1食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展演變

食用菌栽培起始于800多年前浙江省慶元縣“剁花法”原生態(tài)栽培，當(dāng)時(shí)菌種靠食用菌成熟后的孢子隨空氣流動(dòng)進(jìn)行傳播，其“林-菇共育系統(tǒng)”2022年11月4日正式入選全球重要農(nóng)業(yè)文化遺產(chǎn)（GIAHS）保護(hù)名錄。到后來發(fā)展到“段木栽培”、“代料栽培”，就開始應(yīng)用培養(yǎng)基培養(yǎng)固體菌種接種到段木上或栽培料上進(jìn)行栽培，進(jìn)一步提升了食用菌栽培效益和效率。隨著食用菌需求量的增加，食用菌栽培從小規(guī)模種植發(fā)展到工業(yè)化、規(guī)模化生產(chǎn)，食用菌菌種也隨之從最早的孢子自然傳播方式上升到固體菌種接種，進(jìn)而發(fā)展到工廠化液體菌種生產(chǎn)，節(jié)省了菌種培養(yǎng)時(shí)間和空間，提高了食用菌栽培效率和效益。本文主要介紹食用菌液體菌種培養(yǎng)與應(yīng)用技術(shù)要點(diǎn)，以供參考。

2液體菌種與固體菌種的對(duì)比優(yōu)勢(shì)

液體菌種是在液體培養(yǎng)基中利用生物發(fā)酵培育出來的食用菌菌種。與固體菌種相比，液體菌種具有三大優(yōu)勢(shì)：

2.1液體菌種培養(yǎng)原材料成本低

2.1.1原材料成本低

液體菌種培養(yǎng)基主要原料為淀粉、蛋白質(zhì)、維生素等物質(zhì)，相對(duì)固體菌種原料，價(jià)格較低且容易采購(gòu)，如玉米淀粉，生產(chǎn)范圍廣，隨處都可以就地取材，不單價(jià)格廉價(jià)而且質(zhì)量穩(wěn)定，既可降低生產(chǎn)成本又能提高培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)質(zhì)量，培養(yǎng)優(yōu)質(zhì)菌種，降低接種時(shí)菌種的營(yíng)養(yǎng)風(fēng)險(xiǎn)。

2.1.2貯藏空間小

以杏鮑菇為例，液體菌種一般0.1 L就可以接種1個(gè)菌包，菌種貯存用空間較小，與固體菌種相比，可以節(jié)省菌種貯存空間，降低生產(chǎn)成本。

2.1.3生長(zhǎng)快、培養(yǎng)時(shí)間短

液體菌種從試管種（母種）到栽培種的培養(yǎng)時(shí)間一般只需要7～10 d，既縮短了菌種的培養(yǎng)時(shí)間，為食用菌栽培生產(chǎn)留足更多時(shí)間；另一方面可以減少菌種培養(yǎng)人工成本。

2.2液體菌種培養(yǎng)期間生長(zhǎng)快

液體菌種從試管種取出到三角瓶中培養(yǎng)最多只需要7 h就可以轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐中進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，在發(fā)酵罐中正常情況一般只需要8～9 d，最多10 d就完全可以接入栽培料；與固體菌種相比，可以節(jié)省20 d左右的培養(yǎng)時(shí)間[1]。

2.3液體菌種品質(zhì)好

2.3.1液體菌種活力強(qiáng)

液體菌種充分利用液體流動(dòng)性，在接入栽培料后可快速滲透到栽培料中，因其爆發(fā)點(diǎn)較多，可迅速占據(jù)接種口的栽培料，使雜菌沒有入侵感染的機(jī)會(huì)。

2.3.2液體菌種純度高

液體菌種在整個(gè)培養(yǎng)過程中都完全處于封閉式培養(yǎng)，一般不容易感染雜菌；并且液體菌種不分等級(jí)，直接從母種培養(yǎng)成栽培種，純度較高。與固體菌種相比，固體菌種在培養(yǎng)期間經(jīng)過一級(jí)種、二級(jí)種、三級(jí)種等的轉(zhuǎn)接和培養(yǎng)，有可能會(huì)導(dǎo)致菌種變異或種性退化等降低菌種質(zhì)量。

