4 種復(fù)方中草藥對(duì)長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)生長(zhǎng)和免疫的影響

張建明，張德志，舒德斌，田甜，饒軍，蘇巍

（1.中國(guó)長(zhǎng)江三峽集團(tuán)有限公司中華鱘研究所,湖北 宜昌 443100;2.三峽工程魚(yú)類資源保護(hù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖北 宜昌 443100）

長(zhǎng)江鱘（Acipenser dabryanus）是我國(guó)特有的淡水定居性鱘[1]。過(guò)度捕撈、水體污染、棲息地破壞等原因使野生長(zhǎng)江鱘資源量急劇下降，已被列為國(guó)家Ⅰ級(jí)重點(diǎn)保護(hù)動(dòng)物和極瀕危物種[2,3]。目前，主要通過(guò)建立禁捕、設(shè)立保護(hù)區(qū)、人工增殖放流等措施保護(hù)長(zhǎng)江鱘物種。關(guān)于長(zhǎng)江鱘的保護(hù)研究主要包括早期發(fā)育、人工繁殖、營(yíng)養(yǎng)需求及分子生物學(xué)等方面[4-8]。近年來(lái)，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)向著規(guī)?；?、集約化迅猛發(fā)展，養(yǎng)殖過(guò)程中傳統(tǒng)的抗生素治療方法起到了很好的緩解魚(yú)病發(fā)生的作用，但同時(shí)導(dǎo)致病原菌耐藥性及難防難治、魚(yú)類抗生素依賴性及免疫力下降、藥物殘留及環(huán)境污染等問(wèn)題，因此，尋找能替代抗生素并促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育、提高魚(yú)體免疫和抗病能力的中草藥成為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵。

中草藥是我國(guó)的瑰寶，具有資源豐富、價(jià)格低廉、加工方便、毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)[9]，能提高魚(yú)類增重率，促進(jìn)魚(yú)類生長(zhǎng)[10]；改善消化吸收功能[11]；增強(qiáng)動(dòng)物免疫機(jī)能，提高抗病能力[12]；有效抑制病原微生物，保護(hù)機(jī)體健康[13]。冒樹(shù)泉等[9]研究指出，復(fù)方中草藥可促進(jìn)大鱗副泥鰍（Paramisgurnus dabryanus）生長(zhǎng)，提高抗氧化能力，其中復(fù)方Ⅰ組（板藍(lán)根、大黃）和復(fù)方Ⅲ組（黃芪、黃柏）效果最佳。路晶晶等[14]研究表明，復(fù)方中草藥可顯著提高大菱鲆（Scophthalmus maximus）幼魚(yú)的增重率，降低飼料系數(shù)，調(diào)節(jié)血脂，同時(shí)顯著提高大菱鲆血清中過(guò)氧化物酶活力。邢玉娟等[15]研究結(jié)果顯示，復(fù)合中草藥可提高草魚(yú)（Ctenopharyngodon idella）白細(xì)胞吞噬能力、提高組織溶菌酶（LSZ）及超氧化物歧化酶（SOD）活性。方珍珍等[10]研究顯示，飼料中添加金銀花、黃芪能夠一定程度提高錦鯉（Cyprinus carpio）過(guò)氧化氫酶（CAT）、總抗氧化能力（T-AOC）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）活力，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化和免疫能力。在飼料中添加復(fù)方中草藥改善了閃光鱘（Acipenser stellatus）體內(nèi)部分血液生理生化指標(biāo)，并初步篩選出了對(duì)閃光鱘生長(zhǎng)和生化指標(biāo)具有促進(jìn)作用的復(fù)方中草藥（復(fù)方1：貫眾、大青葉、山豆根、桔梗等；復(fù)方2：黃芪、茯苓等；復(fù)方3：板藍(lán)根、大黃等；復(fù)方4：紫草、桑葉、金銀花等）[16]。朱莉等[17]研究表明，中草藥復(fù)方（首烏、黃芪、甘草）和穿心蓮可顯著促進(jìn)羅非魚(yú)（Oreochromis mossambicus）生長(zhǎng)、抗氧化性能。王凡等[18]研究顯示，在飼料中添加復(fù)方中草藥可提高虹鱒（Oncorhynchus mykiss）非抗氧化和特異性免疫功能。石和榮等[19]研究表明，復(fù)方中草藥添加劑能有效促進(jìn)虎龍雜交石斑魚(yú)（Epinephelus fuscoguttatus♀× E.lanceolatus ♂）生長(zhǎng)，具有一定的增強(qiáng)免疫效果。盛竹梅等[20]研究指出，復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)（Pelteobagrus fulvidraco）非特異性免疫機(jī)能與抗病力具有增強(qiáng)作用。截至目前，未見(jiàn)中草藥對(duì)長(zhǎng)江鱘生長(zhǎng)和免疫影響的報(bào)道。

