檳榔籽提取物對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）活性的抑制作用研究

于鑫 唐敏敏 羅家欣 宋菲 朱婷婷 陳華 趙松林

關(guān)鍵詞：檳榔提取物；血管緊張素轉(zhuǎn)化酶；抑制作用；酶動力學(xué)

檳榔（Areca catechu L.）屬棕櫚科檳榔屬常綠喬木，在我國主要種植于海南和臺灣等地。近些年傳統(tǒng)檳榔干食用消費市場發(fā)展迅速，檳榔已逐漸成為海南省的經(jīng)濟(jì)支柱產(chǎn)業(yè)。然而，無論是卷土重來的“致癌”風(fēng)波，還是檳榔去食品化，都使檳榔產(chǎn)業(yè)面臨巨大挑戰(zhàn)。另一方面，檳榔作為四大南藥之首，具有利水、滅蟲、截瘧等功效[1]?，F(xiàn)代研究表明，檳榔富含多酚、多糖和生物堿等物質(zhì)，這些物質(zhì)具有多重活性功能。然而長期以來，檳榔藥用價值的研究和開發(fā)利用嚴(yán)重不足。因此，深度系統(tǒng)挖掘檳榔藥用價值，對促進(jìn)檳榔產(chǎn)業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。

血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（angiotensin-convertingenzyme， ACE）是機(jī)體血壓調(diào)節(jié)系統(tǒng)中調(diào)控血壓升高的關(guān)鍵酶[2-3]。多項研究表明ACE 抑制劑可有效控制高血壓疾病的發(fā)生[4]?，F(xiàn)臨床常用的ACE抑制劑，降壓效果較好，但卻常伴有高鉀血癥、腎功能不全等嚴(yán)重副作用[5-7]。相較于這些藥物中的化學(xué)合成成分，天然產(chǎn)物中活性成分的安全性更高，因此尋找天然來源的ACE 抑制劑成為眾多研究者關(guān)注的焦點。

目前對檳榔的活性功能研究主要有抗氧化、抗衰老、抗炎等方面，但檳榔降血壓的相關(guān)報道較少。鑒于此，本研究以檳榔嫩果作為供試對象，研究檳榔提取物對ACE 活性的抑制作用，并初步探索其相關(guān)活性物質(zhì)，以期為檳榔藥用價值的挖掘和利用提供基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)，同時為天然降血壓抑制劑的開發(fā)提供原料來源。

1 材料與方法

1.1 材料

檳榔：采自中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院椰子研究所科研實驗基地，檳榔嫩果為授粉后150 d 左右的果實。采果后，將果實對半切開，取出籽進(jìn)行冷凍干燥后，粉碎，過60 目篩，備用。

試劑：血管緊張素轉(zhuǎn)化酶，上海穎心實驗室設(shè)備有限公司；馬脲酰-組氨酰-亮氨酸（HHL），上海源葉生物科技有限公司；卡托普利，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；鄰苯二甲醛（OPA）、沒食子酸、葡萄糖、牛血清蛋白（純度≥98%），上海麥克林生化科技有限公司；兒茶素、原花青素B2、槲皮素等多酚標(biāo)準(zhǔn)品，西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司。

儀器與設(shè)備：TYSP-200 型高速多功能粉碎機(jī)，浙江永康市紅太陽機(jī)電有限公司；THD-T1型超聲波發(fā)生器，深圳市電科超聲波有限公司；FDU-1200 型冷凍干燥機(jī)，上海愛朗儀器有限公司；RE-5205 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；UV-1600 紫外可見分光光度計，上海翱藝儀器有限公司；Varioskan Flash 型全自動熒光免疫分析儀，美國Thermo Scientific 公司；LCMS8050型號液質(zhì)聯(lián)用儀，日本島津公司。

