王建坤劉曉超劉鑫姜莉李隆旭邱占奎王澤鴻馮黎霞付海濱

(1.沈陽海關(guān)，遼寧 沈陽 110179；2.大連海關(guān)，遼寧 大連 116001；3.廣州海關(guān)技術(shù)中心，廣東 廣州 5106236；4.沈陽海關(guān)技術(shù)中心，遼寧 沈陽 110016)

番茄褐色皺果病毒Tomato brown rugose fruit virus(ToBRFV)主要為害番茄、辣椒等茄科作物[1]，2014年在約旦第1次鑒定出來[2]，目前全世界53個(gè)國(guó)家和地區(qū)已有報(bào)道[3]。本文對(duì)番茄褐色皺果病毒的發(fā)生和危害、主要種子貿(mào)易國(guó)家番茄褐色皺果病毒檢疫措施進(jìn)行綜述，并提出防治和脫毒處理建議。

1 發(fā)生與危害

番茄褐色皺果病毒(ToBRFV)分類學(xué)上歸于帚狀病毒科(Virgaviridae)、煙草花葉病毒屬(Tobamovirus)，主要寄主為番茄和辣椒，還可侵染茄子、龍葵、煙草、藜麥等。目前已報(bào)道病毒發(fā)生的國(guó)家和地區(qū)包括墨西哥、美國(guó)、比利時(shí)、法國(guó)、荷蘭、以色列、德國(guó)、土耳其、約旦、希臘、英國(guó)、巴勒斯坦、意大利、西班牙、中國(guó)(已根除)等[3，4]。

番茄褐色皺果病毒主要為害寄主植物的葉片、莖稈、花萼和果實(shí)等部位。病毒入侵后，嫩葉、頂芽會(huì)出現(xiàn)花葉的癥狀；葉片會(huì)出現(xiàn)變窄、畸形的癥狀；莖稈和萼片會(huì)顯露壞死條斑；花萼早期會(huì)產(chǎn)生著色、褐變，后期極易出現(xiàn)干枯癥狀；果實(shí)會(huì)出現(xiàn)黃色斑點(diǎn)、斑塊，后期變成褐色，果實(shí)可變形，直至壞死，對(duì)果實(shí)的品質(zhì)和產(chǎn)量有極大影響，該病毒能夠隨植物種子進(jìn)行遠(yuǎn)距離傳播[5]，已被列入我國(guó)的進(jìn)境植物檢疫性有害生物名錄[6]。

注：圖片來源于CABI，2024。

注：圖片來源于CABI，2022。

2 主要種子貿(mào)易國(guó)家和地區(qū)檢疫措施

番茄褐色皺果病毒擴(kuò)散迅速，已經(jīng)引起國(guó)際間的高度重視，包括我國(guó)在內(nèi)的歐盟、美國(guó)、日本、韓國(guó)、澳大利亞、新西蘭、土耳其、俄羅斯等多個(gè)國(guó)家和地區(qū)都相繼采取緊急措施，防止其傳入。

2.1 國(guó)際檢疫措施

《國(guó)際植物保護(hù)公約》要求，國(guó)家官方植物保護(hù)組織必須監(jiān)測(cè)植株生長(zhǎng)情況，準(zhǔn)確了解當(dāng)?shù)刂仓晟L(zhǎng)各個(gè)階段的疫情情況，強(qiáng)化疫情監(jiān)測(cè)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)可疑情況的，及時(shí)采樣鑒定。同時(shí)，國(guó)家官方植物保護(hù)組織要及時(shí)報(bào)告有害生物的發(fā)生以及擴(kuò)散情況，對(duì)出口的植物、植物產(chǎn)品進(jìn)行檢疫，發(fā)放符合目的地國(guó)家或者地區(qū)要求的植物檢疫證書，以防止其通過國(guó)際間的運(yùn)輸進(jìn)行傳播。為防止有害生物傳入和擴(kuò)散，各國(guó)可按照適用的法律、法規(guī)及其他相關(guān)規(guī)定，對(duì)植物、植物產(chǎn)品及其他檢疫物的輸入指定和采取植物檢疫措施，如檢查、檢疫處理或者禁止入境。《種子的國(guó)際運(yùn)輸》(國(guó)際植物檢疫措施標(biāo)準(zhǔn)第38號(hào))指出，種子與其他的植物繁殖材料一樣，存在傳帶有害生物的風(fēng)險(xiǎn)，當(dāng)種子被引進(jìn)到一個(gè)新的環(huán)境中，其傳帶有害生物，并導(dǎo)致有害生物定殖和擴(kuò)散可能性很高。國(guó)家官方植物保護(hù)組織應(yīng)當(dāng)施行與有害生物風(fēng)險(xiǎn)結(jié)果相符合的植物檢疫措施，以防止檢疫性有害生物隨種子進(jìn)行傳播和擴(kuò)散。要按照國(guó)際植物檢疫措施標(biāo)準(zhǔn)《有害生物風(fēng)險(xiǎn)分析框架》(ISPM 2)、《檢疫性有害生物風(fēng)險(xiǎn)分析》(ISPM 11)和《限定的非檢疫性有害生物風(fēng)險(xiǎn)分析》(ISPM 21)，針對(duì)性地開展進(jìn)出境種子攜帶有害生物的風(fēng)險(xiǎn)分析，以及確定后續(xù)要采取的植物檢疫措施。植物檢疫措施可以施用于作物生長(zhǎng)及種子生產(chǎn)、加工過程中的各個(gè)時(shí)期。各項(xiàng)植物檢疫措施可以單獨(dú)或聯(lián)合施行，以降低有害生物風(fēng)險(xiǎn)傳播風(fēng)險(xiǎn)[7]。