為篩選對(duì)長(zhǎng)江鱘具有促進(jìn)生長(zhǎng)、改善免疫指標(biāo)作用的復(fù)方中草藥，本試驗(yàn)研究了4 種復(fù)方中草藥對(duì)長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)生長(zhǎng)和免疫指標(biāo)的影響，旨在為長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中中草藥的應(yīng)用積累基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

2020 年4 月在中國(guó)長(zhǎng)江三峽集團(tuán)有限公司中華鱘研究所對(duì)人工馴養(yǎng)的長(zhǎng)江鱘親魚(yú)進(jìn)行人工催產(chǎn)，擠壓腹部獲得成熟卵子和精子，干法授精獲得受精卵，流水孵化獲得長(zhǎng)江鱘仔魚(yú)，經(jīng)過(guò)人工投喂飼養(yǎng)獲得10 月齡長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)，體質(zhì)量（1 000±53）g。2021 年2 月選取魚(yú)體完整、健康無(wú)傷的長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)開(kāi)展四種復(fù)方中草藥對(duì)長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)免疫指標(biāo)影響的實(shí)驗(yàn)。

1.2 方法

試驗(yàn)所用基礎(chǔ)飼料營(yíng)養(yǎng)成分：粗蛋白≥43%，粗脂肪≥5.0%，粗纖維≤5%，粗灰分≤18%，鈣2.0%～5.0%，磷1.0%～3.0%，賴氨酸≥2.0%?；A(chǔ)飼料為粉料。試驗(yàn)所用中草藥均購(gòu)自湖北省宜昌市益豐大藥房，藥材烘干粉碎后，按照中草藥組方配比混勻，在長(zhǎng)江鱘基礎(chǔ)飼料中按設(shè)計(jì)的添加量添加。中草藥添加劑量參考王凡（2021）[18]、路晶晶（2018）[14]、齊茜（2016）[16]等試驗(yàn)設(shè)計(jì)。添加復(fù)方中草藥配方及添加量見(jiàn)表1。

試驗(yàn)在直徑2 m、水深0.6 m 的玻纖缸中采用流水單養(yǎng)14 d。實(shí)驗(yàn)用水為經(jīng)過(guò)曝氣和靜止沉淀后的井水。實(shí)驗(yàn)期間水溫16 ℃～18 ℃。每天監(jiān)測(cè)養(yǎng)殖水體溶解氧、氨氮、亞硝酸鹽含量等水質(zhì)指標(biāo)。通過(guò)換水、排污，及時(shí)清除殘餌和糞便等，保持良好的養(yǎng)殖水環(huán)境（溶解氧＞6.0 mg/L、氨氮＜0.2 mg/L、亞硝酸氮＜0.05 mg/L），每天8:00、12:00、18:00 監(jiān)測(cè)并記錄養(yǎng)殖池水溫和溶解氧含量。

