達(dá)率高于未復(fù)發(fā)組(χ2=5.047,P=0.025)。

2.3 不同預(yù)后胃癌前病變患者一般資料的比較 復(fù)發(fā)組存在胃潰瘍病史、存在吸煙史、服用非甾體抗炎藥、主食湯泡飯、進(jìn)食速度快的患者比例高于未復(fù)發(fā)組(均P<0.05)。見表1。

表1 單因素分析結(jié)果

2.4 胃癌前病變患者ESD后復(fù)發(fā)的影響因素 將ESD術(shù)后復(fù)發(fā)情況作為因變量(未復(fù)發(fā)=0,復(fù)發(fā)=1),將2.3單因素分析中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的變量及c-Myc蛋白表達(dá)情況作為自變量[胃潰瘍病史(無=0,有=1)、吸煙史(無=0,有=1)、服用非甾體抗炎藥(無=0,有=1)、主食湯泡飯(否=0,是=1)、進(jìn)食速度快(否=0,是=1)、c-Myc蛋白表達(dá)情況(低陽性表達(dá)=0,高陽性表達(dá)=1)],進(jìn)行多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示,胃潰瘍病史、吸煙史、服用非甾體抗炎藥、主食湯泡飯、進(jìn)食速度快、c-Myc蛋白高陽性表達(dá)均為胃癌前病變患者ESD后復(fù)發(fā)的危險因素(均P<0.05),見表2。

表2 多因素分析結(jié)果

3 討 論

胃癌的發(fā)生與慢性淺表性胃炎、萎縮性胃炎、腸上皮化生、上皮內(nèi)瘤變等多個因素有關(guān),而胃上皮內(nèi)瘤變與胃癌的發(fā)病具有密切關(guān)系,是公認(rèn)的胃癌前病變,需及時給予干預(yù),以降低胃癌的發(fā)生風(fēng)險[1]。目前,主要采用ESD治療胃癌前病變。ESD屬于微創(chuàng)手術(shù),與傳統(tǒng)內(nèi)鏡黏膜切除術(shù)相比,ESD能夠一次性完整切除胃癌前病變組織,獲得更理想的治愈性切除率[7]。但ESD后仍存在潛在的復(fù)發(fā)風(fēng)險,本研究結(jié)果顯示,隨訪1年內(nèi)胃癌前病變患者ESD后復(fù)發(fā)率為17.48%,與李韶華等[8]的研究結(jié)果相似,這表明胃癌前病變患者ESD后有較高的復(fù)發(fā)風(fēng)險。因此,積極探討胃癌前病變患者ESD后復(fù)發(fā)的影響因素可為臨床干預(yù)提供指導(dǎo)依據(jù),改善患者預(yù)后。

c-Myc是一種原癌基因,是禽類髓細(xì)胞病毒MC-29的v-Myc的細(xì)胞同源序列,位于人類第8號染色體長臂上[9]。c-Myc蛋白為c-Myc基因產(chǎn)物,其通過調(diào)控癌細(xì)胞的增殖、凋亡、血管生成和代謝,來促進(jìn)胃癌的進(jìn)展[10]。本研究結(jié)果顯示,胃癌前病變患者病變組織的c-Myc蛋白陽性表達(dá)率高于病變旁組織(P<0.05)。研究表明,長鏈非編碼核糖核酸胎盤特異性蛋白2通過調(diào)控c-Myc表達(dá)以促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡[11]。張英等[12]也發(fā)現(xiàn),c-Myc在慢性非萎縮性胃炎組織中均為陰性表達(dá),但在胃癌前病變及胃癌組織中呈陽性表達(dá),且胃癌前病變組織的陽性表達(dá)率高于胃癌組織。上述研究均表明,c-Myc高表達(dá)與胃癌前病變密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示,復(fù)發(fā)組患者病變組織的c-Myc蛋白陽性表達(dá)率高于未復(fù)發(fā)組病變組織(P<0.05),表明c-Myc蛋白高表達(dá)可能與胃癌前病變患者ESD后復(fù)發(fā)有關(guān)。原因可能是c-Myc過表達(dá)可促使病變組織的細(xì)胞處于過度增殖狀態(tài),DNA易發(fā)生斷裂、突變、重組或擴(kuò)增,促進(jìn)胃癌前病變病情進(jìn)展[13]。

本研究進(jìn)一步進(jìn)行Logistic回歸分析,以探討胃癌前病變患者ESD后復(fù)發(fā)的影響因素,結(jié)果顯示,胃潰瘍病史、吸煙史、服用非甾體抗炎藥、主食湯泡飯、進(jìn)食速度快、c-Myc蛋白高陽性表達(dá)均為胃癌前病變患者ESD后復(fù)發(fā)的危險因素(P<0.05),這與既往研究結(jié)果[14]相似。分析其原因:(1)大部分胃潰瘍患者伴有胃幽門螺桿菌感染,這可引起胃黏膜炎癥損傷,破壞細(xì)胞凋亡與增殖的平衡,造成細(xì)胞增殖紊亂,胃幽門螺桿菌還可導(dǎo)致周期調(diào)控蛋白的異常表達(dá),引起病變組織細(xì)胞異常增殖,從而導(dǎo)致胃癌前病變復(fù)發(fā)[15]。(2)煙霧中的尼古丁、煙焦油等均為有害成分,所含的自由基可以通過引發(fā)基因突變、損傷細(xì)胞膜使胃癌前病變復(fù)發(fā)[16]。(3)長期服用非甾體抗炎藥可能會造成胃腸道不適或者潰瘍,進(jìn)而影響胃癌前病變的復(fù)發(fā)。(4)長期主食湯泡飯及進(jìn)食速度快者,食物未能被充分咀嚼,不利于唾液淀粉酶對食物進(jìn)行初步消化,加重腸胃負(fù)擔(dān),容易引起胃癌前病變復(fù)發(fā)。(5)c-Myc主要以二聚體的形式存在,能夠調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄,通過抑制生長基因的轉(zhuǎn)錄來調(diào)控細(xì)胞周期,c-Myc蛋白過表達(dá)能夠使細(xì)胞快速從G1期進(jìn)入S期,從而促進(jìn)細(xì)胞分裂,加速病變組織細(xì)胞增殖[17],最終引起胃癌前病變患者ESD后復(fù)發(fā)。因此,臨床工作中應(yīng)密切關(guān)注這些高危人群,普及相關(guān)衛(wèi)生健康知識,建議患者日常合理飲食,養(yǎng)成良好的進(jìn)餐習(xí)慣,戒煙,遵醫(yī)囑合理用藥,接受科學(xué)正規(guī)的治療,切勿擅自用藥,同時定期進(jìn)行相關(guān)檢查等,以及時發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)的可能性并給予干預(yù),從而降低胃癌前病變患者ESD后的復(fù)發(fā)率。

綜上所述,胃癌前病變患者病變組織c-Myc蛋白呈高表達(dá),胃潰瘍病史、吸煙史、服用非甾體抗炎藥、主食湯泡飯、進(jìn)食速度快、c-Myc蛋白高陽性表達(dá)均為胃癌前病變患者ESD后復(fù)發(fā)的危險因素。臨床上應(yīng)針對上述危險因素采取干預(yù)措施,以降低胃癌前病變患者ESD后復(fù)發(fā)率,從而改善患者預(yù)后。