三磷酸腺苷生物熒光檢測(cè)技術(shù)在清洗消毒效果評(píng)價(jià)中的應(yīng)用及研究進(jìn)展

劉紅娜，楊鵬翾

聯(lián)勤保障部隊(duì)第九八〇醫(yī)院 （河北石家莊 050000）

三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）生物熒光檢測(cè)技術(shù)是熒光素酶在ATP 參與下催化熒光素產(chǎn)生激活態(tài)的氧化熒光素發(fā)出熒光的方法，且熒光強(qiáng)度與ATP 含量成正比，可間接反映微生物或有機(jī)物含量，以相對(duì)光單位值（RLU）間接表示測(cè)試結(jié)果。ATP 存在于所有活的有機(jī)體中，在細(xì)胞體內(nèi)的主要作用是提供能量。研究表明，體細(xì)胞和細(xì)菌中ATP 的含量較為穩(wěn)定，一般體細(xì)胞含10～15 mol ATP，而細(xì)菌則含1 018 mol ATP，檢測(cè)到ATP，即可以推斷有細(xì)胞或細(xì)菌的存在[1]。因此，可采用測(cè)定ATP 生物熒光的方法，定期檢查診療器械、器具和物品的清洗與消毒效果。近年來(lái)，ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)在醫(yī)院各領(lǐng)域中得到了廣泛應(yīng)用，以其快速、簡(jiǎn)便、靈敏的優(yōu)勢(shì)廣泛應(yīng)用于物體表面及醫(yī)療器械清潔效果的評(píng)估。但該方法目前尚缺乏標(biāo)準(zhǔn)化，檢測(cè)結(jié)果差別較大，對(duì)清洗效果尚無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)值（一般由檢測(cè)儀器生產(chǎn)廠家提供）。本研究就ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)在不同類(lèi)別復(fù)用器械清洗效果評(píng)價(jià)、醫(yī)院環(huán)境物體表面消毒效果、手衛(wèi)生監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)行綜述。

1 ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)原理

ATP 檢測(cè)儀（檢測(cè)系統(tǒng)）最初應(yīng)用于食品加工、超市和飲食行業(yè)，檢測(cè)內(nèi)容包括微生物和食品殘?jiān)黐2]。ATP 是一種較好的表面衛(wèi)生指標(biāo)，其普遍存在于活體組織中，表面生物負(fù)載水平的增加會(huì)導(dǎo)致表面ATP 水平的增加。ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)的原理是利用熒光素酶在鎂離子、ATP、氧參與下，催化熒光素氧化脫羧，產(chǎn)生激活態(tài)的氧化熒光素，釋放光子，形成560 nm 的熒光；在裂解液的作用下，細(xì)菌裂解后釋放的ATP 參與上述酶促反應(yīng)，用熒光檢測(cè)儀可定量測(cè)定發(fā)光值，從而獲知ATP含量，進(jìn)而反映細(xì)菌含量[3]。采用生物發(fā)光法可以間接檢測(cè)ATP 值。在理想條件下，發(fā)光量與ATP存在量成正比[4]。

2 ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)在復(fù)用器械清洗效果評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