實(shí)驗(yàn)分為五組，按照中醫(yī)配伍理論設(shè)計(jì)4 組復(fù)方中草藥配方：A、B、C、D 組分別投喂復(fù)方一、二、三和四；E 組不添加中草藥為對(duì)照組，每個(gè)組10 尾魚(yú)，每組兩個(gè)重復(fù)。實(shí)驗(yàn)前暫養(yǎng)階段五組實(shí)驗(yàn)魚(yú)均通過(guò)灌服的方式投喂基礎(chǔ)飼料（日投喂量0.5%），7 d 后開(kāi)始進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)，按照中草藥投喂量，配置實(shí)驗(yàn)飼料，用水稀釋成糊狀，每天灌服方式投喂一次，連續(xù)投喂14 d，在第7 d 和第14 d 采樣，經(jīng)低溫麻醉后，測(cè)量魚(yú)體長(zhǎng)、體質(zhì)量等生物學(xué)指標(biāo)；從每個(gè)試驗(yàn)組中隨機(jī)取魚(yú)5 尾，尾靜脈采血，將血液離心（2 500 r/min、15 min），血清樣本置于-80 ℃冰箱待測(cè)；試驗(yàn)結(jié)束后，統(tǒng)計(jì)成活率，計(jì)算下列指標(biāo)。

式中，W1、W2 分別為每尾魚(yú)實(shí)驗(yàn)初始體質(zhì)量和最終體質(zhì)量（g）；S1、S2 分別為實(shí)驗(yàn)魚(yú)成活的數(shù)量和總數(shù)量（尾）。

血樣檢測(cè)指標(biāo)包括GHRH、IGF-1、GH、GnRH、IgG、IgM、C3、C4、LZM、抗菌肽、IFN-r。酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒購(gòu)于上海酶聯(lián)生物科技有限公司，參照說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用Spass25.0 和Excel 統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，利用單因素方差分析（One-Way ANOVA）和Duncan’s多重比較檢驗(yàn)復(fù)方中草藥對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)影響的顯著性，差異的顯著性以P<0.05 為標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)方中草藥對(duì)生長(zhǎng)和成活的影響

由表2 可知，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，復(fù)方三組和復(fù)方四組試驗(yàn)魚(yú)平均體質(zhì)量顯著高于復(fù)方一組、二組及對(duì)照組（P＜0.05）；復(fù)方三組和四組試驗(yàn)魚(yú)增重明顯；各試驗(yàn)組成活率均為100%。

2.2 復(fù)方中草藥對(duì)生長(zhǎng)激素釋放激素（GHRH）的影響

與對(duì)照組相比（表3），在試驗(yàn)第7 d 和第14 d，復(fù)方一組、二組生長(zhǎng)激素釋放激素（GHRH）含量沒(méi)有顯著變化（P＞0.05）；復(fù)方三組在試驗(yàn)第7 d 生長(zhǎng)激素釋放激素（GHRH）含量沒(méi)有顯著變化（P＞0.05），第14 d 顯著升高（P＜0.05）；復(fù)方四組生長(zhǎng)激素釋放激素（GHRH）含量在整個(gè)試驗(yàn)階段持續(xù)上升，具有顯著變化（P＜0.05）。

表3 復(fù)方中草藥對(duì)血清GHRH 的影響Tab.3 Effect of compound Chinese herbal medicine on serum GHRH content單位unit：ng/mL

表4 復(fù)方中草藥對(duì)血清IGF-1 的影響Tab.4 Effect of compound Chinese herbal medicine on serum IGF-1 content單位unit：ng/mL

2.3 復(fù)方中草藥對(duì)胰島素樣生長(zhǎng)因子1（IGF-1）的影響

與對(duì)照組相比，在試驗(yàn)第7 d，復(fù)方二組、三組和四組胰島素樣生長(zhǎng)因子1（IGF-1）含量顯著升高（P＜0.05）；在試驗(yàn)第14 d，除復(fù)方四組胰島素樣生長(zhǎng)因子1（IGF-1）含量顯著升高（P＜0.05），其他三個(gè)試驗(yàn)組均沒(méi)有顯著變化（P＞0.05）。

