吳 宙， 周麗青， 遲長(zhǎng)鳳， 吳 彪， 孫秀俊，劉志鴻， 趙 丹， 于 濤， 鄭言鑫

(1. 浙江海洋大學(xué)，國(guó)家海洋設(shè)施養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，海洋生物種質(zhì)發(fā)掘與利用國(guó)家地方聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，浙江 舟山 316022；2. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部海洋漁業(yè)可持續(xù)發(fā)展重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266071；3. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院長(zhǎng)島增殖實(shí)驗(yàn)站，山東 煙臺(tái) 265800)

皺紋盤鮑(Haliotis discus hannai)屬腹足綱(Gastropoda)前鰓亞綱(Prosobranchia)原始腹足目(Archaeogastropoda)鮑科(Haliotidae)鮑屬(Haliotis)，自然分布于朝鮮半島、日本北部以及我國(guó)山東半島、遼東半島沿海[1-2]，屬于北方冷水物種。皺紋盤鮑具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值與營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，有“海洋軟黃金”之稱，是我國(guó)一種重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖貝類。

在20世紀(jì)50年代，我國(guó)皺紋盤鮑的捕撈量超100 t，捕撈量過大使得自然資源遭受嚴(yán)重破壞，至70年代捕撈量?jī)H有20～30 t。為恢復(fù)皺紋盤鮑資源，其人工繁殖、育苗、增殖放流試驗(yàn)也隨之展開[3-4]，并取得突破性進(jìn)展，至20世紀(jì)90年代，我國(guó)開展了皺紋盤鮑“南北接力”的養(yǎng)殖試驗(yàn)，將北方培育的皺紋盤鮑苗種于11月運(yùn)輸至福建海區(qū)養(yǎng)殖，到次年5月再運(yùn)回北方養(yǎng)殖，成功避免了皺紋盤鮑稚鮑在北方寒冷的冬季因水溫過低生長(zhǎng)緩慢、死亡率高和在南方水域夏季溫度過高導(dǎo)致大量死亡的風(fēng)險(xiǎn)。20世紀(jì)90年代后期到2010年，皺紋盤鮑種群雜交技術(shù)的突破及應(yīng)用推動(dòng)了我國(guó)皺紋盤鮑養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)重心南移至福建省，“北鮑南養(yǎng)”使得皺紋盤鮑人工養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)得到迅速發(fā)展[3]，也成為我國(guó)鮑魚養(yǎng)殖的主要品種。

人工養(yǎng)殖與選育的進(jìn)程會(huì)在一定程度上影響物種遺傳多樣性水平，或改變其原有的遺傳結(jié)構(gòu)，甚至使群體發(fā)生顯著的遺傳分化。張國(guó)范等[5]利用皺紋盤鮑中國(guó)群體和日本野生群體進(jìn)行單自交與單正反雜交獲得了4個(gè)F1家系，通過RAPD分析發(fā)現(xiàn)兩個(gè)雜交組合家系的雜合度均高于自交組合，推測(cè)雜交產(chǎn)生雜種優(yōu)勢(shì)，使其遺傳多樣性水平有所提高。高祥剛等[6]采用AFLP標(biāo)記技術(shù)對(duì)國(guó)內(nèi)雌性皺紋盤鮑與日本野生雄性皺紋盤鮑雜交的F1群體遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)其遺傳多樣性水平顯著高于日本野生群體，認(rèn)為群體間的雜交可以有效提高遺傳多樣性。李莉等[7]通過微衛(wèi)星標(biāo)記分析發(fā)現(xiàn)，皺紋盤鮑養(yǎng)殖群體遺傳多樣性低于野生群體，但仍處于較高水平，認(rèn)為選用野生皺紋盤鮑個(gè)體與遺傳距離較大的個(gè)體作為親本，可避免因近親交配而導(dǎo)致的遺傳多樣性下降。Li等[8]利用7個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記，同樣發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性顯著低于野生群體，且各群體之間發(fā)生顯著的遺傳分化，認(rèn)為親鮑數(shù)量少且雄雌性別比例低是造成養(yǎng)殖群體遺傳變異顯著減少的原因。

