曹明原，李 瑩，綦國紅，楊志萍，黃德春，陳貴堂

（中國藥科大學(xué)工學(xué)院，國家中藥材加工技術(shù)研發(fā)專業(yè)中心，江蘇 南京 211198）

癌癥是導(dǎo)致工業(yè)化國家發(fā)病率和死亡率升高的主要原因，也是造成人類死亡的主要元兇，其中，乳腺癌在所有癌癥中致死率居第二，主要發(fā)生在女性身上，其發(fā)病率與死亡率預(yù)計(jì)在未來幾年將顯著增加[1-2]。目前乳腺癌的治療方法包括手術(shù)切除、內(nèi)分泌治療、化療與放射治療等[3]，這些治療方法都可能對患者造成不良的影響，許多化療藥物會導(dǎo)致癌癥患者白細(xì)胞數(shù)量減少并出現(xiàn)疼痛、惡心及食欲不振等癥狀[4]。所以，從食品或藥食同源產(chǎn)品中開發(fā)低毒高效的天然活性物質(zhì)替代藥物治療癌癥，是當(dāng)今醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)與關(guān)鍵。近年來，癌癥免疫治療已成為治療各種癌癥的最佳方法之一，免疫治療主要是通過刺激或增強(qiáng)人體免疫系統(tǒng)來對抗癌癥[5]。大量研究表明，多糖作為一種天然活性成分，有著調(diào)節(jié)免疫[6]、抗氧化[7]、抗腫瘤[8]及抗病毒[9]等作用，是低毒的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，常用于輔助治療，也是用于腫瘤免疫治療的理想選擇。

昆布是褐藻門海帶目海帶科植物海帶（Laminaria japonicaAresch）或翅藻科植物昆布（Ecklonia kuromeOkam）的干燥葉狀體，在我國山東半島、福建及浙江等沿海地區(qū)有著廣泛分布[10]。昆布在《千金方》《吳普本草》及《中華藥典》中均有收錄記載，在傳統(tǒng)藥方中常用于清腸排毒、除濕去腫及改善熱結(jié)便秘等[11]。此外，昆布作為一種藥食兩用物質(zhì)，還具有極高的營養(yǎng)價(jià)值，研究表明昆布含有豐富的氨基酸、藻膠酸、多糖、甘露醇及蛋白質(zhì)等成分[12]，其中昆布多糖作為昆布的主要活性成分之一，與昆布的多種生物活性如抗菌、免疫調(diào)節(jié)、降血糖及抗腫瘤等作用有關(guān)[13-16]。雖然關(guān)于昆布多糖的抗腫瘤活性已有大量研究，但到目前為止，關(guān)于昆布多糖對MCF-7乳腺癌細(xì)胞作用的相關(guān)報(bào)道較少，其對乳腺癌作用的體內(nèi)研究也較為缺乏。本課題組前期通過對3 種不同提取方式（熱水浸提、超聲輔助及復(fù)合酶提?。┑玫降亩嗵沁M(jìn)行分離純化和抗腫瘤活性篩選，發(fā)現(xiàn)熱水浸提的昆布多糖WLP5對MCF-7腫瘤細(xì)胞有較高的抑制率[10]。通過體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，WLP5可通過上調(diào)MCF-7細(xì)胞中p53和Bax蛋白的表達(dá)、促進(jìn)Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9的分泌來抑制腫瘤細(xì)胞的遷移，并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡[10,17]。然而，單一的體外實(shí)驗(yàn)不足以全面反映昆布多糖的抗腫瘤活性，需要進(jìn)行進(jìn)一步的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。因此，在前期工作的基礎(chǔ)上，本研究通過建立MCF-7乳腺癌裸鼠模型，進(jìn)一步研究昆布多糖WLP5的體內(nèi)抗腫瘤活性及免疫調(diào)節(jié)作用，以期為抗腫瘤藥物的開發(fā)及臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