2.2 我國(guó)檢疫措施

《中華人民共和國(guó)進(jìn)出境動(dòng)植物檢疫法》要求防止植物病毒等有害生物傳入、傳出國(guó)境[8]。海關(guān)總署于2021年發(fā)布了《關(guān)于防止番茄褐色皺果病毒隨番茄和辣椒屬種子傳入的公告》，要求從種植期間就要加強(qiáng)對(duì)番茄、辣椒種子的管理控制。入境種子需符合以下3種情況，并在植物檢疫證書上予以注明：種子輸出國(guó)家或地區(qū)沒有該有害生物發(fā)生；種子輸出國(guó)家或地區(qū)部分地區(qū)雖然發(fā)生植物疫情，但按照第4號(hào)國(guó)際植物檢疫措施標(biāo)準(zhǔn)《建立非疫區(qū)的要求》建立了該有害生物的非疫區(qū)，且出口的種子產(chǎn)自非疫區(qū)；輸出國(guó)家或地區(qū)發(fā)生植物疫情，并且也沒有按要求建立非疫區(qū)，國(guó)家植物保護(hù)組織在種植期間實(shí)施田間監(jiān)測(cè)，確認(rèn)在種植期間沒有疫情發(fā)生，并在出口前對(duì)該批種子抽樣，使用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)方法或?qū)崟r(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)方法進(jìn)行檢測(cè)，確認(rèn)不帶番茄褐色皺果病毒[1]。

2.3 歐盟檢疫措施

歐盟委員會(huì)對(duì)該有害生物高度重視，其下屬的衛(wèi)生與食品安全總司分別于2020年、2021年、2023年下達(dá)了“EU第2020/1191”“EU第2021/74”和“EU第2023/1032”共3個(gè)歐盟指令，發(fā)布并2次修訂了防止疫情傳入并擴(kuò)散的檢疫措施，主要涉及進(jìn)口要求和檢疫措施，將番茄褐色皺果病毒列入歐洲和地中海國(guó)家植物保護(hù)組織A2類檢疫性有害生物名錄，進(jìn)行嚴(yán)格管控，要求對(duì)從歐盟成員國(guó)以外的國(guó)家或地區(qū)入境的番茄和辣椒種子，應(yīng)由主管部門或主管部門正式監(jiān)督下的專業(yè)機(jī)構(gòu)對(duì)種子進(jìn)行取樣，并檢測(cè)是否攜帶番茄褐色皺果病毒(ToBRFV)。取樣按照《貨物抽樣方法》(國(guó)際植物檢疫措施標(biāo)準(zhǔn)第31號(hào))執(zhí)行，≤1000粒種子取樣量為28粒種子、1001～3000粒種子取樣量為58粒種子、3001～30000粒種子取樣量為284粒種子、>30000粒種子取樣量為1000粒種子，針對(duì)種子樣品，歐盟認(rèn)可的檢測(cè)方法只有實(shí)時(shí)熒光RT-PCR方法，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法和常規(guī)RT-PCR不允許用于種子中番茄褐色皺果病毒的檢測(cè)。同時(shí)，要求在植物檢疫證書上附加聲明：種子的母本植株是在根據(jù)適當(dāng)時(shí)間進(jìn)行的番茄褐色皺果病毒官方檢查確認(rèn)已知未發(fā)生番茄褐色皺果病毒的生產(chǎn)基地生產(chǎn)，種子或母本植株按照(EU)2023/1032要求，進(jìn)行官方取樣和檢測(cè)，不攜帶番茄褐色皺果病毒，并注明母本植株生產(chǎn)基地、注冊(cè)號(hào)。對(duì)于源自第三國(guó)的對(duì)番茄褐色皺果病毒具有抗性的番茄種子、辣椒種子，在植物檢疫證書中要進(jìn)行聲明。