2.4 復(fù)方中草藥對(duì)生長(zhǎng)激素（GH）的影響

由表5 可知，與對(duì)照組相比，在試驗(yàn)第7 d，復(fù)方一組、二組和四組生長(zhǎng)激素（GH）含量沒(méi)有顯著變化（P＞0.05）,而復(fù)方三組生長(zhǎng)激素（GH）含量在試驗(yàn)第7 d 顯著升高（P＜0.05）；在試驗(yàn)第14 d，復(fù)方三組和四組生長(zhǎng)激素（GH）含量顯著升高（P＜0.05）。

表5 復(fù)方中草藥對(duì)血清GH 的影響Tab.5 Effect of compound Chinese herbal medicine on serum GH content單位unit：ng/mL

2.5 復(fù)方中草藥對(duì)促性腺激素釋放激素（GnRH）的影響

由表6 可知，與對(duì)照組相比，復(fù)方一組、二組、三組在試驗(yàn)第7 d 和14 d 促性腺激素釋放激素（GnRH）均沒(méi)有顯著變化（P＞0.05），復(fù)方四組在試驗(yàn)第14 d 促性腺激素釋放激素（GnRH）含量顯著升高（P＜0.05）。

表6 復(fù)方中草藥對(duì)血清GnRH 的影響Tab.6 Effect of compound Chinese herbal medicine on serum GnRH content單位unit：mIU/mL

2.6 復(fù)方中草藥對(duì)血清免疫球蛋白的影響

與對(duì)照組相比，在試驗(yàn)第7 d，各復(fù)方組血清IgG 含量沒(méi)有顯著變化（P＞0.05）；在試驗(yàn)第14 d，復(fù)方一組、二組沒(méi)有顯著變化（P＞0.05），而復(fù)方三組、四組顯著升高（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，在試驗(yàn)第7 d，復(fù)方一組和二組血清IgM含量變化不顯著（P＞0.05），復(fù)方三組和四組血清IgM含量顯著升高（P＜0.05）；在試驗(yàn)第14 d，復(fù)方一組、二組和三組血清IgM含量變化不顯著（P＞0.05），復(fù)方四組血清IgM含量顯著升高（P＜0.05）（表7）。

表7 復(fù)方中草藥對(duì)血清IgG 和IgM 的影響Tab.7 Effect of compound Chinese herbal medicine on serum IgG and IgM content單位unit：mg/mL

2.7 復(fù)方中草藥對(duì)血清補(bǔ)體的影響

與對(duì)照組相比，在試驗(yàn)第7 d，各復(fù)方組血清C3含量均沒(méi)有顯著變化（P＞0.05），但復(fù)方一組、三組和四組升高；在試驗(yàn)第14 d，復(fù)方三組與四組的C3顯著升高（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，在試驗(yàn)第7 d，各復(fù)方組血清C4 含量均沒(méi)有顯著變化（P＞0.05），但復(fù)方一組、三組和四組升高；在試驗(yàn)第14 d，復(fù)方三組和四組的C4 顯著升高（P＜0.05），其他組差異不顯著（表8）。

表8 復(fù)方中草藥對(duì)血清C3 和C4 的影響Tab.8 Effect of compound Chinese herbal medicine on serum C3 and C4 content單位unit：μg/mL

2.8 復(fù)方中草藥對(duì)血清溶菌酶的影響

與對(duì)照組相比，在試驗(yàn)第7 d，復(fù)方一組和二組血清溶菌酶活性沒(méi)有顯著變化（P＞0.05），而復(fù)方三組和四組血清溶菌酶活性顯著升高（P＜0.05）；在試驗(yàn)第14 d，復(fù)方一組血清溶菌酶活性沒(méi)有顯著變化（P＞0.05），而復(fù)方二組、三組和四組血清溶菌酶活性顯著升高（P＜0.05）（表9）。