微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)具有特異性PCR擴(kuò)增、多態(tài)性豐富、突變量高、遵循孟德爾共顯性遺傳等特點(diǎn)[9]，因此近年來(lái)我國(guó)研究人員主要采用微衛(wèi)星標(biāo)記的方法來(lái)研究皺紋盤鮑群體遺傳多樣性[10-12]，但開發(fā)新的微衛(wèi)星標(biāo)記存在工作繁瑣、費(fèi)時(shí)、成本高等缺點(diǎn)[9]。而目前國(guó)內(nèi)尚未見有基于線粒體DNA標(biāo)記手段研究皺紋盤鮑群體遺傳結(jié)構(gòu)和遺傳多樣性比較詳盡的相關(guān)報(bào)道。線粒體DNA (mtDNA)具有母系遺傳、進(jìn)化速率快、分子簡(jiǎn)單、幾乎不發(fā)生重組等特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于群體遺傳學(xué)、生物系統(tǒng)發(fā)育研究[9,13-14]。其中mtDNA細(xì)胞色素C氧化酶亞基(COⅠ)基因和細(xì)胞色素b (Cytb)基因進(jìn)化速率適中，適合種群水平基因差異檢測(cè)，是研究群體遺傳結(jié)構(gòu)、遺傳多樣性的理想標(biāo)記[15-18]。本研究采集了我國(guó)南北沿海6個(gè)皺紋盤鮑群體樣本，基于COⅠ、Cytb基因序列分析了各群體皺紋盤鮑的遺傳結(jié)構(gòu)與遺傳多樣性，為評(píng)估我國(guó)皺紋盤鮑遺傳資源以及研究養(yǎng)殖模式對(duì)遺傳結(jié)構(gòu)的影響提供了科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

6個(gè)群體的皺紋盤鮑分別于2020年8月—2021年3月取自福建漳州(ZZ)、遼寧大連(DL)、山東榮成(RC)及長(zhǎng)山列島的南隍城島(NH)、砣磯島(TJ)、大欽島(DQ)。其中ZZ群體為洋下群體，長(zhǎng)期定殖于漳州，屬累代養(yǎng)殖群體；DL群體為大連繁育至蓬萊越冬群體，屬非累代養(yǎng)殖群體；RC群體為養(yǎng)殖公司繁育群體，屬累代養(yǎng)殖群體；NH群體為累代養(yǎng)殖群體；TJ群體養(yǎng)殖方式為吊籠養(yǎng)殖，成長(zhǎng)到一定規(guī)格后即全部售出，屬非累代養(yǎng)殖群體；DQ群體為野生群體，6個(gè)皺紋盤鮑群體采樣信息見表1?；铙w鮑采集至實(shí)驗(yàn)室解剖，取肌肉組織液氮速凍后置于?80 °C超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩１緦?shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的護(hù)理和使用指南開展。

表1 皺紋盤鮑采樣信息Tab. 1 Sampling information of H. discus hannai

1.2 DNA提取、PCR擴(kuò)增與測(cè)序

取皺紋盤鮑肌肉組織，采用酚-氯仿抽提法進(jìn)行DNA提取。提取完畢后以1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)、Gene finder染色，成像系統(tǒng)觀察與拍照，并利用NanoDrop Lite超微量分光光度計(jì)測(cè)量DNA的濃度與純度。取質(zhì)量較好的DNA部分稀釋至50 ng/μL，置于?80 °C超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

根據(jù)皺紋盤鮑線粒體基因序列(登錄號(hào)：EU595789.1)，利用Primer 3軟件進(jìn)行COⅠ、Cytb基因引物設(shè)計(jì)并交由北京擎科生物科技股份有限公司青島分公司進(jìn)行測(cè)序分析。引物序列分別為COⅠ-F：(5′-TTCTGACTCCTCCCACCATC-3′)；COⅠ-R:(5′-GCGAATACGGCTCCTATTGA-3′)；Cytb-F：(5′-CGTGAATTATGGGTGGCTCT-3′)；Cytb-R：(5′-AGTAAACACACGCCCAATCC-3′)。PCR反應(yīng)體系：2×TaqPlus Master Mix Ⅱ 25 μL，正反引物各2 μL，DNA模板濃度50 ng/μL，取1 μL，補(bǔ)充ddH2O至總體積為50 μL。PCR反應(yīng)程序：95 °C預(yù)變性3 min，30個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括95 °C變性15 s、58 °C退火20 s、72 °C延伸1 min，最后徹底延伸5 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，成像系統(tǒng)觀察、拍照，選擇具有單一明亮條帶的PCR產(chǎn)物原液，交由北京擎科生物科技股份有限公司青島分公司純化、測(cè)通。

