頂空氣相色譜法測定阿苯達(dá)唑苯殘留

厲小雯，應(yīng)一鋒，樓賽麗

（浙江普洛康裕制藥有限公司，浙江東陽 322118）

阿苯達(dá)唑（又名丙硫達(dá)唑）是一種高效、低毒的廣譜驅(qū)蟲藥，作為苯并咪唑類藥物中殺蟲作用最強(qiáng)的一種，適用于驅(qū)除蛔蟲、蟯蟲、鉤蟲、鞭蟲、鉤蟲、糞圓線蟲等寄生蟲[1]。阿苯達(dá)唑在體內(nèi)代謝為亞砜類或砜類后，可以抑制寄生蟲對葡萄糖和其他多種營養(yǎng)的吸收，導(dǎo)致蟲體糖原耗竭，并阻礙延胡索酸還原酶系統(tǒng)，從而影響三磷酸腺苷（ATP）的產(chǎn)生，使寄生蟲無法存活和繁殖[2]。

在藥物的生產(chǎn)過程中，苯殘留可能來源于溶劑殘留、生產(chǎn)工藝及設(shè)備、原輔料降解、包裝材料及環(huán)境等因素[3]。根據(jù)2020 版《中國藥典》四部通則中的殘留溶劑測定法第二法（毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣程序升溫法）[4]和《雜質(zhì)：殘留溶劑的指導(dǎo)原則》（ICH Q3C）[5]，苯屬于Ⅰ類溶劑，其在原料藥中的限度標(biāo)準(zhǔn)≤2 mg/kg。苯被列為第一類致癌物，具有較大的神經(jīng)毒性與致癌性，對體內(nèi)諸多器官有嚴(yán)重危害性，因此必須嚴(yán)格控制藥物中的苯殘留。本文采用頂空氣相色譜法（HS-GC）對阿苯達(dá)唑中苯殘留進(jìn)行檢測和控制，確保藥品的使用安全。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

阿苯達(dá)唑原料藥，市售；苯，分析純，上海展云化工有限公司；甲醇，分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；二甲基亞砜（DMSO），HPLC 級，菲立試劑（香港）有限公司。

8890 氣相色譜儀（FID 檢測器，7697A 頂空進(jìn)樣器），美國Agilent 公司；XS205DU 分析天平，瑞士梅特勒-托利多公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 溶液的制備

空白溶液（稀釋劑）：二甲基亞砜。

供試品溶液：精密稱取原料藥約0.5 g，置20 mL頂空瓶中，加入DMSO 5 mL，加蓋密封。

對照品溶液：精密稱取苯約100 mg（約110 μL），置100 mL 容量瓶中，加DMSO 溶解定容至刻度，得原液；精密量取1 mL 原液置100 mL 容量瓶中，加DMSO 稀釋定容至刻度，即得對照品貯備液；精密量取2 mL 對照品貯備液，置100 mL 量瓶中，加DMSO稀釋定容至刻度，即得測試液。

1.2.2 色譜條件

采用DB-624毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，1.8 μm）；柱溫采用程序升溫，起始溫度40 ℃維持5 min，再以10 ℃/min 升溫至200 ℃，維持5 min；載氣：N2；分流比：2 ∶1；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；檢測器溫度：240 ℃；流速：1.5 mL/min；頂空進(jìn)樣，100 ℃維持30 min。

1.2.3 專屬性

稱取苯101.68 mg、甲醇102.17 mg，置同一20 mL容量瓶中，加DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻得溶液1；量取1 mL 溶液1 置50 mL 容量瓶中，加DMSO 稀釋定容至刻度，得溶液2；量取1 mL 溶液2 置50 mL 容量瓶中，加DMSO 稀釋定容至刻度，作為專屬性樣品溶液。

1.2.4 線性及范圍

取1.2.1項(xiàng)下對照品貯備液，分別精密量取適量，制備成0.10 μg/mL、0.20 μg/mL、0.40 μg/mL、1.01 μg/mL、1.21 μg/mL、2.02 μg/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。照1.2.2 項(xiàng)下條件進(jìn)行測定，在相對限度濃度50%、100%、200%、500%、600%、1 000%的范圍內(nèi)，以苯的濃度和峰面積分別作為橫坐標(biāo)、縱坐標(biāo)來進(jìn)行線性回歸分析。

1.2.5 定量限及檢測限

取1.2.1 項(xiàng)下對照品貯備液，分別精密量取適量，制備成定量限溶液和檢測限溶液，照1.2.2 項(xiàng)下條件進(jìn)行測定，以信噪比分別約20 和10 為標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.6 精密度