2.1 常規(guī)復(fù)用手術(shù)器械

醫(yī)療器械滅菌前的清洗質(zhì)量是確保滅菌效果的關(guān)鍵，因此對(duì)復(fù)用手術(shù)器械的清洗效果進(jìn)行檢測(cè)，可提高器械滅菌效果，預(yù)防醫(yī)院感染發(fā)生。Li 等[5]使用ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)2015—2020 年消毒供應(yīng)室871 件復(fù)用手術(shù)器械，主要以清洗后手術(shù)剪刀、止血鉗和其他非管腔器械為主要研究對(duì)象，均勻擦拭每個(gè)器械的表面，包括鉸接接頭和牙齒，發(fā)現(xiàn)ATP 水平穩(wěn)定且可重復(fù)，可用于持續(xù)檢測(cè)復(fù)用手術(shù)器械的清潔度。Rodriguez 等[6]證明了ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)可用于評(píng)估環(huán)境表面和手術(shù)器械的清潔度，并能對(duì)手術(shù)器械清潔度進(jìn)行快速（即15 s）驗(yàn)證；并證實(shí)了ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)在檢測(cè)受污染器械和識(shí)別清洗手術(shù)器械過(guò)程中異常情況的有效性。耿軍輝等[7]采用ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)了5 種不同樣本（大腸桿菌懸液樣本、金黃色葡萄球菌懸液樣本、白色念珠菌懸液樣本、鮮羊血樣本、ATP 標(biāo)準(zhǔn)液）的相對(duì)光度值（RLU）水平，并使用ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)了手術(shù)器械清洗的不合格率，與顯微鏡觀察法比較，ATP 生物熒光檢測(cè)具有較高的靈敏度，手術(shù)器械不合格率較高，與既往研究結(jié)論一致[8-9]。夏甜等[10]通過(guò)對(duì)比眼科精密器械清洗工作應(yīng)用ATP生物熒光檢測(cè)技術(shù)前后的清洗質(zhì)量發(fā)現(xiàn)，ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)可及時(shí)、準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)器械清洗質(zhì)量，且在此基礎(chǔ)上及時(shí)觀察器械清洗效果，結(jié)合結(jié)果反饋進(jìn)行綜合處理，進(jìn)而有效提高精密器械清洗質(zhì)量和清洗合格率。因此，ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)可作為手術(shù)器械清洗后檢測(cè)清洗質(zhì)量的主要方法。

2.2 內(nèi)鏡

內(nèi)鏡按照成像構(gòu)造分類(lèi)可分為硬式內(nèi)鏡、軟式內(nèi)鏡和電子內(nèi)鏡3 類(lèi)。由于內(nèi)鏡器械結(jié)構(gòu)精密、復(fù)雜，若清洗不徹底極易導(dǎo)致手術(shù)部位發(fā)生感染，因此對(duì)內(nèi)鏡器械清洗環(huán)節(jié)的質(zhì)量檢測(cè)尤為重要。楊凡等[11]使用ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)和菌落計(jì)數(shù)法對(duì)氣管鏡的清洗質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)可作為軟式內(nèi)鏡清洗質(zhì)量的檢測(cè)方法。劉嘉等[12]在研究中提出ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)可反映胃腸鏡清洗消毒效果，建議衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)規(guī)范使用ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)。常淑瑩等[13]通過(guò)回收硬式內(nèi)鏡器械988 套（實(shí)驗(yàn)組494 套，對(duì)照組494 套）并采用3 種方法（ATP 生物熒光檢測(cè)法、帶光源放大鏡觀察法和細(xì)菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)法）分別對(duì)預(yù)沖洗前、酶液浸泡刷洗后、干燥柜干燥后的內(nèi)鏡器械進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)ATP 生物熒光檢測(cè)法簡(jiǎn)單、快捷、可自動(dòng)化操作、結(jié)果可靠，可用于硬式內(nèi)鏡清洗效果評(píng)價(jià)檢測(cè)。韓晶[14]用ATP 生物熒光檢測(cè)法和細(xì)菌培養(yǎng)對(duì)硬式內(nèi)鏡表面及管腔內(nèi)細(xì)菌數(shù)量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示無(wú)差異，說(shuō)明ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)對(duì)硬式內(nèi)鏡內(nèi)外表面的檢測(cè)結(jié)果較為可靠，可作為硬式內(nèi)鏡清洗質(zhì)量的初篩方法，與丁歡等[15]的研究結(jié)果一致。因此，可使用ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)作為內(nèi)鏡清洗效果檢測(cè)方法，并可以取代微生物檢測(cè)[16]。