1.3 數(shù)據(jù)分析

所有序列均用Chromas 2.33軟件觀察峰圖、校對(duì)數(shù)據(jù)，將有雜峰、雙峰的樣品重新測(cè)序。利用Bioedit 7.0.5軟件對(duì)所有序列進(jìn)行序列比對(duì)、剪切。利用DNAsp 5.10軟件[19]計(jì)算核苷酸變異位點(diǎn)、單倍型數(shù)、各群體單倍型多樣性(haplotype diversity，Hd)、核苷酸多樣性(nucleotide diversity，π)、平均核苷酸差異指數(shù)k (mean pairwise difference)等遺傳多樣性參數(shù)。利用MEGA 6.06[20]以紅鮑(H. rufescens)、新西蘭鮑(H. iris)為外類群，通過鄰接法(Neighbor-joining，NJ)構(gòu)建皺紋盤鮑各單倍型的系統(tǒng)發(fā)育樹。利用Arlequin 3.5軟件[21]進(jìn)行AMOVA[22]方差分析，分析皺紋盤鮑群體間遺傳變異情況，采用分化固定指數(shù)(Fst)以1 000次重抽樣檢驗(yàn)方法來(lái)評(píng)估兩兩群體間的遺傳分化程度。利用Popart 1.7軟件[23]構(gòu)建單倍型網(wǎng)絡(luò)圖。

2 結(jié)果

2.1 COⅠ基因序列結(jié)果分析與遺傳多樣性

PCR產(chǎn)物經(jīng)純化、測(cè)序、序列比對(duì)、剪切后得到730 bpCOⅠ基因部分序列?；谘芯康?個(gè)群體259個(gè)個(gè)體的COⅠ基因序列中，發(fā)現(xiàn)堿基A、T、C、G比例為28.56%、31.05%、23.60%、16.79%。A+T堿基含量為59.61%，C+G堿基含量40.39%，具有明顯的A+T堿基偏倚性。此外，共發(fā)現(xiàn)48個(gè)變異位點(diǎn)，堿基變異比例為6.6%。其中單一信息位點(diǎn)13個(gè)，簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)35個(gè)。變異類型均為轉(zhuǎn)換，無(wú)堿基的顛換、插入與缺失。

在259個(gè)個(gè)體中，共定義了30種單倍型，其中優(yōu)勢(shì)單倍型為Hap2、Hap3，分別占個(gè)體總數(shù)的17.4%、33.2%。Hap2、Hap3、Hap6為6個(gè)群體共有單倍型，Hap8、Hap11為DL群體特有單倍型，Hap15為ZZ群體特有單倍型，Hap17～19為NH特有單倍型，Hap20、Hap21為DQ特有單倍型，Hap25～30為TJ群體特有單倍型。TJ群體的單倍型種類最多(18個(gè))，RC群體的單倍型種類最少(6個(gè))。以紅鮑、新西蘭鮑為外類群和所有檢測(cè)的單倍型構(gòu)建的NJ系統(tǒng)發(fā)育樹見圖1，結(jié)果顯示，兩外群的基因分布在NJ樹的最末端，30個(gè)單倍型廣泛分散在NJ樹的各個(gè)分支，僅砣磯島群體的單倍型Hap25獨(dú)立為一支，可以明顯看出單倍型與地理群體間不存在明確的對(duì)應(yīng)關(guān)系。構(gòu)建的單倍型網(wǎng)絡(luò)圖見圖2，其與NJ發(fā)育樹呈現(xiàn)了相同的結(jié)果，但在圖中可以明顯看出，不同單倍型之間具有顯著的堿基差異。

圖1 皺紋盤鮑COⅠ基因序列構(gòu)建的NJ進(jìn)化樹及在6個(gè)群體中的分布Fig. 1 Neighbor-joining phylogenetic tree of COⅠ haplotypes and their distribution in 6 populations of H. discus hannai

圖2 皺紋盤鮑線粒體COⅠ基因單倍型網(wǎng)絡(luò)圖Fig. 2 Network diagram of COⅠ haplotypes in H. discus hannai

皺紋盤鮑6個(gè)群體COⅠ基因的遺傳多樣性參數(shù)見表2，6個(gè)群體總體的Hd(0.586～0.897)、π(0.005 6～0.008 1)處于較高水平，其中TJ群體的Hd(0.897±0.028)與π(0.008 1±0.000 8)均為最高，NH群體的Hd(0.586±0.093)最低，DL群體π(0.005 6±0.000 6)最低，總體呈現(xiàn)高單倍型多樣性與高核苷酸多樣性的特征。