2.4 美國(guó)檢疫措施

美國(guó)農(nóng)業(yè)部動(dòng)植物檢疫局(APHIS)于2019年發(fā)布了控制番茄和辣椒2種植物進(jìn)口措施的聯(lián)邦法令，認(rèn)為番茄和辣椒是ToBRFV的2種主要寄主，以上2種作物的種子是番茄褐色皺果病毒傳入的高風(fēng)險(xiǎn)途徑，鑒于種子生產(chǎn)的全球性和種子的跨國(guó)運(yùn)輸，其分布范圍可能比報(bào)道的還要大，有必要采取措施限制番茄褐色皺紋果病毒(ToBRFV)的主要寄主植物番茄和辣椒的種子進(jìn)口。根據(jù)美國(guó)農(nóng)業(yè)部動(dòng)植物檢疫局(APHIS)的要求，輸往美國(guó)的種子不能帶有該有害生物，要求種植輸往美國(guó)的番茄、辣椒種子的地區(qū)不能發(fā)生疫情，對(duì)于輸往美國(guó)的種子，要求在植物檢疫證書上附加聲明：該批番茄種子和/或辣椒種子的具體產(chǎn)地，該地區(qū)經(jīng)過國(guó)家植物保護(hù)機(jī)構(gòu)認(rèn)定沒有番茄褐色皺紋果病毒；或該批番茄和/或辣椒種子的代表性樣品經(jīng)過官方檢測(cè)，不攜帶番茄褐色皺果病毒[10]。

2.5 日本檢疫措施

日本農(nóng)林水產(chǎn)省(MAFF)對(duì)《植物保護(hù)法實(shí)施條例》附表2-2第36項(xiàng)規(guī)定的現(xiàn)行措施進(jìn)行修改，對(duì)于來自所有國(guó)家和地區(qū)的辣椒和番茄種子，包括一般貿(mào)易、寄遞和個(gè)人攜帶渠道，都要進(jìn)行番茄褐色皺果病毒檢測(cè)，并將結(jié)果體現(xiàn)到植物檢疫證書中。檢測(cè)方法：在收獲期，隨機(jī)從番茄或辣椒植株中抽取樣本，重點(diǎn)為有疑似癥狀的植株，通過常規(guī)逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)等方法進(jìn)行檢測(cè)，證明不帶有番茄褐色皺果病毒；在出口前，采用國(guó)際種子聯(lián)盟協(xié)議建議的方法，采取實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)方法進(jìn)行檢測(cè)，證明不帶有番茄褐色皺果病毒。取樣數(shù)量：根據(jù)國(guó)際種子檢測(cè)協(xié)會(huì)(ISTA)的要求，隨機(jī)從批次中抽取樣品，種子粒數(shù)≥46000粒時(shí)，取樣4600粒進(jìn)行病毒檢測(cè)，種子數(shù)量<46000粒，抽采10%的種子進(jìn)行檢測(cè)。經(jīng)檢測(cè)證明不帶有番茄褐色皺果病毒，輸出國(guó)國(guó)家植物保護(hù)組織需要在植物檢疫證書上附加聲明：該批種子符合《植物保護(hù)法實(shí)施條例》(MAFF第73/1950號(hào)法令)附表2-2第36項(xiàng)(親本植物適用的檢測(cè)方法)或(種子實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法)[11]。

2.6 韓國(guó)檢疫措施

韓國(guó)農(nóng)林、畜產(chǎn)、食品部(MAFRA)對(duì)進(jìn)出境種子攜帶番茄褐色皺紋果病毒(ToBRFV)進(jìn)行了有害生物風(fēng)險(xiǎn)分析，增補(bǔ)修訂了檢疫措施。對(duì)來自中國(guó)、土耳其、法國(guó)、德國(guó)、荷蘭等35個(gè)國(guó)家和地區(qū)的辣椒屬和番茄種子，要求進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，具體要求為種子出口前進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)樣品量為4600粒以上，子樣品不得少于400粒。對(duì)于總量在46000粒以下的小批量種子，抽檢的樣品應(yīng)不得低于總量的10%。同時(shí)在植物檢疫證書上附加聲明：出口前通過PCR檢測(cè)證明該種子未感染番茄褐色皺果病毒。后期又在重點(diǎn)關(guān)注國(guó)家名單中增加阿根廷、俄羅斯等6個(gè)國(guó)家和地區(qū)[12]。