2.9 復(fù)方中草藥對(duì)血清抗菌肽的影響

與對(duì)照組相比，在試驗(yàn)第7 d 和第14 d，復(fù)方一組和二組血清抗菌肽含量均沒(méi)有顯著變化（P＞0.05），而復(fù)方三組和四組血清抗菌肽含量均顯著升高（P＜0.05）（表10）。

2.10 復(fù)方中草藥對(duì)血清干擾素（IFN-r）的影響

與對(duì)照組相比，四個(gè)復(fù)方試驗(yàn)組在試驗(yàn)第7 d和第14 d 血清干擾素（IFN-r）含量均沒(méi)有顯著變化（P＞0.05）（表11）。

表11 復(fù)方中草藥對(duì)血清IFN-r 的影響Tab.11 The effect of compound Chinese herbal medicine on serum IFN-r content單位unit：pg/mL

3 討論

中草藥的成分豐富，含有蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、多糖、油脂類以及一些促生長(zhǎng)因子，合理運(yùn)用中草藥之間的關(guān)系，可以有效提高水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)水平、攝食水平、維生素含量、激素含量，提高水產(chǎn)動(dòng)物的免疫機(jī)能和抗氧化、抗應(yīng)激能力[16,21,22]。魚(yú)類的生長(zhǎng)受到生長(zhǎng)激素、生長(zhǎng)激素釋放激素、胰島素樣生長(zhǎng)因子和促性腺激素釋放激素等因子的影響。生長(zhǎng)激素是由垂體前葉合成和分泌的一種單鏈多肽類激素，其分泌和合成除受到生長(zhǎng)激素釋放激素的正調(diào)節(jié)和生長(zhǎng)激素抑制激素的負(fù)調(diào)節(jié)外，還受到血糖含量、營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)等因素的影響[23]。胰島素樣生長(zhǎng)因子是一類促進(jìn)有絲分裂功能和胰島素樣代謝的多肽類激素，具有促進(jìn)生長(zhǎng)、調(diào)節(jié)滲透壓、促進(jìn)細(xì)胞分裂分化、參與炎癥反應(yīng)等作用[24]。促性腺激素釋放激素是刺激腦垂體促性腺激素GtH 釋放的主要激素，不僅影響生長(zhǎng)激素的釋放，也對(duì)其合成具有一定的調(diào)節(jié)作用[25]。本研究中的復(fù)方二組、三組和四組對(duì)長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)生長(zhǎng)激素、生長(zhǎng)激素釋放激素、胰島素樣生長(zhǎng)因子、促性腺激素釋放激素等因子產(chǎn)生不同程度的影響，其中復(fù)方三組和四組對(duì)長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)生長(zhǎng)指標(biāo)具有較強(qiáng)的促進(jìn)作用，尤其以復(fù)方四組的作用效果更佳，推測(cè)可能復(fù)方三組和四組中草藥配伍組合能夠有效激發(fā)長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)生長(zhǎng)相關(guān)激素水平的有效提升，促進(jìn)了長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)的生長(zhǎng)激素含量的提高。復(fù)方中草藥對(duì)試驗(yàn)魚(yú)增重率也驗(yàn)證復(fù)方三組和四組中草藥配伍組合能夠有效促進(jìn)體重生長(zhǎng)。本試驗(yàn)中各試驗(yàn)組試驗(yàn)魚(yú)成活率均為100%，表明試驗(yàn)設(shè)計(jì)中草藥組方和使用劑量沒(méi)有對(duì)試驗(yàn)魚(yú)產(chǎn)生負(fù)面影響，具有科學(xué)性。