表2 基于COⅠ基因序列皺紋盤鮑6個(gè)群體的遺傳多樣性指數(shù)Tab. 2 Genetic diversity indices of six populations in H. discus hannai based on COⅠ gene sequence

群體間分化指數(shù)Fst值見表3，大部分群體間的分化指數(shù)達(dá)到了顯著性水平(P＜0.05)，僅DL與TJ群體、DQ與NH群體之間的Fst未達(dá)到顯著性水平(P＞0.05)，表明絕大多數(shù)群體間均存在遺傳分化。RC群體與其余5個(gè)群體的分化指數(shù)范圍為0.166 5～0.316 7；均達(dá)到高程度遺傳分化，ZZ與TJ之外的4群體為中等程度及以上遺傳分化(Fst：0.055 6～0.203 9)，其余群體兩兩間的遺傳分化均為低度分化(Fst＜0.05)。

表3 基于COⅠ基因皺紋盤鮑6個(gè)群體間的分化指數(shù)FstTab. 3 The Fst value in six populations of H. discus hannai based on COⅠ gene sequence

由AMOVA分析可知，將6個(gè)群體均歸為一個(gè)組群進(jìn)行分析時(shí)，群體間的遺傳變異占總變異的12.05%，群體內(nèi)的遺傳變異占總變異的87.95%，表明遺傳變異主要來(lái)源于群體內(nèi)，并且群體間遺傳分化達(dá)到極顯著水平(Fst=0.120 5，P＜0.01) (表4)。

表4 基于COⅠ基因序列皺紋盤鮑6個(gè)群體分子變異分析(AMOVA)Tab. 4 Analysis of molecular variance (AMOVA) of all 6 populations of H. discus hannai based on COⅠ gene sequence

2.2 Cytb基因序列結(jié)果分析與遺傳多樣性

經(jīng)序列比對(duì)、剪切后同樣得到730 bp的Cytb基因部分序列。6個(gè)群體皺紋盤鮑的A、T、C、G組成比例分別為20.27%、40.2%、16.95%、22.58%。A+T出現(xiàn)頻率為60.47%，C+G的出現(xiàn)頻率為39.53%。同COⅠ基因類似，表現(xiàn)出明顯的A+T堿基偏向性。共發(fā)現(xiàn)59個(gè)變異位點(diǎn)，其中單一信息位點(diǎn)21個(gè)，簡(jiǎn)約信息化位點(diǎn)38個(gè)。變異類型均為轉(zhuǎn)換，無(wú)堿基的顛換、插入與缺失。

皺紋盤鮑259個(gè)個(gè)體中，共檢測(cè)到了32個(gè)單倍型。其中優(yōu)勢(shì)單倍型為Hap2、Hap3，并為6個(gè)群體共有，出現(xiàn)頻率分別為16.21%、33.20%，單倍型Hap9、Hap12僅在DL群體出現(xiàn)過1次，Hap17～22僅在NH群體出現(xiàn)過1次，Hap23僅在DQ群體出現(xiàn)過1次，Hap27～32僅在TJ群體出現(xiàn)了1次。其中TJ群體擁有最多的單倍型(19個(gè))，RC群體擁有最少的單倍型(7個(gè))?；贑ytb基因以紅鮑、新西蘭鮑為外類群和所有檢測(cè)的單倍型構(gòu)建的NJ系統(tǒng)發(fā)育樹見圖3，構(gòu)建的單倍型網(wǎng)絡(luò)圖見圖4，結(jié)果與基于COⅠ基因構(gòu)建的NJ樹、單倍型網(wǎng)絡(luò)圖基本一致。

圖3 皺紋盤鮑Cytb基因序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)樹及在6個(gè)群體中的分布Fig. 3 Neighbor-joining phylogenetic tree of Cytb haplotypes and their distribution in 6 populations of H. discus hannai

圖4 皺紋盤鮑線粒體Cytb基因單倍型網(wǎng)絡(luò)圖Fig. 4 Network diagram of Cytb haplotypes in H. discus hannai