1.2 方法

1.2.1 檳榔提取物的制備 按照前期研究[8]的方法制備檳榔的石油醚部位（PE-ANE）、乙酸乙酯部位（EAC-ANE）、正丁醇部位（BU-ANE）和水部位（W-ANE）的粉末狀提取物。取少量以上部位溶于二甲基亞砜（DMSO），?80 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 ACE 活性的抑制作用研究 檳榔提取物的不同極性萃取部位對ACE 活性抑制試驗方法參考張曉峰等[9] 的方法， 并稍作改動。采用0.05 mol/L 硼酸鹽緩沖液（pH 為8.3，含0.05 mol/LNaCl）配制ACE 酶液（0.025 U/mL）及底物HHL溶液（5 mmol/L）。以2 mL EP 管作為反應(yīng)容器，依次添加0.10 mL HHL 底物溶液、0.05 mL 樣品液和0.10 mL ACE 液，充分混勻后置于37 ℃的水浴鍋中反應(yīng)30 min，反應(yīng)完成后加入1.50 mL 的0.3 mol/L NaOH 溶液及0.10 mL 的2% OPA 溶液（溶于無水乙醇），室溫下靜置10 min，最后利用0.20 mL 的3 mol/L HCl 溶液終止反應(yīng)。于激發(fā)波長340 nm、發(fā)射波455 nm 條件下，測定最終反應(yīng)液的熒光強(qiáng)度。同時設(shè)置空白組、空白對照組和樣品對照組?？ㄍ衅绽鳛殛栃詫φ眨–K+）。根據(jù)上述反應(yīng)程序及表1 中不同組別的反應(yīng)體系，分別加入相應(yīng)試劑進(jìn)行反應(yīng)。每個樣品平行試驗3 次，計算抑制率。樣液的ACE 抑制率計算公式為：ACE抑制率=[1-（IA-IC）/（IB-ID）]×100%。式中，IA 為樣品組熒光強(qiáng)度；IC 為樣品對照組熒光強(qiáng)度；IB 為空白組熒光強(qiáng)度；ID 為空白對照組熒光強(qiáng)度。

1.2.3 ACE 抑制作用的酶動力學(xué)實驗 （1）抑制類型的動力學(xué)實驗。酶動力學(xué)試驗參考文獻(xiàn)[10-11]中的方法，并稍作修改。固定底物HHL 的濃度（5 mmol/L），改變ACE 的濃度（0.0125、0.025、0.0375、0.050、0.0625 U/mL），添加0.05 mL 不同濃度的極性部位樣品液（0、1.0、2.5 mg/mL），充分混勻后于37 ℃水浴反應(yīng)10 min，反應(yīng)后加入1.50 mL 的0.3 mol/L NaOH 溶液與0.10 mL 的2%OPA 溶液（溶于無水乙醇），室溫下靜置10 min，最后添加0.20 mL 的3 mol/L HCl 溶液終止反應(yīng)。于激發(fā)波長340 nm、發(fā)射波455 nm 處測定反應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度，記錄數(shù)據(jù)，計算酶反應(yīng)速率（V，△A/min），以該酶濃度下，單位時間內(nèi)吸光度值的變化量來表示反應(yīng)速率。根據(jù)酶反應(yīng)速率與酶濃度之間的變化關(guān)系，以酶濃度為橫坐標(biāo)、酶反應(yīng)速率為縱坐標(biāo)作圖，分析其抑制類型是否可逆。

（2）可逆抑制類型的酶動力學(xué)實驗。固定ACE 濃度（0.025 U/mL），改變反應(yīng)底物HHL 溶液濃度（1、2、4、5、7.5 mmol/L），改變不同萃取部位樣品液濃度（0、1.5、2.0 mg/mL），于37 ℃水浴反應(yīng)10 min，反應(yīng)完成后加入1.50 mL 的0.3 mol/L NaOH 溶液及0.10 mL 的2% OPA 溶液（溶于無水乙醇）混勻，室溫下靜置10 min，最后添加0.20 mL 的3 mol/L HCl 溶液終止反應(yīng)。于激發(fā)波長340 nm、發(fā)射波455 nm 處測定反應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度。記錄數(shù)據(jù)，計算反應(yīng)體系的反應(yīng)速率（V， △A/min），以底物濃度（S）的倒數(shù)（1/S）為橫坐標(biāo)、反應(yīng)速率V 的倒數(shù)（1/V）為縱坐標(biāo)，繪制Lineweaver-Burk 雙倒數(shù)曲線，分析ACE 活性抑制作用較好的萃取部位對ACE 呈現(xiàn)的抑制類型。

1.2.4 活性成分含量測定 （1）多酚含量測定。測定方法參照文獻(xiàn)[12]中的福林酚氧化法進(jìn)行。取1 mL 一定濃度的萃取部位樣品液于具塞試管中，與5 mL 10%福林酚試劑混勻后反應(yīng)3～8 min，繼續(xù)加入5 mL 7.5%碳酸鈉溶液，搖勻，室溫避光條件下反應(yīng)60 min。在波長595 nm 處測定樣品溶液的吸光值。測得沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.0093x+0.0695（R2=0.9992），有效濃度范圍為0～100 μg/mL，對照沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計算多酚含量。