MCF-7人乳腺癌細(xì)胞由中國藥科大學(xué)食品質(zhì)量與安全實(shí)驗(yàn)室傳代保存；SPF級裸鼠40 只，雌性，18～22 g，購于常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司（生產(chǎn)許可證號：SCXK（蘇）2016-0010）；所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作均符合中國藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用指南（中國藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理倫理委員會許可證號：SYXK-2018-0019）。

中性樹膠、無水乙醇（分析純）、二甲苯 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；蘇木精-伊紅（hematoxylineosin，HE）染液、分化液、返藍(lán)液 武漢賽維爾生物科技有限公司；鹽酸阿霉素（藥用級） 北京博奧拓達(dá)科技有限公司；白細(xì)胞介素-2（interleukin 2，IL-2）、白細(xì)胞介素-6（interleukin 6，IL-6）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor beta，TGF-β）及腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測試劑盒 武漢華美生物工程有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

JJ-12J脫水機(jī)、JB-P5包埋機(jī)、JB-L5凍臺 武漢俊杰電子有限公司；RM2016病理切片機(jī) 德國徠卡儀器有限公司；KD-P組織攤片機(jī) 浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司；GFL-230烤箱 天津市萊玻特瑞儀器設(shè)備有限公司；載玻片 武漢賽維爾生物科技有限公司；Eclipse E100顯微鏡、DS-U3成像系統(tǒng) 日本尼康有限公司；RT-6100酶標(biāo)儀 深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 昆布多糖分離純化

昆布多糖WLP5由本課題組前期分離純化得到[10]。昆布粉用熱水浸提（85 ℃、液料比80∶1（V/m）、提取5 h）后離心得到上清液，Sevag法除去蛋白質(zhì)后用無水乙醇醇沉，之后多次以乙醇、丙酮洗滌后真空干燥得到昆布粗多糖CWLP。WLP5為CWLP經(jīng)DEAE-52纖維素層析柱和Sephadex G-100葡聚糖凝膠層析柱洗脫、透析純化后的昆布多糖組分。WLP5純度為（89.53±1.34）%，分子質(zhì)量為14 466 Da，硫酸基相對含量為（3.465±0.004）%，糖醛酸相對含量為（32.642±0.001）%，糖鏈主要組成單糖為吡喃糖，由α-半縮醛羥基和β-半縮醛羥基兩種糖苷鍵連接，以β-糖苷鍵為主。前期體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)表明WLP5對MCF-7細(xì)胞有較好的抑制作用[17]，抑制率優(yōu)于其他組分，因此，該組分被用于后續(xù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 荷瘤裸鼠模型的建立

選用體質(zhì)量在18～22 g的SPF級裸鼠，在無病原體的環(huán)境中飼養(yǎng)，將2×106個(gè)MCF-7細(xì)胞皮下注射到裸鼠的腋窩下構(gòu)建荷瘤裸鼠模型，至腫瘤體積為約40 mm3時(shí)（約4 周）開始給藥。

1.3.3 動(dòng)物分組及給藥

建立乳腺癌裸鼠模型后，稱量裸鼠給藥前體質(zhì)量，用Excel軟件按分層隨機(jī)分組法將40 只裸鼠隨機(jī)分為模型組（生理鹽水0.2 mL/dmb）、昆布多糖低劑量組（50 μg/kgmb）、昆布多糖高劑量組（200 μg/kgmb）和陽性對照組（鹽酸阿霉素，0.4 μg/kgmb），共4 組，每組10 只，分籠飼養(yǎng)。連續(xù)飼養(yǎng)50 d，隔天灌胃給藥。第51天脫頸椎處死裸鼠，剝離腫瘤與肝臟并拍照記錄。

1.3.4 腫瘤體積及抑瘤率的測定

在給藥期間，每2 d稱量裸鼠的體質(zhì)量，用游標(biāo)卡尺測量并記錄腫瘤的長徑和短徑，并按公式（1）計(jì)算腫瘤體積，按公式（2）計(jì)算抑瘤率，以觀察昆布多糖對荷瘤裸鼠的影響[18]。