2.3.3液體菌種一致性強(qiáng)

在接入栽培料后菌絲生長(zhǎng)整齊一致。

3液體菌種制作和培養(yǎng)需要的設(shè)施設(shè)備

液體菌種制作和培養(yǎng)，一般需要配備各種規(guī)格的三角瓶、試管、小鋼珠、酒精燈、高壓滅菌鍋、往復(fù)式振動(dòng)床、無菌接種工作臺(tái)或百萬級(jí)的無菌接種車間、發(fā)酵罐、空氣壓縮機(jī)、鍋爐及凈化設(shè)備等。相比固體菌種培養(yǎng)需要更多的設(shè)施設(shè)備，一次性前期投資相對(duì)較高，一般中小型生產(chǎn)企業(yè)或經(jīng)營(yíng)主體投資難以接受，但實(shí)行工廠化生產(chǎn)菌種的企業(yè)，雖然前期投入較高，但總體運(yùn)行其生產(chǎn)成本較低[2]。

4液體菌種培養(yǎng)技術(shù)要點(diǎn)

生產(chǎn)食用菌液體菌種主要流程為：培養(yǎng)基配備-裝料-滅菌-冷卻-接種-發(fā)酵罐培養(yǎng)-接種栽培料。其培養(yǎng)主要分為兩個(gè)階段，即搖瓶振蕩培養(yǎng)和發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)。

4.1配制液體培養(yǎng)基

在選擇培養(yǎng)基原料時(shí)必須保證原料價(jià)格低廉，營(yíng)養(yǎng)豐富且全面，取材方便、貯量大，質(zhì)量穩(wěn)定，酸堿度適中。液體培養(yǎng)基配制因食用菌品種不同而有較大差異。以1 L液體搖瓶培養(yǎng)基為例：

杏鮑菇搖瓶培養(yǎng)基配方為：葡萄糖10 g、大豆粉60 g、硫酸氫鉀40.5 g、硫酸鎂0.5 g、蛋白5 g、外加1%維生素B1。香菇搖瓶培養(yǎng)基配方為：玉米粉30 g、紅糖30 g，磷酸二氫鉀0.7 g，硫酸鎂0.5 g，維生素B11片，液體培養(yǎng)基的pH7左右。海鮮菇搖瓶培養(yǎng)基配方為：玉米淀粉0.6 g、馬鈴薯淀粉4.8 g、麥麩10 g、硫酸亞鐵40.6 g、硫酸氫鉀41.2 g、蛋白腺3 g，外加1%維生素B1即可。金針菇搖瓶培養(yǎng)基配方為：馬鈴薯100 g、紅糖15 g、葡萄糖10 g、聚氧丙烯甘油0.3 mL蛋白胨2 g、麥麩40 g、磷酸二氫鉀2 g、硫酸鎂1 g，維生素B11片，液體培養(yǎng)基pH7左右。

4.2搖瓶振蕩培養(yǎng)

4.2.1接種前準(zhǔn)備

將配制好的培養(yǎng)料裝入三角瓶中并按比例注入所需的水，裝料和注入水時(shí)，所有原料都不能超過整個(gè)三角瓶容量的1/4，若超過1/4后，在振蕩搖瓶時(shí)，培養(yǎng)基容易接觸瓶口棉塞而感染；同時(shí)在三角瓶中放入1個(gè)小鋼珠，防止在高溫滅菌時(shí)瓶底產(chǎn)生垢，降低液體培養(yǎng)基的有效成分；再將三角瓶密封好放入高壓滅菌鍋內(nèi)進(jìn)行滅菌，當(dāng)高壓滅菌鍋內(nèi)氣壓達(dá)到105 Mpa、溫度達(dá)到120℃時(shí)開始計(jì)時(shí)，20 min后即可達(dá)到滅菌效果，取出冷卻20 min后即可接種。

4.2.2接種

在無菌工作臺(tái)中將斜面種（試管種）接入三角瓶中即可進(jìn)行搖瓶振蕩培養(yǎng)。

4.2.3搖瓶振蕩培養(yǎng)