（2）總糖含量測定。測定方法參照文獻(xiàn)[13]中的苯酚-硫酸法進(jìn)行，并根據(jù)實際情況稍作修改。取1 mL 一定濃度的萃取部位樣品液于具塞試管中，與1 mL 5%苯酚溶液混勻后盡快加入5 mL 的濃硫酸溶液。室溫靜置15 min 后，再于30 ℃水浴放置15 min，取出冷卻至室溫。在波長490 nm 處測定樣品溶液的吸光值。測得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.0106x-0.0409（R2=0.9967），有效濃度范圍為0～100 μg/mL，對照葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計算總糖含量。

（3）總蛋白含量測定。測定方法參照文獻(xiàn)[14]中的考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行。取1 mL 一定濃度的萃取部位樣品液于具塞試管中，添加5 mL 0.01%考馬斯亮藍(lán)試劑，搖勻后靜置3 min，于40 ℃水浴15 min，取出后冷卻至室溫。在波長595 nm 處測定樣品溶液的吸光值。測得牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.0042x-0.0172（R2=0.9940），有效濃度范圍為0～100 μg/mL，對照牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線計算蛋白質(zhì)含量。

1.2.5 多酚成分分析 采用島津LCMS8050 型號液質(zhì)聯(lián)用儀對多酚組分進(jìn)行分析，根據(jù)前期的類黃酮廣靶研究結(jié)果[10]，選取所需標(biāo)準(zhǔn)品，配置成所需進(jìn)樣濃度（1～20 μg/mL），備用。

色譜參數(shù)：色譜柱選用ACQUITY UPLC BEHC18 色譜柱（1.7 μm×21 mm×150 mm）；柱溫箱溫度設(shè)為40 ℃，自動進(jìn)樣器溫度設(shè)為8 ℃，進(jìn)樣體積為2 μL。流動相A 為3%乙酸水溶液，流動相B為100%甲醇；總流速為100 μL/min。流動相B梯度洗脫程序為：0～6.00 min，10%～30%；6.01～10.00 min，30%～40%；10.01～30 min，40%～70%；30.01～40.00 min，70%～10%；40.01～55.00 min，10%。

質(zhì)譜參數(shù)： 數(shù)據(jù)采集時， 以多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式進(jìn)行質(zhì)譜分析，離子噴霧電壓為+5000/-4500 V； 氣簾氣壓力為35 psi； 溫度為500 ℃；離子源氣體壓力1 為55 psi；離子源氣體壓力2 為60 psi。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 26.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析，多組間比較采用單因素方差分析，利用Pearson相關(guān)系數(shù)分析相關(guān)性。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 檳榔提取物對ACE 活性的抑制作用

1977 年，F(xiàn)RIEDLANG 等[15]建立了熒光光度法來測定ACE 抑制劑的活性，其原理是利用ACE水解產(chǎn)物的組氨酰部分在堿性條件下與鄰苯二甲醛反應(yīng)生成熒光物，通過測定加入抑制劑前后熒光物質(zhì)的吸光度差值來計算其抑制活性。檳榔提取物的不同極性部位及卡托普利（CK+）對ACE活性的抑制作用見圖1。由圖1 可知，PE-ANE、EAC-ANE、BU-ANE、W-ANE 四個極性部位對ACE 活性均具有一定的抑制作用，并且隨著質(zhì)量濃度的增加，其抑制率也逐漸增加，呈現(xiàn)出濃度依賴性。在試驗濃度范圍內(nèi)，EAC-ANE 表現(xiàn)出較好的ACE 抑制活性， 其IC50 值為（1.51±0.07）mg/mL，且其對ACE 的抑制活性顯著優(yōu)于其他3 個極性部位（P<0.05）。BU-ANE 和W-ANE的ACE 抑制活性較弱， IC50 值分別為（2.15±0.04）mg/mL 和（2.19±0.07）mg/mL；PE-ANE 的抑制活性最弱，IC50 值為（6.92±0.34）mg/mL，但4個極性部位的抑制活性均低于CK+，CK+的IC50值為（5.53±0.32）×10?6 mg/mL。