本試驗(yàn)按照中醫(yī)配伍理論設(shè)計(jì)的4 個(gè)組方，其中組方一以黃芪補(bǔ)中益氣升陽(yáng)固表，扶助正氣提高機(jī)體抗逆性為君藥，魚(yú)腥草、金銀花為清熱解毒藥，二藥合用祛除邪毒，茯苓配大黃使病邪走水糞道而出，利于排毒，甘草為國(guó)老調(diào)和諸藥；組方二以黨參補(bǔ)中益氣，五加皮祛濕補(bǔ)肝腎，二藥相合培元固本，板藍(lán)根清熱解毒，大黃涼血解毒、瀉熱通腸、破積行瘀。組方三以金銀花、大青葉、山豆根清熱解毒，強(qiáng)力祛邪為君藥，杏仁止咳平喘潤(rùn)腸通便，桔梗宣肺利咽排膿，貫眾治濕熱毒瘡；組方四以黨參補(bǔ)中黃芪實(shí)表五味子生津固腎，三藥合用使抗逆性增強(qiáng)，山楂健脾消食降脂，黃柏瀉三焦之火，大黃瀉熱通腸、破積行瘀，甘草調(diào)和諸藥，方中有補(bǔ)有瀉，補(bǔ)而不膩，瀉而不虛，陰陽(yáng)平衡，精神乃治。本試驗(yàn)設(shè)計(jì)的四個(gè)中草藥復(fù)方試驗(yàn)組，均以提高長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)生長(zhǎng)和免疫指標(biāo)為目的，用藥以溫補(bǔ)祛邪、清熱解毒為主，配伍遵循“相須相使”的原則，試驗(yàn)研究結(jié)果得出，四個(gè)中草藥復(fù)方組對(duì)提高長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)生長(zhǎng)和免疫指標(biāo)的結(jié)果存在差異。復(fù)方三組和四組能夠促進(jìn)長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)血清生長(zhǎng)激素釋放激素（GHRH）、胰島素樣生長(zhǎng)因子1（IGF-1）、生長(zhǎng)激素（GH）等指標(biāo)含量的顯著升高，復(fù)方二組僅對(duì)胰島素樣生長(zhǎng)因子1（IGF-1）含量產(chǎn)生影響，復(fù)方四組同時(shí)對(duì)促性腺激素釋放激素（GnRH）含量的升高產(chǎn)生顯著影響，復(fù)方一組效果甚微。復(fù)方三組和四組明顯提高了長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)血清免疫球蛋白IgG 和IgM、補(bǔ)體C3 和C4、抗菌肽等指標(biāo)的含量，復(fù)方二組、三組和四組能顯著提升血清溶菌酶活性，而復(fù)方一組對(duì)免疫指標(biāo)的影響較?。谎芯拷Y(jié)果提示，復(fù)方三組和四組能提高長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)生長(zhǎng)和免疫指標(biāo)。不同中草藥配伍組方對(duì)魚(yú)類的生長(zhǎng)、消化、抗應(yīng)激、抗氧化、免疫等指標(biāo)產(chǎn)生的效果存在一定的差異[9,14,26]。本文關(guān)于中草藥對(duì)長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)生長(zhǎng)和免疫指標(biāo)的影響研究也得出類似的結(jié)果，這可能與中草藥組方配伍、中草藥產(chǎn)地、試驗(yàn)條件及方法、試驗(yàn)魚(yú)種類等因素有關(guān)，針對(duì)不同種類魚(yú)的適宜組方及使用方法有待深入研究，以達(dá)到中草藥組方的最佳效果。

截止目前，自然界中一共發(fā)現(xiàn)了五類具有免疫功能的球蛋白，即IgG、IgA、IgM、IgE、IgD。真骨魚(yú)類血清中只存在一種免疫球蛋白，類似于哺乳動(dòng)物的IgM；而軟骨魚(yú)類血清中存在兩種免疫球蛋白，一種分子量為90 KDa 的免疫球蛋白與人類的IgM 相似，另一種分子量為18 KDa 的免疫球蛋白與人類的IgG 相似[27]。王煜恒等[28]關(guān)于黃芪多糖對(duì)雜交鱧（Channa maculate♀×C.argus ♂）免疫影響的研究結(jié)果顯示，在基礎(chǔ)飼料中添加黃芪多糖可顯著提高IgM的含量，提高免疫力和抗病力。本研究中，復(fù)方四組中草藥制劑可以顯著提高長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)血清內(nèi)IgM和IgG 含量，提高魚(yú)體的特異性免疫能力，表明復(fù)方四組的中草藥配伍及配比在長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)免疫球蛋白含量方面具有積極作用。

