王 亮，高軍軍，韓慶彥，馬胡賽，后學(xué)義，史利兵，車小蛟,*

（1.甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅 蘭州 730046；2.碌曲縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，甘肅 碌曲 747200；3.碌曲縣阿拉鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)工作站，甘肅 碌曲 747200）

羊腸毒血癥的病原為D型魏氏梭菌，該菌在土壤、污水、被污染的羊舍中可長(zhǎng)期存活，病羊一旦感染發(fā)病，腸道出血嚴(yán)重且軟化，死亡較快，給農(nóng)牧區(qū)養(yǎng)羊業(yè)帶來(lái)較大損失。2023年4月4日，碌曲縣西倉(cāng)鎮(zhèn)養(yǎng)殖的7只藏羔羊突然死亡，為探究死亡原因和減少同群發(fā)病，結(jié)合臨床發(fā)病情況、病理剖檢、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，最終診斷為羊腸毒血癥。

1 發(fā)病情況

甘南州碌曲縣西倉(cāng)鎮(zhèn)某牧民共飼養(yǎng)152只藏羊，2023年4月4日發(fā)現(xiàn)其中7只斷奶藏羔羊（60～70日齡）精神不振、呆立不動(dòng)、喜臥，1 d后5只羊突然死亡，后面幾天陸續(xù)有羊只死亡，部分慢性發(fā)病羊只病程達(dá)到1個(gè)月，使用幾種藥物后效果不明顯，羊只死前臨床癥狀主要表現(xiàn)為肚子鼓脹、口吐紅色泡沫，解剖后發(fā)現(xiàn)腸道出血嚴(yán)重，再結(jié)合該養(yǎng)殖場(chǎng)周圍疫病流行情況，初步懷疑是羊梭菌感染，無(wú)菌采集脾臟、腸道及內(nèi)容物冷藏保存，于24 h內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室診斷。

2 流行病學(xué)調(diào)查

2.1 羊群結(jié)構(gòu)

能繁藏母羊、羔羊和育肥羊，所有羊只未分欄飼養(yǎng)（混群飼養(yǎng)），發(fā)病羊只未分欄隔離。

2.2 飼養(yǎng)管理

碌曲縣養(yǎng)羊以放牧為主，冬春季以舍飼、集中圈養(yǎng)為主。日常飼喂中粗飼料主要為干牧草、玉米秸稈等；精料主要為青稞、玉米、麩皮、豆粕等，飼料大多為預(yù)混料，與玉米、粉碎飼草混合飼喂，成年羊（0.25±0.1）kg/d。圈舍衛(wèi)生差且潮濕（陰雨天氣時(shí)）。

2.3 免疫情況

2023年3月28日接種小反芻獸疫疫苗、口蹄疫疫苗（妊娠母羊、羔羊未接種），接種后未出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)、副作用等。1月齡以下羊群和妊娠母羊未接種羊三聯(lián)四防疫苗。

2.4 流行特點(diǎn)

羊群發(fā)病1個(gè)月以上，死亡16只，藥物很難根治，但隨著合理用藥和加強(qiáng)管理，病羊死亡明顯減少。

3 臨床癥狀

該羊群中死亡較早的5只藏羊倒地前四肢呈劃水樣、頭頸向后彎曲、肌肉顫搐、口鼻流涎，于2～6 h死亡。病程緩慢的羊只表現(xiàn)為離群、精神萎靡、不愿采食、臥地不起、腹脹、咬牙，有些病羊腹瀉脫水，排出棕色水樣稀糞。

4 病理變化

解剖3只病死羊，可以清晰看到病死羊小腸黏膜嚴(yán)重出血和十二指腸臌氣，腸道出血較嚴(yán)重（尤其是回腸），腸系膜淋巴結(jié)腫大，同時(shí)心包積液嚴(yán)重，肝臟腫大且顏色變淡，腦組織液化膿性壞死，肺部水腫出血，腎臟輕微腫大呈點(diǎn)狀出血，但軟化如泥（手觸質(zhì)地變軟）。

5 診斷

5.1 血清抗體檢測(cè)

采集病羊同圈舍羊血清樣品20份，抗體試驗(yàn)結(jié)果顯示，布病虎紅抗體均為陰性，小反芻獸疫阻斷ELISA、口蹄疫（A型和O型）液相阻斷ELISA抗體均為陽(yáng)性。

5.2 細(xì)菌學(xué)檢測(cè)

5.2.1 組織觸片 取病死羊病變明顯的脾臟、淋巴結(jié)組織，在無(wú)菌常溫環(huán)境下進(jìn)行觸片染色鏡檢，1 000倍顯微鏡下觀察到藍(lán)紫色小桿菌，無(wú)鞭毛，為G+。