溶劑萃取法依據(jù)“相似相溶”原理溶解樣品中的可溶有機(jī)質(zhì)，實現(xiàn)可溶有機(jī)組分的分離與富集。在活性試驗中，該方法多用于極性相似化學(xué)成分的分離及富集。王蘭等[16]對翼蓼塊根提取物在乙酸乙酯、正丁醇及水3 個萃取部位的ACE 抑制活性進(jìn)行研究表明，乙酸乙酯部位對ACE 的抑制活性為39.76%，顯著優(yōu)于其他2 個極性部位，且3 種極性部位的ACE 抑制效果也呈現(xiàn)濃度依賴性，這與本研究結(jié)果類似。綜上所述，在進(jìn)一步的ACE 抑制動力學(xué)研究中，選取抑制活性相對較好的EAC-ANE 進(jìn)行后續(xù)試驗。

2.2 EAC-ANE 對ACE 活性的抑制類型

根據(jù)酶抑制劑與酶結(jié)合的作用方式及特點，可將酶的抑制作用分為可逆抑制與不可逆抑制2種。當(dāng)測定酶抑制作用的反應(yīng)體系中不存在抑制劑時，反應(yīng)速率曲線會通過直角坐標(biāo)系的原點；當(dāng)存在不可逆抑制劑時，其反應(yīng)速率曲線不會通過坐標(biāo)系的原點；當(dāng)存在一定量的可逆抑制劑時，其反應(yīng)速率曲線會通過坐標(biāo)系的原點，且其反應(yīng)速率的曲線斜率小于不存在抑制劑時的曲線斜率[10， 17]。因此，根據(jù)抑制劑的抑制動力學(xué)曲線可判別其抑制作用是否可逆。

本研究采用酶抑制動力學(xué)方法，在測定ACE抑制作用的反應(yīng)體系中加入EAC-ANE（0、1.0、2.5 mg/mL ）， 利用固定底物HHL 的濃度（5 mmol/L），不同濃度（12.5、25.0、37.5、50.0、62.5 mU/mL）的ACE 測定酶抑制作用，以反應(yīng)速率（V）對ACE 的酶濃度進(jìn)行制圖。EAC-ANE對ACE 的抑制動力學(xué)曲線見圖2，在ACE 抑制作用反應(yīng)體系中添加或不添加EAC-ANE 時，其反應(yīng)速率曲線均通過直角坐標(biāo)系的原點，并且在添加EAC-ANE 的反應(yīng)體系中，其反應(yīng)速率曲線的斜率明顯小于未添加EAC- ANE 的，隨著反應(yīng)體系中EAC-ANE 濃度的升高，曲線斜率逐漸變小。因此可知，EAC-ANE 對ACE 活性的抑制作用屬于可逆抑制。

2.3 EAC-ANE 對ACE 活性的可逆抑制作用類型

根據(jù)抑制劑與底物的關(guān)系，可逆抑制類型可分為競爭性抑制、非競爭性抑制、反競爭性抑制和混合型抑制4 種類型。其中，混合型抑制又包括競爭與非競爭的混合型、競爭與反競爭的混合型2 種[18]。在Lineweaver-Burk 的雙倒數(shù)曲線圖中，隨著抑制劑濃度的增加，若反應(yīng)體系的最大反應(yīng)速率（Vmax）不變，米氏常數(shù)（Km）增大，表明該抑制類型屬于競爭性抑制；若Vmax 減小，Km 不變，表明該抑制類型屬于非競爭性抑制；若Vmax 減小，Km 減小，表明該抑制類型屬于反競爭性抑制；若Vmax 減小，Km 增大，表明該抑制類型屬于競爭與非競爭混合型抑制；若Vmax 減小，Km減小，表明該抑制類型屬于競爭與反競爭混合型抑制[19-20]。

本研究通過固定反應(yīng)體系中的ACE 濃度（25 mU/mL），改變底物HHL 的濃度（1.0、2.0、4.0、5.0、7.5 mmol/L），在EAC-ANE 不同濃度（0、1.5、2.0 mg/mL）條件下，測定反應(yīng)體系的反應(yīng)速率，繪制Lineweaver-Burk 雙倒數(shù)曲線圖（圖3）。根據(jù)雙倒數(shù)圖計算出不同EAC-ANE 濃度反應(yīng)體系的Vmax 和Km（表2）。由圖3 和表2 可知，EAC-ANE 不同濃度的3 個反應(yīng)體系得到的3 條直線相交于第2 象限，且隨著EAC-ANE 濃度的升高，反應(yīng)體系中的Vmax 逐漸減小，Km 逐漸增大。參數(shù)的這種變化特征和競爭與非競爭的混合型抑制特點相符，所以EAC-ANE 對ACE 活性的可逆抑制類型為競爭與非競爭的混合型抑制。