水生動(dòng)物的免疫系統(tǒng)發(fā)育不夠完善，甲殼類動(dòng)物甚至沒(méi)有特異性免疫系統(tǒng)。因此水生動(dòng)物的非特異性免疫系統(tǒng)在抵抗病原體入侵和感染過(guò)程中具有至關(guān)重要的作用[29]。非特異性免疫因子主要有：溶菌酶、干擾素、補(bǔ)體、抗菌肽、白細(xì)胞介素、趨化因子等，主要功效為抑制病原體繁衍、中和病原菌、增加吞噬細(xì)胞的吞噬量[30]。補(bǔ)體系統(tǒng)廣泛參與機(jī)體的防御反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)，在魚(yú)類免疫體系中具有提高基礎(chǔ)免疫水平、吞噬和降解靶細(xì)胞、參與炎癥反應(yīng)、清除免疫復(fù)合物等作用[30,31]。補(bǔ)體C3、C4 是補(bǔ)體系統(tǒng)中的重要組成成分，具有抵御病原體、促進(jìn)炎癥反應(yīng)等重要作用[32]。曲木等[33]發(fā)現(xiàn)，以添加黨參、黃芪、野菊花的飼料投喂黃顙魚(yú)（Pelteobagrus fulvidraco），可顯著提升血清中補(bǔ)體C3、C4 的含量。盛竹梅等[20]發(fā)現(xiàn)，用富含復(fù)方中草藥（麻黃、苦參、黃芩、五倍子）的飼料可以增強(qiáng)黃顙魚(yú)血清中補(bǔ)體C3 和C4的活性。本研究中，投喂復(fù)方三組和四組14d，可以顯著提升長(zhǎng)江鱘血清中補(bǔ)體C3 和C4 含量，改善魚(yú)體免疫力。