1.3.5 裸鼠血液學(xué)指標(biāo)分析

在給藥結(jié)束后，裸鼠禁食過夜，眼球取血測定血液學(xué)指標(biāo)[19]。

1.3.6 病理學(xué)組織觀察

在第51天采血后處死裸鼠并進(jìn)行解剖，將裸鼠的肝臟和腫瘤浸泡于體積分?jǐn)?shù)10%福爾馬林溶液中固定7 d，之后流水沖洗過夜，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，常規(guī)石蠟包埋，切片，切片厚度為4.0～4.5 μm。將切片依次置于二甲苯I（20 min）、二甲苯II（20 min）、無水乙醇I（5 min）、無水乙醇II（5 min）、體積分?jǐn)?shù)75%乙醇溶液（5 min），以自來水沖洗。切片于蘇木精染液染色3～5 min后以自來水沖洗，以分化液分化后以自來水沖洗，以返藍(lán)液返藍(lán)后再次洗。將切片依次置于體積分?jǐn)?shù)85%、95%乙醇溶液中脫水各5 min，于伊紅染液中染色5 min。將切片依次置于無水乙醇I（5 min）、無水乙醇II（5 min）、無水乙醇III（5 min）、二甲苯I（5 min）、二甲苯II（5 min）透明，中性樹膠封片。采用顯微鏡鏡檢并對圖像進(jìn)行分析。

1.3.7 血清細(xì)胞因子質(zhì)量濃度檢測

裸鼠眼球取血，收集1.0～1.5 mL血液置于EP管中靜置4 h后，3 000 r/min條件下離心10 min，取上清液凍存待檢[20]。檢測前令上清液平衡至室溫，按ELISA試劑盒方法進(jìn)行操作，檢測裸鼠血液中IL-2、IL-6、TGF-β及TNF-α質(zhì)量濃度。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA），P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 昆布多糖對裸鼠體質(zhì)量、腫瘤尺寸及抑瘤率的影響

如表1所示，在實(shí)驗(yàn)期間，各實(shí)驗(yàn)組裸鼠的體質(zhì)量與模型組間無顯著性差異。此外，各實(shí)驗(yàn)組裸鼠的飲食、排泄、毛色等指標(biāo)均正常，解剖臟器的外觀形態(tài)也無異常變化，說明昆布多糖有較高的安全性。

表1 裸鼠體質(zhì)量的變化（n＝10）Table 1 Changes in body mass of nude mice (n = 10) g

由表2可以看出，給藥34 d和50 d后，相比于模型組，陽性對照組、WLP5高劑量組裸鼠的腫瘤長徑均極顯著減?。≒＜0.01）；如表3所示，相比于模型組，給藥34 d和50 d后WLP5高劑量組和陽性對照組裸鼠的腫瘤短徑均極顯著減?。≒＜0.01），而WLP5低劑量組裸鼠的腫瘤短徑則在給藥50 d后極顯著減?。≒＜0.01）。

表2 裸鼠腫瘤長徑的變化（n＝10）Table 2 Changes in long diameter of tumors in nude mice (n = 10)cm

表3 裸鼠腫瘤短徑的變化（n＝10）Table 3 Changes in short diameter of tumors in nude mice (n = 10)cm

如表4所示，相比于模型組，WLP5高劑量組裸鼠在34 d時(shí)腫瘤體積極顯著減?。唤o藥50 d后，相比于模型組，其余3 組裸鼠腫瘤體積均極顯著減?。≒＜0.01），說明在給藥50 d左右，昆布多糖對腫瘤開始表現(xiàn)出明顯的抑制作用，而高劑量的昆布多糖則可更早地發(fā)揮作用。這為臨床試驗(yàn)提供了理論依據(jù)。

表4 裸鼠腫瘤體積變化（n＝10）Table 4 Changes in tumor volume in nude mice (n = 10)mm3

各實(shí)驗(yàn)組裸鼠的腫瘤解剖圖如圖1所示。根據(jù)腫瘤體積計(jì)算抑瘤率。給藥結(jié)束后，WLP5低劑量組與高劑量組的抑瘤率分別為36.5%和48.9%，說明WLP5具有明顯的抑瘤效果，且存在一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系。雖然昆布多糖的抑瘤率略低于陽性對照組（58.2%），但由于昆布多糖完全來自于食物，有著較好的安全性，其在腫瘤治療的應(yīng)用方面前景廣闊[21]。