基于6個(gè)皺紋盤鮑Cytb基因序列分析得到的遺傳多樣性參數(shù)見表5，6個(gè)群體總體的Hd(0.605～0.909)和π(0.007 7～0.012 0)均處于較高水平。其中TJ群體Hd、π參數(shù)為6個(gè)群體中最高，分別為0.909±0.028、0.012 0±0.001 0，RC群體的Hd最低(0.605±0.084)，DL群體的π最低(0.007 7±0.000 9)。與COⅠ基因序列分析結(jié)果一致，總體呈現(xiàn)出高單倍型多樣性與高核苷酸多樣性的特征。

表5 基于Cytb基因序列皺紋盤鮑6個(gè)群體的遺傳多樣性指數(shù)Tab. 5 Genetic diversity indices in six populations of H. discus hannai based on Cytb gene sequence

由群體間的分化指數(shù)Fst值可知，除了DL與NH、DQ，DQ與NH、TJ群體間的遺傳分化未達(dá)到顯著水平之外(P＞0.05)，其余群體間的遺傳分化均達(dá)到了顯著水平(P＜0.05) (表6)。RC與其他群體(除TJ群體外)間的分化指數(shù)范圍為0.303 0～0.382 5，均達(dá)到了極高程度遺傳分化。ZZ與NH群體、 RC與TJ群體的分化指數(shù)分別為0.178 4、0.171 6，達(dá)到了高程度遺傳分化。ZZ與DL、NH，TJ與NH群體的分化指數(shù)范圍為0.063 1～0.132 3，達(dá)到中等的遺傳分化程度，其余各群體間均為低程度遺傳分化。

表6 基于Cytb基因序列皺紋盤鮑6個(gè)群體間的分化指數(shù)FstTab. 6 The Fst value of six populations in H. discus hannai based on Cytb gene sequence

AMOVA分析結(jié)果見表7，同COⅠ基因分析，將6個(gè)群體的皺紋盤鮑列為同一組群進(jìn)行分析時(shí)，群體間遺傳變異占總變異的14.89%，群體內(nèi)的遺傳變異占總變異的85.11%。結(jié)果表明主要的遺傳變異來(lái)自于群體內(nèi)，群體間的遺傳分化達(dá)到極顯著水平(Fst=0.148 9，P＜0.01)。

表7 基于Cytb基因序列皺紋盤鮑6個(gè)群體分子變異分析(AMOVA)Tab. 7 Analysis of molecular variance (AMOVA) of all the 6 populations of H. discus hannai based on Cytb gene sequence

3 討論

3.1 6個(gè)皺紋盤鮑群體遺傳多樣性

物種的遺傳多樣性是生物多樣性的重要組成部分，是物種生存和發(fā)展的前提，豐富的遺傳多樣性有助于提升其適應(yīng)環(huán)境變化的能力與進(jìn)化潛力[24]。單倍型多樣性指數(shù)與核苷酸多樣性指數(shù)越高，代表物種的遺傳多樣性越豐富。本研究基于Cytb基因序列分析得到的遺傳多樣性參數(shù)較COⅠ基因高，認(rèn)為這是由于Cytb進(jìn)化速率較快所導(dǎo)致，這與柔魚(Ommastrephes bartramii)[15]、波紋唇魚(Cheilinus undulatus)[25]、北方磷蝦(Meganyctiphanes norvegica)[26]等研究的結(jié)果一致。6個(gè)群體皺紋盤鮑具有高單倍型多樣性與高核苷酸多樣性的特征，Grant等[27]認(rèn)為這是因?yàn)槿后w由大而穩(wěn)定的種群構(gòu)成，并擁有較長(zhǎng)進(jìn)化歷史或者是不同遺傳背景的種群二次接觸造成的，本研究認(rèn)為主要由以下2個(gè)原因?qū)е拢孩侔櫦y盤鮑喜生活在水質(zhì)清澈、水流暢通、富含海藻的幾米至幾十米深的巖礁上，其活動(dòng)能力較弱，難以憑自身的移動(dòng)能力與其他地域較遠(yuǎn)的種群進(jìn)行基因交流。而近三十年來(lái)的皺紋盤鮑養(yǎng)殖模式已經(jīng)發(fā)生巨大改變，從早期的“南北接力養(yǎng)殖”到現(xiàn)在的“北鮑南養(yǎng)”，皺紋盤鮑人工養(yǎng)殖的重心已經(jīng)移至南方，這些養(yǎng)殖模式都加強(qiáng)了皺紋盤鮑不同群體間的基因交流，使各群體的遺傳多樣性指數(shù)都處于較高水平。②皺紋盤鮑北鮑南移養(yǎng)殖的成功，進(jìn)一步提升了其環(huán)境適應(yīng)能力，另外皺紋盤鮑性成熟年齡相對(duì)較短(3年)，這些特性可能對(duì)群體的快速生長(zhǎng)、新變異的保存、維持自身的高單倍型多樣性具有一定作用[28]。因此，大規(guī)模的北鮑南養(yǎng)對(duì)我國(guó)皺紋盤鮑的遺傳結(jié)構(gòu)起到優(yōu)化調(diào)整的作用，使該物種遺傳多樣性指數(shù)提高，相應(yīng)的適應(yīng)能力也得到充分鍛煉，這對(duì)種質(zhì)資源的開發(fā)利用具有積極的意義。