將已接種的三角瓶放在振動(dòng)搖床上，將搖床的溫度調(diào)節(jié)在23～25℃，振動(dòng)頻率在80～100次/min，振動(dòng)幅度在6～10 cm，即可開始培養(yǎng)，一般在7 h內(nèi)就可以完成整個(gè)搖瓶振蕩培養(yǎng)全過程，這時(shí)通過觀察，培養(yǎng)基通透性較好，菌絲球數(shù)量較多，散發(fā)出菌種獨(dú)有的芳香氣味，培養(yǎng)結(jié)束[3]。

4.3發(fā)酵罐培養(yǎng)

發(fā)酵罐培養(yǎng)主要流程是：培養(yǎng)基配制-裝入發(fā)酵罐-滅菌（當(dāng)氣壓達(dá)0.12 Mpa、溫度達(dá)125℃時(shí)開始計(jì)時(shí)，35 min可以完成滅菌，滅菌要徹底，避免培養(yǎng)過程中雜菌感染）-冷卻-接種（三角瓶種）-發(fā)酵罐培養(yǎng)-接種栽培。

4.3.1發(fā)酵罐的選擇

選擇發(fā)酵罐既要考慮菌種生長(zhǎng)空間又要考慮操作安全與便捷，通過試驗(yàn)總結(jié)，一般選容量為1 000 L的發(fā)酵罐較好，一次可接種1萬棒（包），適宜各種規(guī)模企業(yè)的生產(chǎn)需求。

4.3.2檢查發(fā)酵罐與接種

在用發(fā)酵罐培養(yǎng)前應(yīng)先檢查好發(fā)酵罐攪拌系統(tǒng)、供氧系統(tǒng)、冷卻系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)等，保證各項(xiàng)設(shè)備可以正常使用，如有問題需及時(shí)調(diào)整，確保正常使用后向發(fā)酵罐里注入培養(yǎng)基，進(jìn)行滅菌處理并冷卻后接入三角瓶培養(yǎng)的液體菌種。

4.3.3發(fā)酵罐培養(yǎng)

在發(fā)酵罐培養(yǎng)過程中：一是嚴(yán)格控制供氧量。當(dāng)氣壓達(dá)氣壓0.02～0.04 Mpa時(shí)，將發(fā)酵罐的供氧系統(tǒng)調(diào)節(jié)到1.2～1.5 m3/h，若供氧量太低罐室內(nèi)溶氧深度不夠，菌種就會(huì)變黃；若供氧量過多，氣流也會(huì)影響菌絲球形成。二是嚴(yán)格控制溫度。溫度控制系統(tǒng)調(diào)節(jié)到25～28℃，使罐室與無凈空間溫度控制在25～28℃，最高不超過31℃，若溫度低于25℃，菌絲生產(chǎn)較慢；若溫度高于31℃，將會(huì)抑制菌絲生長(zhǎng)，甚至導(dǎo)致菌絲死亡。

4.3.4菌種貯藏

液體菌種培養(yǎng)好后應(yīng)當(dāng)立即開始接種，其保存時(shí)間為1～2 d，在適當(dāng)加壓和降溫條件下可以延長(zhǎng)到3 d，超過3 d就會(huì)自溶，必須作報(bào)廢處理。

5接種

5.1食用菌液體菌種接種方式的選擇

食用菌液體菌種接種包括兩種方式：一種是利用人工接種；一種是利用全自動(dòng)化機(jī)械設(shè)備接種。為確保接種過程不受雜菌感染，建議采用自動(dòng)化裝置設(shè)備接種。因人工接種速度慢，易導(dǎo)致感染，且劑量把握不一，接種后長(zhǎng)勢(shì)不一致，人工接種還因個(gè)人原因?qū)е赂腥尽?/p>

5.2食用菌液體菌種接種風(fēng)險(xiǎn)防控措施

一是采用自動(dòng)化設(shè)備接種：接種速度快、劑量準(zhǔn)，同時(shí)自動(dòng)化接種設(shè)備的發(fā)酵罐、接種管、出料泵、接種針都連接為同一整體，并在封閉條件下進(jìn)行，只要消毒滅菌徹底，一般不會(huì)感染。二是充分利用發(fā)酵罐培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基（液）的溶氧作用，發(fā)酵罐會(huì)提高溶氧濃度、對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行充分混合均勻，給菌種生長(zhǎng)提供較好的環(huán)境，避免了液體菌種接種營(yíng)養(yǎng)風(fēng)險(xiǎn)。三是采用速效營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)，降低接種風(fēng)險(xiǎn)。速效營(yíng)養(yǎng)作用于液體菌種接種時(shí)菌絲體擴(kuò)張初期量少體弱時(shí)的能量補(bǔ)充，提高菌絲活力，較好地完成過渡到消化主料的狀況，減少接種營(yíng)養(yǎng)風(fēng)險(xiǎn)。