5.2.2 細(xì)菌分離培養(yǎng) 在無(wú)菌操作下將死亡藏羊的脾、腸系膜淋巴組織、腸內(nèi)容物分別接種于液體培養(yǎng)基（加入強(qiáng)化梭菌）的厭氧肉肝湯，厭氧箱37 ℃環(huán)境下培養(yǎng)24 h，取培養(yǎng)物接種于TCS瓊脂平板[1]，（37±1）℃培養(yǎng)24 h后觀察到直徑3～5 mm的黑色菌落；將培養(yǎng)的黑色單個(gè)菌落劃線接種于綿羊鮮血瓊脂平板，厭氧培養(yǎng)20 h時(shí)，觀察到有2份腸內(nèi)容物培養(yǎng)物形成邊緣整齊、光滑的凸起橢圓形小菌落，且有雙層溶血環(huán)。

5.2.3 牛乳發(fā)酵試驗(yàn) 牛乳中接種已培養(yǎng)好的單個(gè)黑色菌落，在（45±1）℃條件下厭氧培養(yǎng)12 h，牛乳呈“爆裂發(fā)酵”。

5.2.4 PCR檢測(cè)方法及結(jié)果 采集病死羊新鮮病料（心臟、頜下淋巴結(jié)、盲腸、肝、脾、腸淋巴結(jié)、肺、氣管、腎臟、空腸）送蘭州獸醫(yī)研究所進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定和PCR鑒別診斷。結(jié)果分離到大腸桿菌和梭菌屬的細(xì)菌，再將2種細(xì)菌接種于小白鼠上觀察，發(fā)現(xiàn)大腸桿菌對(duì)小白鼠無(wú)致病性，但分離的梭菌屬細(xì)菌有致病性。同時(shí)用上述病料分別提取細(xì)菌基因組，然后分別用產(chǎn)氣莢膜梭菌型鑒定用引物cpa（擴(kuò)增alpha毒素）、cpb（擴(kuò)增beta毒素）、etx（擴(kuò)增epsilon毒素）、iA（擴(kuò)增iota毒素）、cpe（擴(kuò)增腸毒素）擴(kuò)增目的基因片段。結(jié)果在心臟、盲腸、氣管、腎臟所提細(xì)菌基因組中分別擴(kuò)增到cpa（400 bp）和etx（655 bp）基因片段。據(jù)此推測(cè)本次疫病的致病菌屬于D型魏氏梭菌。

通過(guò)臨床診斷、剖檢變化、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，確診為D型魏氏梭菌引起的羊腸毒血癥。

6 治療

將疑似或確診為該病的羊只，及時(shí)與同群健康羊只分開(kāi)飼養(yǎng)。病羊注射鹽酸林可霉素（按說(shuō)明書(shū)劑量用藥），1次/d，連用3～4 d；病情嚴(yán)重的羔羊選擇恩拉霉素，并配合維生素C、5%葡萄糖靜脈注射，1次/d，連用3～4 d，大大降低了羔羊致死率。

羊只定欄飼養(yǎng)，合理分配羊群飼養(yǎng)密度，分欄的健康羊群日糧中添加白頭翁粉劑（按照說(shuō)明書(shū)比例配置），其中母羊、羔羊用泰妙菌素拌飼，連續(xù)用藥3 d，停藥7 d后接種羊三聯(lián)四防疫苗（每只羊1頭份），接種后健康羊群未發(fā)現(xiàn)新增病例。

7 病因分析及防治措施

7.1 病因分析

7.1.1 飼養(yǎng)管理不當(dāng) 飼草料變化、天氣驟變和飼養(yǎng)方式改變均是羊腸毒血癥（D型魏氏梭菌）的誘發(fā)因素，該病的發(fā)生情況和養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）的飼養(yǎng)管理模式有直接關(guān)系。規(guī)模羊場(chǎng)擁有科學(xué)的免疫方案和飼養(yǎng)管理模式，且嚴(yán)格執(zhí)行，該病發(fā)生較少。但碌曲縣的養(yǎng)殖戶主要以半放牧的飼養(yǎng)方式為主，對(duì)放牧草場(chǎng)、羊舍、活動(dòng)場(chǎng)地進(jìn)行消毒的意識(shí)淡薄，個(gè)別牧民隨意丟棄或掩埋病死羊，飼草、放牧場(chǎng)地等被病原菌污染，增加了健康羊只的感染概率。該菌長(zhǎng)期存在，不易徹底清除[2]，抵抗力較差的羊群和體質(zhì)較弱的羔羊接觸被該菌污染的環(huán)境，該菌進(jìn)入小腸大量繁殖并分泌毒素是快速致死的主要原因[3-4]。