溶菌酶是魚(yú)體生理防御水平的重要標(biāo)志和堿性水解酶，能夠破壞細(xì)菌、病毒、寄生物等結(jié)構(gòu)[19,34]。血清中溶菌酶活性可以因機(jī)體接觸免疫增強(qiáng)劑或抗原性物質(zhì)而上升，測(cè)定溶菌酶的活性，可以反映魚(yú)體非特異性免疫狀態(tài)[29]。有關(guān)中草藥對(duì)魚(yú)類溶菌酶活性調(diào)節(jié)的報(bào)道很多。邢玉娟等[15]研究發(fā)現(xiàn)，投喂中草藥制劑可以提高草魚(yú)（Ctenopharyngodon idellus）肝胰臟、血清、鰓中溶菌酶活性。李梅芳等[35]采用黃芪、黃芩等中草藥投喂大黃魚(yú)（Pseudosciaena crocea），魚(yú)體溶菌酶活性顯著上升。王凡等[18]將紅棗、黃芪和山藥制成復(fù)合中草藥飼料，投喂虹鱒（Oncorhynchus mykiss）56 d，明顯提高血清溶菌酶活性。本研究中，復(fù)方三組和四組血清溶菌酶活性顯著高于對(duì)照組。這表明，飼料中添加以上兩組中草藥制劑可以激活長(zhǎng)江鱘的免疫系統(tǒng)，隨著投喂時(shí)間的延長(zhǎng)，溶菌酶活性升高，提高了魚(yú)體的非特異性免疫能力。水產(chǎn)動(dòng)物非特異性免疫系統(tǒng)的重要成份抗菌肽，多存在于皮膚黏液、腸道、血液等組織中，對(duì)細(xì)菌、病毒、真菌和寄生蟲(chóng)具有較強(qiáng)的抑制或殺傷作用[36,37]。Peng 等[38]研究表明，尼羅羅非魚(yú)（Oreochromis niloticus）5 種抗菌肽中的TP3 和TP4對(duì)革蘭氏陰性菌和陽(yáng)性菌具有抗菌活性。Mu 等[39]報(bào)道，大黃魚(yú)（Larimichthys crocea）5 種成熟肽純化合成物對(duì)革蘭氏陰性菌和陽(yáng)性菌均具有一定的抗菌活性。晉高偉[40]從鯰（Silurus asotus）體表粘液提取物中分離得到抗菌肽，顯示能有效減緩大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)速度。胡世康等[41]報(bào)道，投喂添加抗菌肽的飼料一段時(shí)間后，可以提高凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）感染副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、哈維氏弧菌（Vibrio harveyi）和白斑綜合征的成活率。本研究中，投喂復(fù)方三組和四組的長(zhǎng)江鱘在試驗(yàn)期間血清抗菌肽活性呈現(xiàn)不斷上升的趨勢(shì)，且與對(duì)照組呈現(xiàn)顯著差異性。這表明，投喂以上兩組復(fù)方中草藥制劑可以有效提高魚(yú)體血清中的抗菌肽含量，在一定的投喂時(shí)間內(nèi)投喂時(shí)間和抗菌肽含量呈現(xiàn)正相關(guān)。干擾素是一類能夠誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白的分泌型細(xì)胞因子，可分為Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型干擾素[42]。Ⅱ型干擾素，又稱為IFN-r，能夠促使宿主細(xì)胞產(chǎn)生大量的抗病毒蛋白或誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生有毒物質(zhì)，此外還可以調(diào)節(jié)T 細(xì)胞增殖和分化、介導(dǎo)白細(xì)胞聚集，進(jìn)而促使機(jī)體呈現(xiàn)抗病毒狀態(tài)[43]。目前已在斑馬魚(yú)（Brachydanio rerio var）、斑點(diǎn)叉尾（Ictalurus punctatus）、虹鱒（Oncorhynchus mykiss）、河豚（Tetraodontidae）、青魚(yú)（Mylopharyngodon piceus）等多種魚(yú)類中克隆得到[44-48]。雖然魚(yú)類與哺乳動(dòng)物γ-干擾素基因同源性相比較低，但免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)和抗病毒方面的作用差異不大。本研究表明，與對(duì)照組相比，四個(gè)復(fù)方試驗(yàn)組在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中血清γ-干擾素含量無(wú)顯著性差異。這可能與γ-干擾素的性質(zhì)相關(guān)，γ-干擾素是一種誘生蛋白，上述四組中草藥配方不能作為誘生劑激活其表達(dá)，如何利用中草藥激活γ-干擾素的表達(dá)需要進(jìn)一步研究。

結(jié)論

試驗(yàn)設(shè)計(jì)的4 種復(fù)方中草藥不同程度地影響長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)的生長(zhǎng)指標(biāo)和免疫機(jī)能。其中，復(fù)方三組（金銀花、杏仁、貫眾、大青葉、山豆根、桔梗）和復(fù)方四組（黃芪、黃柏、甘草、山楂、五味子、大黃、黨參）改善了長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)血清生長(zhǎng)指標(biāo)（GHRH、IGF-1、GH 和GnRH）和免疫指標(biāo)（IgG、IgM、C3、C4、LZM、抗菌肽），表明投喂適宜配方的中草藥添加劑對(duì)長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)的生長(zhǎng)和免疫指標(biāo)有顯著促進(jìn)作用，尤以復(fù)方四效果最佳。綜上所述，在飼料中添加適宜配方的復(fù)方中草藥能有效改善長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)的免疫和生長(zhǎng)指標(biāo)，促進(jìn)生長(zhǎng)、增強(qiáng)免疫效果。