竹節(jié)伸筋飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

歐巧玲，王竹鑫，周 宜，林麗美，包 敏，胡冠羽

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410005；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410208；3.株洲市食品藥品檢驗(yàn)所，湖南 株洲 412000）

竹節(jié)伸筋為百合科植物蜘蛛抱蛋Aspidistra elatiorBlume的干燥根莖，具有活血止痛、清肺止咳、利尿通淋等功效，常用于跌打損傷、風(fēng)濕痹痛等疾病的治療[1-2]?；瘜W(xué)成分研究[3-5]表明竹節(jié)伸筋主要含有甾體皂苷。藥理活性研究顯示其具有抗菌[6-7]、抗腫瘤[8-9]、抗炎[10]和止咳[11]等藥理作用。

竹節(jié)伸筋主要收錄于地方標(biāo)準(zhǔn)[1，12]。另外，也有文獻(xiàn)報(bào)道其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[3]。這些都為竹節(jié)伸筋質(zhì)量評(píng)判提供了法、理依據(jù)。但2010年版《湖南省中藥飲片炮制規(guī)范》中，竹節(jié)伸筋只有性狀鑒別、橫截面鑒別、理化鑒別等評(píng)判項(xiàng)，不足以全面地評(píng)判竹節(jié)伸筋飲片的質(zhì)量，有必要對(duì)其標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行提升研究[13-14]。

因此，在湖南省市場(chǎng)監(jiān)督管理局的支持下，本實(shí)驗(yàn)組啟動(dòng)了關(guān)于2010版《湖南省中藥飲片炮制規(guī)范》中竹節(jié)伸筋飲片標(biāo)準(zhǔn)提升項(xiàng)目。根據(jù)項(xiàng)目要求進(jìn)行了性狀鑒別、粉末鑒別、橫截面鑒別、理化鑒別，以及水分、總灰分、醇溶性浸出物含量測(cè)定等項(xiàng)目的研究，旨在為竹節(jié)伸筋飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 電子天平（XSE205 DV，梅特勒托利多儀器有限公司），電子顯微鏡（BX-61，奧林巴斯有限公司），電熱恒溫干燥箱（DHG-9147A，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），馬弗爐（SX-4-10，北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）。

1.2 試劑 乙腈（色譜級(jí)，批號(hào)：TA3A1H，霍尼韋爾有限公司）、甲醇（色譜級(jí)，批號(hào)：W9PG1H，霍尼韋爾有限公司），五水合硫酸銅（分析級(jí)，批號(hào)：20170426，國(guó)藥控股股份有限公司）、四水合酒石酸鉀鈉（分析級(jí)，批號(hào)：20190815，國(guó)藥控股股份有限公司）和氫氧化鈉（分析級(jí)，批號(hào)：20200218，國(guó)藥控股股份有限公司）。

1.3 飲片 從不同生產(chǎn)企業(yè)收集竹節(jié)伸筋飲片共計(jì)15批，樣品信息如表1所示。所有批次飲片經(jīng)株洲市食品藥品檢驗(yàn)所胡冠宇主管藥師鑒定為百合科植物蜘蛛抱蛋Aspidistra elatiorBlume的干燥根莖。樣本存放于株洲市食品藥品檢驗(yàn)所中藥樣品室。

表1 竹節(jié)伸筋飲片信息

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀鑒別

2.1.1 鑒別方法 取竹節(jié)伸筋飲片，通過(guò)眼看、口嘗、鼻嗅、手摸等方法從形狀、規(guī)格、大小、表面或切面顏色、特征、質(zhì)地、氣味等方面對(duì)其進(jìn)行鑒別。并將其按不同角度擺放于藍(lán)色膠片上，利用數(shù)碼相機(jī)對(duì)其進(jìn)行拍攝，獲得該樣品最佳數(shù)碼圖片。

2.1.2 鑒別結(jié)果 經(jīng)鑒別，確定其主要性狀特征為：本品呈圓柱形或不規(guī)則形的段。外表面灰黃色或黃棕色，有疏密不勻的環(huán)節(jié)和縱溝。根莖一面的節(jié)上殘留未除盡的須根或點(diǎn)狀根痕。質(zhì)硬，切面黃白色，纖維性，氣微，微甜而后苦。（見(jiàn)圖1）