2.4 檳榔提取物中3 種化學(xué)物質(zhì)含量

檳榔中的成分復(fù)雜，主要有檳榔堿、油脂、多糖、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、粗纖維和一些酚類物質(zhì)等成分[21]。檳榔提取物不同極性部位的多酚、總糖、蛋白質(zhì)含量如表3 所示，EAC- ANE 中的多酚含量以及W-ANE 中的蛋白質(zhì)和總糖含量顯著高于其他極性部位中的相應(yīng)化學(xué)成分含量，且EAC-ANE中的多酚含量相較于多酚含量排在第2位的BU-ANE 高出34%。

此外，張丹等[22]對檳榔不同極性部位的多酚含量進(jìn)行測定發(fā)現(xiàn)，檳榔乙酸乙酯部位的總多酚高于正丁醇部位。且在其他植物如翼蓼塊根、荔枝的提取物中乙酸乙酯部位的多酚含量也顯著高于石油醚、正丁醇以及水部位[16， 23]。這均與本研究結(jié)果類似。從上述結(jié)果可以看出，與其他極性物質(zhì)相比，檳榔多酚經(jīng)乙酸乙酯萃取后能夠獲得更高的提取效率，這可能是由于多酚物質(zhì)的極性與乙酸乙酯極性相近，在乙酸乙酯中更易提取。

2.5 化學(xué)物質(zhì)含量的相關(guān)性分析

檳榔嫩果提取物不同極性部位的ACE 抑制活性的IC50 值與多酚、總糖、蛋白質(zhì)含量的相關(guān)性分析如表4 所示。皮爾遜相關(guān)系數(shù)大小與相關(guān)性強(qiáng)度之間的關(guān)系認(rèn)為，相關(guān)系數(shù)（r）越接近于1 或-1，相關(guān)度越強(qiáng)，r 越接近0，相關(guān)度越弱。當(dāng)r 的絕對值在0.80 以上，表示有強(qiáng)相關(guān)性；在0.60～0.79 之間，表示有中等相關(guān)性；在0.30～0.59之間，表示有弱相關(guān)性；而在0.30 以下時，則表示二者無相關(guān)性[24]。由表4 可知，檳榔提取物的不同極性部位對ACE 抑制活性的IC50 值與3 種活性物質(zhì)含量均呈極顯著負(fù)相關(guān)，但相關(guān)性強(qiáng)度有所差異，不同極性部位對ACE 抑制活性的IC50值與多酚含量、總糖含量呈強(qiáng)相關(guān)性，而與蛋白質(zhì)含量則呈中等相關(guān)性。由此說明，多酚可能是檳榔提取物中ACE 抑制活性的主要作用物質(zhì)，并且多糖也發(fā)揮了一定的ACE 活性抑制作用。

植物多酚和多糖具有ACE 抑制活性，這與已有的多項研究結(jié)果一致，如苦杏仁葉[25]、黑加侖[26]和獼猴桃[27]中的多酚提取物，紅毛藻[11]、牡蠣[28]、咖啡渣[29]以及一些堅果[30]中的多糖提取物均可表現(xiàn)出ACE 抑制活性，從而達(dá)到降血壓的效果。

2.6 檳榔提取物多酚組分定量分析

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）技術(shù)具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、適用范圍廣等諸多優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于食品、藥品和環(huán)境中化學(xué)成分的定性與定量分析[8]。根據(jù)相關(guān)性試驗結(jié)果，檳榔提取物中多酚含量與ACE 抑制活性之間具有極強(qiáng)的相關(guān)性。因此通過前期類黃酮廣靶研究[8]選擇原花青素、原兒茶酸、兒茶素、異鼠李素等33 種多酚標(biāo)準(zhǔn)品對檳榔多酚提取物中的具體組分進(jìn)行定量分析，與標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖峰面積對照分析后，從中得到含量較高的14 種多酚組分（表5）。從4 種極性部位中定量到兒茶素、L-表兒茶素、原花青素B2、原兒茶酸、槲皮素等多種多酚組分。14 種多酚組分含量在不同極性部位中存在一定差異，其中EAC-ANE 中的各多酚組分含量最高，共計14 192.42 ng/mg，其次是BU-ANE 和W-ANE，PU-ANE 中的多酚組分含量最低。在EAC-ANE 中，兒茶素含量最高，為3956.89 ng/mg，其次是L-表兒茶素和原花青素B2，含量分別為3341.86、3130.05 ng/mg。原兒茶醛僅在EAC-ANE 中定量到，而其他3 個極性部位由于含量太少或者無，并未定量到絕對含量。