圖1 裸鼠腫瘤解剖圖Fig. 1 Anatomical pictures of tumors in nude mice

2.2 昆布多糖對裸鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響

血液在人體中參與體液調(diào)節(jié)和氧氣運(yùn)輸，可以起到調(diào)節(jié)體溫并維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)等作用。通常來說，人體中各部位稍有異常病變，都會由血液攜帶其各種信息傳達(dá)出來，所以檢查血液中各種細(xì)胞成分?jǐn)?shù)量及比例等的變化可協(xié)助判斷機(jī)體各種組織器官的病變情況。如表5所示，陽性對照組裸鼠的淋巴細(xì)胞比率、單核細(xì)胞比率和單核細(xì)胞計(jì)數(shù)3 種血液指標(biāo)以及WLP5高劑量組單核細(xì)胞比率、平均血小板體積與模型組存在顯著或極顯著差異，其他指標(biāo)均無明顯差異。淋巴細(xì)胞是白細(xì)胞的主要成分，陽性對照組裸鼠的白細(xì)胞總數(shù)較模型組有所減少，且淋巴細(xì)胞比率較高（46.04%），說明此時(shí)陽性對照組裸鼠機(jī)體的免疫力較為低下，可能存在病毒感染癥狀；同時(shí)，陽性對照組裸鼠的單核細(xì)胞計(jì)數(shù)（0.04）顯著低于模型組（0.20），且單核細(xì)胞比率也較低，對于單核細(xì)胞，其數(shù)量可能在機(jī)體受到感染、機(jī)體防御能力被破壞時(shí)降低，這是因?yàn)閱魏思?xì)胞與粒細(xì)胞有相同的祖細(xì)胞，成熟的單核細(xì)胞由骨髓釋放進(jìn)入血液，當(dāng)機(jī)體發(fā)生感染或受到損傷時(shí)，單核細(xì)胞會迅速聚集并進(jìn)入感染或損傷的組織中分化成巨噬細(xì)胞，釋放干擾素、IL等參與機(jī)體防御機(jī)制[22]。與模型組相比，WLP5高劑量組裸鼠的單核細(xì)胞比率顯著降低，而白細(xì)胞數(shù)量、平均血小板體積有所升高和增加，表明WLP5可能激活并促進(jìn)了免疫反應(yīng)；血小板由骨髓中的巨核細(xì)胞產(chǎn)生，在尚未成熟時(shí)體積相對較大，由骨髓中巨核細(xì)胞新產(chǎn)生的血小板由骨髓釋放至外周血的數(shù)量偏多會導(dǎo)致平均血小板體積升高[23]，即WLP5高劑量組裸鼠骨髓產(chǎn)血小板功能相對活躍。

表5 昆布多糖對裸鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響Table 5 Effect of L. japonica polysaccharide on hematological parameters of nude mice

2.3 裸鼠肝臟組織和腫瘤組織的病理學(xué)觀察

由圖2可見，各實(shí)驗(yàn)組裸鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞排列均勻，胞漿豐富，肝小葉、肝索和肝竇結(jié)構(gòu)可辨，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞核清晰可見，相互間界限明顯，無明顯異常[24]。表明低劑量和高劑量昆布多糖都對正常細(xì)胞幾乎無毒，副作用很小，其臨床應(yīng)用是安全的。