通常情況下，野生群體的群體遺傳多樣性指數(shù)會(huì)高于養(yǎng)殖群體，而DQ作為野生群體，其遺傳多樣性指數(shù)比個(gè)別養(yǎng)殖群體低。前人在利用RAPD、AFLP標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行相關(guān)研究時(shí)，也出現(xiàn)了養(yǎng)殖群體遺傳多樣性高于野生群體的情況，推測(cè)是由于兩個(gè)在遺傳上有一定隔離的群體經(jīng)過雜交之后獲得了雜種優(yōu)勢(shì)，使其后代群體的遺傳多樣性升高[5-6]。在同屬于累代養(yǎng)殖的群體中，NH、RC群體的單倍型多樣性與核苷酸多樣性都相對(duì)較低，推測(cè)這兩個(gè)累代養(yǎng)殖群體均發(fā)生了近交衰退，使遺傳多樣性呈下降趨勢(shì)，但是ZZ群體卻仍保持著相對(duì)較高的遺傳多樣性，對(duì)于這種現(xiàn)象，后續(xù)還需以現(xiàn)有的群體樣本通過其他標(biāo)記方法獲得更多的遺傳數(shù)據(jù)，以作進(jìn)一步的遺傳分析。

3.2 群體遺傳結(jié)構(gòu)與遺傳分化

由COⅠ、Cytb基因的群體間Fst值、AMOVA分析結(jié)果，發(fā)現(xiàn)大部分群體間存在顯著遺傳分化現(xiàn)象。由單倍型網(wǎng)絡(luò)圖可知，單倍型之間存在較大的堿基差異，是使得Fst和AMOVA計(jì)算出較高遺傳分化的原因。存在較大差異的單倍型可能代表皺紋盤鮑養(yǎng)殖重心南移前的各個(gè)野生群體。由于鮑的幼體和成體隨海流遷移的能力有限，群體間基因交流少，經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的種群繁衍，群體中的優(yōu)勢(shì)單倍型與其他群體間的堿基差異逐漸增大，最終形成了群體間差異顯著的單倍型。而皺紋盤鮑的大規(guī)模北鮑南移養(yǎng)殖人為地將差異較大的單倍型帶入不同群體中，進(jìn)而形成了本研究中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

RC與其他所有群體間存在較高程度的遺傳分化，除TJ之外，ZZ與其他所有群體均存在中度以上遺傳分化。由于RC群體每年都會(huì)選育性狀優(yōu)良的皺紋盤鮑作為親本繼續(xù)繁育后代，而ZZ群體為洋下群體，長(zhǎng)期定殖于漳州，其遺傳背景較為復(fù)雜且也經(jīng)過長(zhǎng)期的選育，可能RC、ZZ群體與其他養(yǎng)殖群體的選育條件不同，導(dǎo)致群體發(fā)生了顯著的遺傳分化，也從側(cè)面說(shuō)明了人工選育對(duì)皺紋盤鮑不同群體的遺傳分化有重要影響，這與張儀方[29]的研究結(jié)果一致。Li等[8]也證實(shí)了除人工選育外，養(yǎng)殖環(huán)境中的人工選擇和自然選擇也可能改變了養(yǎng)殖群體的總體等位基因組成；另外在育苗過程中采用的親本數(shù)量過少，群體容易產(chǎn)生遺傳漂變，使群體發(fā)生不同程度遺傳分化[30-32]。DL、NH與DQ群體兩兩間為低度分化或者無(wú)分化，推測(cè)這3個(gè)群體的皺紋盤鮑均位于渤海灣內(nèi)，地理位置接近，不同群體間的基因交流相對(duì)比較密切，從而降低了群體間的遺傳分化。

（作者聲明本文無(wú)實(shí)際或潛在的利益沖突）