7.1.2 羊群未免疫或免疫失敗 繁殖母羊在妊娠期未接種羊三聯(lián)四防苗和部分羔羊出生后未免疫該苗或接種抗體滴度已經(jīng)下降，是羊群誘發(fā)本病的重要原因。碌曲縣的散養(yǎng)戶對(duì)疫病不重視，羊群發(fā)病后以治療為主，但該病死亡較快，藥物治療效果有限。

7.2 預(yù)防措施

7.2.1 加強(qiáng)羊群日常飼養(yǎng)工作 一是做好羊舍的環(huán)境衛(wèi)生工作和加強(qiáng)羊舍的保暖、通風(fēng)。碌曲縣海拔高，冬季長(zhǎng)，氣候易驟變，而羊腸毒血癥在氣溫驟變、潮濕環(huán)境中多發(fā)，養(yǎng)羊場(chǎng)（戶）要保持羊舍干燥、通風(fēng)和干凈，及時(shí)清理羊舍的糞污；羊群放牧?xí)r選擇較干燥的草地。

二是做好羊群營(yíng)養(yǎng)調(diào)控。該病在夏秋季節(jié)易暴發(fā)，在日糧中添加適量食鹽可降低胃腸疾病的發(fā)生概率，同時(shí)添加優(yōu)質(zhì)飼料保障營(yíng)養(yǎng)全面；制定合理的換料程序，羊群改喂蛋白質(zhì)豐富的配方飼料時(shí)，避免突然換料；對(duì)于放牧羊群，牧草較少的季節(jié)可根據(jù)羊群營(yíng)養(yǎng)缺乏情況添加精料；對(duì)于舍飼羊群，根據(jù)羊群營(yíng)養(yǎng)需求添加青粗料，青粗料含有較多的粗纖維，可促進(jìn)食物消化吸收；精飼料和青粗料根據(jù)羊群營(yíng)養(yǎng)需求科學(xué)配比，以免消化不良。定期在飼料中按一定比例添加益生菌制劑，促進(jìn)羊群瘤胃、腸道有益菌的繁殖。

7.2.2 加強(qiáng)隔離、消毒及無(wú)害化處理工作 發(fā)現(xiàn)有疑似該病臨床癥狀的羊只立即采取分欄隔離措施，并及時(shí)進(jìn)行診斷和對(duì)癥治療，防止該病更大范圍地傳播，減少經(jīng)濟(jì)損失。羊舍地面、欄桿、食槽、飲水槽和掃把等用強(qiáng)力消毒靈噴灑消毒，飼養(yǎng)工具串舍前和飼喂車輪胎出舍時(shí)須消毒處理，同時(shí)飼養(yǎng)人員每次進(jìn)出羊舍穿的鞋子需刷洗或浸泡消毒。病死羊按程序走保險(xiǎn)報(bào)銷后，禁止丟棄，對(duì)其消毒后采取深埋、焚燒、生物發(fā)酵等處理措施。

7.2.3 做好免疫接種工作 接種疫苗是預(yù)防羊腸毒血癥最有效的措施[5]。目前，市場(chǎng)上的三聯(lián)四防苗可產(chǎn)生較高濃度抗體，減少A型、B型、C型、D型產(chǎn)氣梭菌，該疫苗已經(jīng)成熟，注射后對(duì)羊群應(yīng)激較低，副作用較小，每年春秋季節(jié)各接種1次，7～14 d后產(chǎn)生免疫力。

7.2.4 加強(qiáng)宣傳 甘南州大多數(shù)牧民養(yǎng)殖技術(shù)落后，應(yīng)通過(guò)微信公眾號(hào)或微信群等交流養(yǎng)殖經(jīng)驗(yàn)[6]，傳播先進(jìn)養(yǎng)羊技術(shù)。

8 結(jié)論

羊腸毒血癥的病原是D型魏氏梭菌，患病羊感染該病菌后會(huì)在短時(shí)間內(nèi)死亡，由于發(fā)病急給診斷帶來(lái)較大挑戰(zhàn)，采用流調(diào)、臨床鑒別作初步診斷，實(shí)驗(yàn)室診斷中常用組織涂片、細(xì)菌分離培養(yǎng)和PCR檢測(cè)，通過(guò)臨床初步診斷和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及時(shí)制定預(yù)防措施，一旦發(fā)現(xiàn)疑似發(fā)病羊群立即采取隔離病羊、徹底消毒羊舍及周圍環(huán)境、對(duì)病羊積極治療、健康羊群采取疫苗免疫和藥物保健預(yù)防等措施，同時(shí)加強(qiáng)不同階段羊群的營(yíng)養(yǎng)、減少應(yīng)激誘因，從而降低發(fā)病概率，減少養(yǎng)羊場(chǎng)（戶）的經(jīng)濟(jì)損失。