圖2 裸鼠肝臟病理學(xué)組織變化Fig. 2 Histopathological changes of liver tissue in nude mice

正常情況下腫瘤細(xì)胞和T細(xì)胞的細(xì)胞核在細(xì)胞中所占比例較大，實(shí)體瘤內(nèi)細(xì)胞的細(xì)胞核被染成藍(lán)紫色，而細(xì)胞漿、結(jié)締組織等會被染成深淺不同的紅色，從而能夠分辨出病變的組織或細(xì)胞[25]。由圖3可以看出，相較于肝臟組織，腫瘤細(xì)胞中的藍(lán)紫色更明顯。模型組腫瘤細(xì)胞排列紊亂、形態(tài)異常，胞內(nèi)有胞脂肪變性和空泡，瘤組織邊緣有炎性浸潤，還有少量壞死細(xì)胞；WLP5低劑量組腫瘤細(xì)胞的形態(tài)與模型組相近，存在部分細(xì)胞變性壞死；而WLP5高劑量組與陽性對照組的腫瘤細(xì)胞形態(tài)相似，出現(xiàn)大面積壞死區(qū)域，細(xì)胞核消失，說明高劑量的昆布多糖對腫瘤細(xì)胞有著抑制并誘導(dǎo)凋亡的作用。

2.4 昆布多糖對裸鼠細(xì)胞因子釋放量的影響

如表6所示，與模型組相比，WLP5低劑量組和高劑量組裸鼠的IL-2、IL-6釋放量均顯著或極顯著提高（P＜0.05，P＜0.01）。IL-2和IL-6釋放量的升高說明昆布多糖極有可能是通過激活免疫系統(tǒng)，促進(jìn)IL-2和IL-6的分泌，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的生長分化、激活巨噬細(xì)胞來實(shí)現(xiàn)抑制腫瘤的作用。IL-6和TNF-α作為多效細(xì)胞因子，與炎癥的發(fā)展及多種腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)[26]。瞿秋紅等[27]的研究表明，上調(diào)IL-6基因表達(dá)、下調(diào)TPD52及TNF-α基因表達(dá)可抑制子宮肌瘤細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡。本研究中，相較于模型組，WLP5低劑量與高劑量組裸鼠TNF-α的釋放量隨WLP5劑量的增加呈現(xiàn)下降趨勢，表明昆布多糖可能通過下調(diào)TNF-α的表達(dá)，從而下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶等與腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲有關(guān)的細(xì)胞因子表達(dá)[28]，進(jìn)而發(fā)揮抗腫瘤作用。TGF-β可以在腫瘤發(fā)展初期抑制腫瘤細(xì)胞的增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，但是到了腫瘤發(fā)展階段，TGF-β的作用會發(fā)生轉(zhuǎn)變，其抑癌作用減弱而促癌作用增強(qiáng)[29-30]，WLP5低劑量組與高劑量組裸鼠的TGF-β表達(dá)量與模型組相比均有所減少，說明昆布多糖可能通過抑制TGF-β的表達(dá)，從而抑制其促癌作用，進(jìn)而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞的效果。

表6 昆布多糖對裸鼠細(xì)胞因子釋放量的影響Table 6 Effect of L. japonica polysaccharide on the release of cytokines