ANWARUL 等[31]已證明了在檳榔粗提物中檢測出的兒茶素成分具有一定的降血壓效果。同時在其他天然產(chǎn)物中的表兒茶素[32]、原花青素[33]、槲皮素[34]、異鼠李素[34]、綠原酸[35]等多種多酚類化合物也均被證明具有顯著的ACE 抑制活性的作用。而在本研究的EAC-ANE 中，這些組分含量較高，這也可能是EAC-ANE 的ACE 抑制活性最好的原因。綜上所述，ACE 的抑制活性與多酚含量高度相關(guān)，檳榔提取物中的多酚組分可以被證明是抑制ACE 活性的主要成分，且多酚組分中含量最高的兒茶素、L-表兒茶素、原花青素B2 很有可能是抑制ACE 活性的關(guān)鍵化合物。

3 討論

目前對降血壓活性方面的研究大部分均集中于海洋生物肽、豆類多肽以及一些果蔬植物的活性提取物中[36]，但國內(nèi)外針對檳榔的降血壓活性研究卻十分匱乏。INOKUCHI 等[37]通過動物體內(nèi)試驗，發(fā)現(xiàn)檳榔種子的鞣質(zhì)提取物能通過抑制自發(fā)性高血壓大鼠的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶，從而達(dá)到降血壓的效果。但并未進(jìn)行體外試驗研究該提取物中的主要化學(xué)成分及其作用機(jī)理。ANWARUL等[31]研究表明，在檳榔粗提物中檢測出的兒茶素成分可通過舒張血管而達(dá)到一定的降血壓效果。但也并未說明兒茶素類成分是否對血壓調(diào)控關(guān)鍵酶——血管緊張素轉(zhuǎn)化酶具有一定的抑制活性。項目組前期試驗表明，檳榔籽中含有大量的多酚類物質(zhì)，其提取率可達(dá)40%以上，提取物的多酚含量超過80%[38]。檳榔提取物具有一定的抑制ACE 活性作用，但并未見其在抑制ACE 酶動力學(xué)方面的相關(guān)報道。

本研究發(fā)現(xiàn)，檳榔嫩果提取物的4 種不同極性部位對ACE 活性均具有一定的抑制效果，且具有濃度依賴性。EAC-ANE 的抑制效果最為顯著，IC50 值為（1.51±0.07）mg/mL。PARK 等[39]曾報道竹筍提取物對ACE 的半抑制質(zhì)量濃度約為6 g/L，而本研究中EAC-ANE、BU-ANE、W-ANE 的IC50值均顯著低于前者。在對4 種極性部位中的多酚、總糖、蛋白質(zhì)3 種物質(zhì)含量的測定中發(fā)現(xiàn)，EAC-ANE 中的多酚含量顯著高于其他3 個極性部位。不同極性部位ACE 抑制活性的IC50 值與蛋白質(zhì)、總糖、多酚含量均呈極顯著負(fù)相關(guān)，與多酚、總糖含量呈強(qiáng)相關(guān)性，且與多酚含量呈極強(qiáng)相關(guān)性。在不同極性部位中定量得到14 種含量較高的多酚組分，其中兒茶素、L-表兒茶素和原花青素B2 在EAC-ANE 中含量最高。已有研究證明這3 種物質(zhì)具有一定的降血壓效果，同時本研究定量出的其他多酚成分中的部分化合物也已被證明具有抑制ACE 活性的作用。

綜上所述，本研究已初步證明EAC-ANE 具有較好的ACE 抑制效果，并且檳榔提取物中的多酚含量與ACE 抑制效果之間存在密切聯(lián)系。檳榔是豐富的天然多酚來源，這一研究成果為以天然植物多酚成分制備ACE 抑制劑，以及檳榔藥用價值的開發(fā)提供了一定的研究基礎(chǔ)。但本研究中還未確定檳榔多酚組分中發(fā)揮關(guān)鍵作用的單體化合物及其抑制ACE 活性的作用方式和體內(nèi)降血壓效果。后續(xù)的研究中將繼續(xù)對這些問題進(jìn)行更深層次的探索。而多糖與ACE 酶的作用方面也將另行研究。