按1.2.1 項(xiàng)制備供試品溶液，共6 份，分別由2 名工作人員照1.2.2 項(xiàng)下條件分別進(jìn)行測定，計(jì)算精密度和中間精密度。

1.2.7 準(zhǔn)確度

精密稱取原料藥0.5 g，置20 mL頂空瓶中，共9份。分別加入相對限度濃度50%、100%、1 000%三個(gè)水平的對照品溶液（每個(gè)溶液3 份），照1.2.2 項(xiàng)下條件進(jìn)行測定，計(jì)算回收率。

1.2.8 耐用性

取1.2.1 項(xiàng)下對照品溶液，分別改變流速（1.3 mL/min、1.7 mL/min）和柱溫起始溫度（38 ℃、42 ℃），考察各變化條件下苯的拖尾因子和理論板數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性

取對照品溶液在1.2.2 項(xiàng)下條件下重復(fù)進(jìn)樣6 次，峰面積的RSD為2.0%，小于15%，說明系統(tǒng)適用性良好。

2.2 專屬性

空白溶液對苯（保留時(shí)間9.5 min）的檢測無干擾；混合溶液圖譜中苯與甲醇的分離度為38.1，與其他未知雜質(zhì)也能實(shí)現(xiàn)良好分離，相互之間不存在干擾（見圖1）。

圖1 混合溶液圖譜

2.3 線性及范圍

苯的線性方程為y=25.459x-0.315 2，線性相關(guān)系數(shù)r=0.999 9，線性范圍為0.10～2.02 μg/mL。在該范圍內(nèi)，苯的濃度與峰面積之間存在良好的線性關(guān)系（見圖2）。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.4 定量限及檢測限

經(jīng)計(jì)算，定量限為0.10 μg/mL，信噪比21.8；檢測限為0.05 μg/mL，信噪比11.4。在定量限濃度下，重復(fù)進(jìn)樣6 次，苯峰面積的RSD 為3.1%，符合測定要求。

2.5 精密度

同一工作人員苯峰面積的RSD分別為1.2%和1.1%（n=6），所有樣品苯峰面積的RSD為2.3%（n=12），說明方法精密度良好。

2.6 準(zhǔn)確度

如表1 所示，苯的回收率在102.5%～110.2%，RSD小于10%。說明該方法適用于苯殘留的檢測，結(jié)果準(zhǔn)確。

表1 回收率結(jié)果

2.7 耐用性

如表2 所示，每個(gè)變化條件下對照品溶液中苯的拖尾因子均在0.8～1.2，說明色譜條件的微小變化不影響苯的峰形；與標(biāo)準(zhǔn)條件相比，苯的拖尾因子和理論板數(shù)沒有顯著變化，說明該方法的耐用性良好。

表2 耐用性結(jié)果

3 討論與結(jié)論

采用HS-GC 法測定苯殘留時(shí)，要先考慮樣品的溶解性，并確定合適的溶劑。阿苯達(dá)唑不溶于水、乙醇，微溶于丙酮、氯仿[1]。二甲基亞砜沸點(diǎn)較高（189℃），溶劑出峰時(shí)間較晚，不會干擾苯的測定；且二甲基亞砜作為極性很高的“萬能溶劑”[6]，能與大多數(shù)有機(jī)溶劑互溶，能很好地溶解苯。因此二甲基亞砜作為首選溶劑。保留時(shí)間5.3 min 的峰為二甲硫醚，是溶劑二甲基亞砜受熱分解產(chǎn)物[7]，對苯殘留的檢測沒有干擾。

頂空進(jìn)樣適合檢測低揮發(fā)性（沸點(diǎn)不高于100 ℃）的物質(zhì)[8]，苯的沸點(diǎn)為80.1 ℃，因此頂空進(jìn)樣作為首選進(jìn)樣方式。將頂空平衡時(shí)間由20 min 增加至30 min，平衡溫度由80 ℃提高至100 ℃，能保證有更多的苯逸出，從而增加苯的響應(yīng)，使得靈敏度能夠滿足要求。

本文建立了阿苯達(dá)唑中苯殘留的頂空氣相色譜法（HS-GC）測定方法。結(jié)果顯示，苯與阿苯達(dá)唑生產(chǎn)過程中引入的其他雜質(zhì)能夠有效分離，專屬性良好；該方法操作簡便，靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度均能滿足殘留分析的要求，方法耐用性、線性及范圍良好，可對阿苯達(dá)唑原料藥中苯殘留量進(jìn)行定量控制。