褐藻在我國沿海地區(qū)分布廣泛，是一類重要的海洋生物資源，近年來，褐藻多糖以其優(yōu)異的抗腫瘤活性受到研究人員越來越多的關(guān)注。常見的褐藻包括等昆布、萱藻、羊棲菜、裙帶菜等，Han Yun等[31]對裙帶菜多糖中分離得到的裙帶菜多糖SPUP組分進(jìn)行抗腫瘤活性研究，結(jié)果表明SPUP（100～300 mg/kgmb）可明顯抑制7,12-二甲基苯并蒽（7,12-dimethyltetraphene，DMBA）誘導(dǎo)的乳腺癌大鼠乳房異常增大，降低腫瘤發(fā)生率。免疫療法是目前抗腫瘤的重要手段之一，SPUP被證明可通過提升脾臟和胸腺指數(shù)，拮抗乳腺癌大鼠的免疫抑制[31]。Fan Sairong等[32]構(gòu)建HepG2肝癌小鼠模型，發(fā)現(xiàn)羊棲菜多糖SFPS（100、200、400 mg/kgmb）可顯著抑制腫瘤生長，提高小鼠IL-1、NO水平，并通過上調(diào)Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bcl-2 associated X，Bax）表達(dá)來促進(jìn)HepG2細(xì)胞凋亡，同時(shí)促進(jìn)脾臟的生長。在本研究中，觀察到昆布多糖WLP5（50、200 μg/kgmb）可通過刺激細(xì)胞因子IL-2和IL-6的分泌來激活乳腺癌裸鼠的免疫反應(yīng)并抑制腫瘤生長，也證明免疫系統(tǒng)的激活在抗癌中具有重要作用。Vishchuk等[33]發(fā)現(xiàn)裙帶菜多糖組分UpF2對乳腺癌T-47D細(xì)胞有顯著的抑制作用，認(rèn)為該抑制活性與其結(jié)構(gòu)中含有較多的β-D-半乳糖和巖藻糖有關(guān)。本課題組前期對昆布多糖WLP5單糖組成的測定結(jié)果表明，WLP5由D-甘露糖、核糖、鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-半乳糖、木糖、巖藻糖組成，其物質(zhì)的量比為1∶0.39∶0.88∶1.89∶2.37∶1.81∶12.56[17]，可看出其中巖藻糖和D-半乳糖占比較大，該組分在體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)中對MCF-7細(xì)胞也表現(xiàn)出較好的抑制活性，與Vishchuk等[33]的結(jié)論一致，因此推測巖藻糖和D-半乳糖占比更高的WLP5組分可能在MCF-7荷瘤裸鼠的抗腫瘤活性中也發(fā)揮著巨大的作用。褐藻糖膠（巖藻聚糖）是一種特殊的天然硫酸化多糖，存在于各種棕色海藻細(xì)胞壁基質(zhì)中，Palanisamy等[34]的研究表明，羊棲菜中的褐藻糖膠（150 μg/mL）對MCF-7乳腺癌細(xì)胞的抑制率可達(dá)90.4%；從褐藻Saccharina cichorioides中提取的褐藻糖膠增加了HCT-116人結(jié)腸癌細(xì)胞對白藜蘆醇的敏感性，二者聯(lián)合使用顯著提升了白藜蘆醇的抗腫瘤作用[35]。褐藻多糖優(yōu)異的抗腫瘤活性提示多糖可作為潛在的癌癥預(yù)防藥物或輔助化療藥物。

3 結(jié) 論

本研究通過對昆布多糖干預(yù)荷瘤裸鼠腫瘤體積變化、肝臟及腫瘤病理學(xué)組織切片觀察、血液學(xué)指標(biāo)和細(xì)胞因子釋放的測定，考察了昆布多糖在體內(nèi)的抗腫瘤活性。裸鼠的生長情況、體質(zhì)量變化以及腫瘤的尺寸都是反映藥物作用最基本的數(shù)據(jù)。結(jié)果表明，各實(shí)驗(yàn)組裸鼠的體質(zhì)量在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間沒有產(chǎn)生明顯差異，裸鼠的飲食及排泄等指標(biāo)均正常。在給藥34 d后，WLP5高劑量組裸鼠的腫瘤體積顯著小于模型組。低劑量與高劑量WLP5最終的抑瘤率分別為36.5%和48.9%，表明昆布多糖對腫瘤有較強(qiáng)的抑制作用。對裸鼠血液指標(biāo)的檢測結(jié)果表明，高劑量WLP5降低了單核細(xì)胞比率并增加了血小板平均體積，該組其余各項(xiàng)指標(biāo)與模型組相比并無顯著性差異。對細(xì)胞因子釋放量的測定結(jié)果表明，低劑量和高劑量WLP5均顯著或極顯著促進(jìn)了IL-2和IL-6的釋放，而TNF-α與TGF-β的釋放量減少。裸鼠肝臟、腫瘤組織的HE染色結(jié)果表明，WLP5對肝臟細(xì)胞不具有毒性作用，各實(shí)驗(yàn)組裸鼠肝臟細(xì)胞形態(tài)均正常；而WLP5高劑量組裸鼠的腫瘤細(xì)胞則出現(xiàn)了大面積壞死等現(xiàn)象。綜上所述，昆布多糖作為天然活性物質(zhì)，具有較強(qiáng)的抗腫瘤作用，且無明顯毒性，其在乳腺癌的臨床治療方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。