6食用菌液體菌種制作的缺點(diǎn)

液體菌種雖然品質(zhì)好、優(yōu)勢(shì)多，但也同樣存在缺點(diǎn)，在生產(chǎn)上一定要結(jié)合實(shí)際情況進(jìn)行優(yōu)化。一是設(shè)備一次性投入較大，一般企業(yè)難以接受；二是發(fā)酵罐規(guī)格選擇較難，規(guī)格小不利益菌絲生長(zhǎng)，規(guī)格大的發(fā)酵罐安全系數(shù)較低；三是制作和培養(yǎng)對(duì)環(huán)境要求較高，接種室最低都要求達(dá)百萬級(jí)以上的凈化空間，否則雜菌感染風(fēng)險(xiǎn)較大；四是接種后發(fā)酵罐內(nèi)室清洗難度大，容易引發(fā)二次感染；液體菌種接種完后，要對(duì)發(fā)酵罐及相關(guān)配套設(shè)備進(jìn)行徹底清洗，若沒有徹底清洗干凈，再次使用時(shí)，殘留在罐室壁上、接種管上等的殘留物會(huì)成為污染源，導(dǎo)致培養(yǎng)失敗。

7食用菌液體菌種在生產(chǎn)上的應(yīng)用

7.1液體菌種應(yīng)用現(xiàn)狀

從生產(chǎn)上看，金針菇液體菌種生產(chǎn)技術(shù)很成熟，用量大，規(guī)模以上的企業(yè)基本都應(yīng)用液體菌種進(jìn)行工廠生產(chǎn)并取得較好的經(jīng)濟(jì)效益。其次是杏鮑菇，原袋栽杏鮑菇多用固體菌種接種，隨著液體菌種研發(fā)技術(shù)的不斷深入，袋栽杏鮑菇也逐漸從固體菌種轉(zhuǎn)向液體菌種，應(yīng)用范圍日趨擴(kuò)大。繡針菇、平菇、海鮮菇、榆黃蘑、黑皮雞棕、木耳、豬肚菌、香菇等食用菌也開始探索使用液體菌種。實(shí)踐證明，袋栽繡針菇、平菇、海鮮菇、榆黃蘑、黑皮雞棕、豬肚菌等品種都有經(jīng)營(yíng)主體應(yīng)用液體菌種栽培取得較好的經(jīng)濟(jì)效益，少數(shù)經(jīng)營(yíng)主體因技術(shù)不成熟受到損失。

7.2液體菌種在香菇生產(chǎn)上的應(yīng)用

將液體菌種轉(zhuǎn)為固體菌種接入香菇袋栽料（生產(chǎn)菌棒），即前一段應(yīng)用液體菌種培養(yǎng)技術(shù)，把液體菌種培養(yǎng)好后，將液體菌種轉(zhuǎn)接到固體菌包（短棒）培養(yǎng)基上，在20 d左右就完全占領(lǐng)栽培料（菌棒），再用固體菌種按每棒（生產(chǎn)菌棒）4～5個(gè)接種口的方式接種到栽培料（生產(chǎn)菌棒）上，既充分利用液體菌種生長(zhǎng)快、活力強(qiáng)、一致性強(qiáng)、品質(zhì)好、成本低等優(yōu)勢(shì)，有效解決雜菌感染的問題，取得較好的成效。

參考文獻(xiàn)

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[2]王謙，劉敏，李天月.食用菌液體菌種培養(yǎng)技術(shù)的研究與應(yīng)用[J].醫(yī)學(xué)研究與教育，2011，28（6）：62-65，93.

[3]李志香.食用菌液體菌種培養(yǎng)技術(shù)研究[J].山東教育學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，18（5）：98-99.

（貴州省六盤水市水城區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局李真進(jìn)）