2.2 橫截面鑒別

2.2.1 鑒別方法 取大小適中竹節(jié)伸筋飲片，置于裝有水的培養(yǎng)皿中，浸泡數(shù)小時(shí)，軟化后，用泡沫夾住，刀片進(jìn)行徒手切削，用毛筆蘸取粘在刀片上的薄片，置于水中伸展，然后用毛筆蘸取厚度合適的薄切片置于載玻片上，加清水1~2滴，蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去多余清水，置于顯微鏡下觀察。

2.2.2 鑒別結(jié)果 通過(guò)觀察，確定其主要橫截面顯微特征為：表皮為一列類(lèi)方形的薄壁細(xì)胞（見(jiàn)圖2a、圖2b），外被角質(zhì)層。皮層由十余列類(lèi)圓形的薄壁細(xì)胞組成（見(jiàn)圖2a），近中部有少數(shù)纖維束散在，纖維壁厚，微木化，稀有葉跡維管束。內(nèi)皮層細(xì)胞壁呈“ U”字形增厚（見(jiàn)圖2c），木化。中柱鞘細(xì)胞1列，木化。維管束多為周木型，具纖維鞘。薄壁細(xì)胞含草酸鈣結(jié)晶（見(jiàn)圖2d）。

圖2 竹節(jié)伸筋飲片橫截面顯微鑒別

2.3 粉末鑒別

2.3.1 鑒別方法 取細(xì)粉（過(guò)4號(hào)篩）少許放在載玻片上，加1～2滴水合氯醛，置于酒精燈上透化至近無(wú)色，取下，滴1滴甘油裝片，用吸水紙吸去多余甘油，置于顯微鏡下觀察并拍照。

2.3.2 鑒別結(jié)果 通過(guò)觀察，確定其主要粉末顯微特征為：黃棕色。薄壁細(xì)胞黃色或近無(wú)色，類(lèi)方形，長(zhǎng)方形或不規(guī)則形，直徑20～150 μm，內(nèi)含草酸鈣針晶。導(dǎo)管為網(wǎng)紋，直徑20～70 μm。非腺毛3～5細(xì)胞，長(zhǎng)150～250 μm，直徑約20 μm。（見(jiàn)圖3）

圖3 竹節(jié)伸筋飲片粉末顯微鑒別

2.4 理化鑒別

2.4.1 鑒別方法 取本品粉末（過(guò)4號(hào)篩）2 g，加水15 mL，浸漬1 h，濾過(guò)。取濾液1 mL，置帶塞試管中，強(qiáng)力振搖后觀察，放置10 min后再觀察。整個(gè)過(guò)程標(biāo)記為試驗(yàn)a。再取濾液2 mL，加稀鹽酸1 mL，置沸水浴中加熱10 min，冷后調(diào)至中性，加入堿性酒石酸銅試液4～5滴，再置沸水中加熱數(shù)分鐘，取出靜置數(shù)分鐘，觀察。整個(gè)過(guò)程標(biāo)記為試驗(yàn)b。

2.4.2 鑒別結(jié)果 經(jīng)處理后，試驗(yàn)a續(xù)濾液產(chǎn)生大量蜂窩狀泡沫，放置10 min泡沫無(wú)明顯消失（見(jiàn)圖4a）；試驗(yàn)b續(xù)濾液產(chǎn)生紅棕色沉淀（見(jiàn)圖4b）。

圖4 竹節(jié)伸筋飲片理化鑒別

2.5 水分、總灰分、醇溶性浸出物測(cè)定

2.5.1 測(cè)定方法 按照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則0832第二法，測(cè)定竹節(jié)伸筋飲片的水分[15]；按照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則2302，測(cè)定竹節(jié)伸筋飲片的總灰分[15]；按照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則2201，測(cè)定竹節(jié)伸筋飲片的醇溶性浸出物[15]。（見(jiàn)表2）