2.7 其他主要種子貿(mào)易國(guó)家檢疫措施

澳大利亞要求每批次入境的番茄和辣椒種子采用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)方法檢測(cè)種子是否攜帶番茄褐色皺果病毒，相關(guān)情況需要植物檢疫證書上予以明確，以降低番茄褐色皺果病毒有可能造成的生物安全風(fēng)險(xiǎn)。新西蘭要求進(jìn)境番茄和辣椒種子都要自番茄褐色皺果病毒的非疫區(qū)或非疫產(chǎn)地，或最少抽取3000粒樣品采用官方認(rèn)可的方法進(jìn)行檢測(cè)，不得檢出發(fā)現(xiàn)該病毒。土耳其對(duì)德國(guó)、墨西哥、約旦、以色列、意大利等國(guó)家和地區(qū)輸土耳其的番茄與辣椒種子提出了明確的檢疫措施，要求不得攜帶番茄褐色皺果病毒，相關(guān)種子必須經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)方法檢測(cè)，番茄褐色皺果病毒不得檢出，植物檢疫證書中必須注明以上情況，方可入境。俄羅斯對(duì)所有入境番茄和辣椒的果實(shí)和種子進(jìn)行植物病毒檢測(cè)，重點(diǎn)為番茄褐色皺果病毒。阿根廷鑒于番茄褐色皺果病毒(ToBRFV)極有可能隨種子國(guó)際貿(mào)易傳入，將該病毒列入監(jiān)管有害生物名錄，并將該病毒的發(fā)生國(guó)家列為重點(diǎn)關(guān)注國(guó)家，提出具體的植物檢疫要求，要求進(jìn)境番茄和辣椒種子不得帶有番茄褐色皺果病毒[13]。

3 對(duì)策建議

我國(guó)是番茄、辣椒等農(nóng)作物種子制種大國(guó)，也是番茄和辣椒的主要生產(chǎn)國(guó)，每年番茄、辣椒種子進(jìn)出口量極大，作物播種面積廣泛，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)安全面臨嚴(yán)重威脅。鑒于機(jī)械傳播是番茄褐色皺果病毒最主要的傳播方式[14]，因此，建議防控病毒的首要任務(wù)是加強(qiáng)檢疫與田間管理，加強(qiáng)進(jìn)出境檢疫，切斷傳播途徑，并配合脫毒技術(shù)研究。

3.1 加強(qiáng)田間管理

番茄褐色皺紋果病毒可通過汁液摩擦、移栽、修剪、噴藥等農(nóng)事操作傳播，加強(qiáng)田間管理舉措尤為重要。確保使用的種子無毒，進(jìn)行定期土壤消毒，發(fā)現(xiàn)受感染或疑似感染植株時(shí)，建議及時(shí)清除。在農(nóng)事操作前應(yīng)洗手并消毒，佩戴一次性手套，操作過程中定時(shí)對(duì)人員和工具進(jìn)行消毒。污染的設(shè)備可用家用漂白劑(0.5%次氯酸鈉)、2%的過硫酸氫鉀三鹽復(fù)合物、10%磷酸三鈉或者20%脫脂奶粉進(jìn)行消毒[14]。

3.2 加強(qiáng)進(jìn)出境檢疫

對(duì)進(jìn)境種子及其證書進(jìn)行嚴(yán)格檢疫和審核，檢出番茄褐色皺果病毒或發(fā)現(xiàn)證書不符合要求的，依據(jù)中華人民共和國(guó)動(dòng)植物檢疫法做退運(yùn)或銷毀處理[1]。

3.3 加強(qiáng)疫情和信息監(jiān)測(cè)

加強(qiáng)外繁制種等種子基地的疫情監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)問題，及早根除。通過國(guó)外官方植物保護(hù)組織網(wǎng)站、學(xué)術(shù)期刊等渠道，搜集國(guó)外番茄褐色皺紋果病發(fā)生信息和檢疫政策變化，

3.4 加強(qiáng)脫毒處理技術(shù)的研究

脫毒技術(shù)的研究，有助于防止番茄褐色皺果病毒隨進(jìn)出口種子傳入、傳出，促進(jìn)我國(guó)種子的出口和優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源的引入，保護(hù)我國(guó)生態(tài)安全。相關(guān)國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)，使用磷酸三鈉和鹽酸處理帶毒種子，能夠有效殺滅其攜帶的病毒，經(jīng)過特定濃度和時(shí)長(zhǎng)的處理后，經(jīng)生物學(xué)和血清學(xué)檢測(cè)，有效率達(dá)100%，且有助于種子的萌發(fā)[15]。目前，國(guó)內(nèi)尚無番茄褐色皺果病毒脫毒處理技術(shù)的研究，有必要進(jìn)行加強(qiáng)。