2.3 達(dá)芬奇機(jī)器人手術(shù)器械

達(dá)芬奇機(jī)器人結(jié)構(gòu)復(fù)雜、價(jià)格昂貴，器械關(guān)節(jié)端頭凹凸不平易有組織、血漬、污漬等殘留物，且器械不可拆卸，清洗難度較大。達(dá)芬奇機(jī)器人有自動(dòng)識(shí)別系統(tǒng)，若在自動(dòng)識(shí)別機(jī)械臂清洗不徹底后將會(huì)不予安裝使用。因此，對(duì)達(dá)芬奇機(jī)器人的機(jī)械臂清洗質(zhì)量進(jìn)行有效檢驗(yàn)非常有必要[17]。史玲玲等[18]采用目測(cè)法和ATP 生物熒光檢測(cè)法評(píng)估減壓沸騰技術(shù)清洗達(dá)芬奇機(jī)器人機(jī)械臂的清洗質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)目測(cè)法和ATP 生物熒光檢測(cè)法檢測(cè)結(jié)果均無(wú)差異。莫軍軍等[19]發(fā)現(xiàn)ATP 生物熒光法檢測(cè)達(dá)芬奇機(jī)器人機(jī)械臂清洗效果較10 倍放大鏡目測(cè)法更客觀、更有效，與史玲玲等[20]研究結(jié)果一致。李曉林[21]采用10 倍放大鏡目測(cè)法、殘留蛋白測(cè)定法及ATP 生物熒光法檢測(cè)60 件達(dá)芬奇機(jī)器人機(jī)械臂和45 件穿刺套管的清洗質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)ATP 生物熒光法和殘留蛋白測(cè)定法檢測(cè)效果優(yōu)于目測(cè)法，且ATP 生物熒光檢測(cè)較殘留蛋白測(cè)定法更能反映器械的清洗質(zhì)量。因此，ATP 生物熒光法可以作為檢測(cè)達(dá)芬奇機(jī)器人手術(shù)器械清洗效果的有效方法。

2.4 腔鏡手術(shù)器械

腹腔鏡手術(shù)相對(duì)于開(kāi)腹手術(shù)具有創(chuàng)傷小、恢復(fù)快等優(yōu)勢(shì)，被廣泛應(yīng)用于外科領(lǐng)域。腹腔鏡器械精密且復(fù)雜，清洗難度較大，若清洗不當(dāng)可引發(fā)醫(yī)院感染，還可導(dǎo)致器械內(nèi)腔堵塞、關(guān)節(jié)失靈，影響其使用壽命。胡玉蕾等[22]采用目測(cè)法、帶光源放大鏡目測(cè)法和ATP 生物熒光檢測(cè)法檢測(cè)腔鏡器械（包括直剪刀、分離鉗、穿刺器、轉(zhuǎn)換器）的清洗效果，發(fā)現(xiàn)ATP 生物熒光檢測(cè)法可更準(zhǔn)確評(píng)價(jià)腔鏡器械的清洗質(zhì)量。呂芳等[23]發(fā)現(xiàn)ATP 生物熒光檢測(cè)法具有檢測(cè)快速、簡(jiǎn)單、結(jié)果相對(duì)可靠的特點(diǎn)，適用于腔鏡器械清洗效果的檢測(cè)。

2.5 ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)在醫(yī)院環(huán)境評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

醫(yī)院環(huán)境表面衛(wèi)生清潔質(zhì)量與醫(yī)院感染的發(fā)生具有一定相關(guān)性。對(duì)環(huán)境表面進(jìn)行有效清潔和消毒是預(yù)防醫(yī)院感染的重要措施之一[24-25]。Deshpande 等[26]發(fā)現(xiàn)ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)可在ICU 環(huán)境檢測(cè)中提供關(guān)于表面清潔度的快速反饋。Tr?an 等[27]發(fā)現(xiàn)ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)適用于評(píng)估醫(yī)院環(huán)境清潔和消毒效果，且在檢測(cè)不清潔環(huán)境方面優(yōu)于傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)法。ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)具有檢測(cè)時(shí)間短、使用簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，適用于醫(yī)院高頻接觸物體表面的清潔、消毒效果評(píng)價(jià)[28-30]。

3 小結(jié)與展望

ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)簡(jiǎn)便快捷、靈敏度高，較其他微生物檢測(cè)技術(shù)優(yōu)勢(shì)明顯，被廣泛應(yīng)用于各領(lǐng)域。但ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)存在以下缺陷：（1）易受外界環(huán)境干擾因素影響；（2）不同廠家的ATP 檢測(cè)設(shè)備具有不同的靈敏度，提供的RLU標(biāo)準(zhǔn)值不同；（3）只能檢測(cè)含有ATP 的生物，無(wú)法檢測(cè)不產(chǎn)生ATP 的微生物（如病毒），可導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此，在ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用中，需盡可能排除外界干擾因素，提升識(shí)別微生物特異性的能力。

綜上所述，ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)是目前評(píng)價(jià)醫(yī)療器械清洗質(zhì)量的有效方法之一。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，醫(yī)療設(shè)備監(jiān)管部門(mén)也需不斷完善政策及使用標(biāo)準(zhǔn)，以期將ATP 生物熒光檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用到更加廣泛的領(lǐng)域。