表2 葉下珠飲片中水分、總灰分及醇溶性浸出物的含量（n=2）

2.5.2 測(cè)定結(jié)果 經(jīng)測(cè)定，竹節(jié)伸筋飲片中水分、總灰分及醇溶性浸出物百分含量如表2所示。

3 討論與結(jié)論

3.1 性狀鑒別 本項(xiàng)目共收集15批次樣本，經(jīng)鑒別，序號(hào)為1~12的12批次為主根莖（見(jiàn)圖1），序號(hào)為13~15的3批次含主根莖較少，含大量須根，且灰屑較多。后3批次樣本與原標(biāo)準(zhǔn)[1]和已發(fā)表文獻(xiàn)[3]等的描述均不符，因此，不納入本次標(biāo)準(zhǔn)修訂所述范疇。

3.2 顯微鑒別 湖南省地方標(biāo)準(zhǔn)[1，12]和左盛奇等[3]發(fā)表的竹節(jié)伸筋質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)論文記錄了竹節(jié)伸筋的顯微特征，經(jīng)比較，和本研究所述大多相似或相同，但仍然存在一些區(qū)別。

在橫截面鑒別中，本研究發(fā)現(xiàn)竹節(jié)伸筋外皮層為1列外被角質(zhì)層的類(lèi)方形薄壁細(xì)胞，而左盛奇等[3]描述為1~2列。另外，湖南省地方標(biāo)準(zhǔn)[1]將維管束特征描述為“周木型及外韌型”，而本研究只發(fā)現(xiàn)周木型，未發(fā)現(xiàn)外韌型。

在粉末鑒別中，左盛奇等[3]描述薄壁細(xì)胞尺寸為20~240 μm，但是本研究發(fā)現(xiàn)為20~150 μm。另外，左盛奇等[3]描述導(dǎo)管為梯紋，而本研究發(fā)現(xiàn)為網(wǎng)紋。

3.3 水分、總灰分、醇溶性浸出物結(jié)果分析和限量值推薦 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，竹節(jié)伸筋飲片的水分含量在5.66%～9.92%，平均值為7.77%。左盛奇等[3]測(cè)定的水分含量在12.12%～12.86%，平均值為12.75%。兩者存在一定差異。而《湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》[12]規(guī)定限量值范圍為不得過(guò)12%，左盛奇等[3]根據(jù)不超過(guò)上限20%的原則推薦為不得過(guò)15%，本研究則沿用原省級(jí)標(biāo)準(zhǔn)推薦為不得過(guò)12%。

竹節(jié)伸筋飲片的總灰分含量在4.46%～5.41%，平均值為4.75%。左盛奇等[3]測(cè)定的總灰分含量在5.98%～6.67%，平均值為6.43%。相對(duì)本結(jié)果，整體偏高。左盛奇等[3]根據(jù)不超過(guò)上限的20%，推薦為8%。本研究同樣根據(jù)不超過(guò)上限20%的原則推薦為7%。

竹節(jié)伸筋飲片的醇浸出物含量在30.03%～56.29%，平均值為39.26%。左盛奇等[3]測(cè)定的醇浸出物含量在4.48%～5.44%，平均值為4.86%。兩者差異巨大。其原因可能與樣品來(lái)源相關(guān)。左盛奇等[3]的樣品為自采野生原藥材，本研究為基地種植后經(jīng)炮制加工的飲片。而人工種植品種更為肥厚，糖分等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)累積量大，浸出物含量高。其次，自采藥材非浸出物含總灰分和水分含量等占比相對(duì)飲片高，本研究結(jié)果可說(shuō)明這一點(diǎn)。綜上，鑒于左盛奇等[3]研究結(jié)果對(duì)本研究不具有參考意義，本研究另根據(jù)不低于平均值30%的原則，推薦為不低于28%。

3.4 總結(jié) 綜上所述，筆者在原2010年版《湖南省中藥飲片炮制規(guī)范》[1]上，增加了粉末鑒別，水分、總灰分及醇溶性浸出物測(cè)定等，修訂了橫截面鑒別。在原標(biāo)準(zhǔn)上有較大提升，能夠更為準(zhǔn)確、全面地控制竹節(jié)伸筋飲片的質(zhì)量。