低魚粉飼料添加復(fù)方中草藥對(duì)大菱鲆幼魚生長、腸道消化酶活性、抗病力及養(yǎng)殖水質(zhì)的影響

摘" 要：為探究低魚粉飼料添加不同復(fù)方中草藥對(duì)大菱鲆（Scophthalmus maximus）幼魚生長、腸道消化酶活性、抗病力及養(yǎng)殖水質(zhì)的影響，實(shí)驗(yàn)以450尾大菱鲆幼魚為研究對(duì)象，分為5組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾，設(shè)計(jì)1個(gè)正常魚粉組作為正對(duì)照組（含50%魚粉，D1組）、1個(gè)低魚粉組作為負(fù)對(duì)照組（30%魚粉，D2組），在負(fù)對(duì)照組基礎(chǔ)上分別添加2%的3組不同復(fù)方中草藥，分別命名為D3、D4和D5組。養(yǎng)殖周期8周。結(jié)果顯示，低魚粉條件下，添加3組不同復(fù)方中草藥對(duì)大菱鲆幼魚成活率無顯著影響；幼魚終末體重、增重率和蛋白質(zhì)效率在D5組顯著高于負(fù)對(duì)照組，與正對(duì)照組無顯著差異；D5組飼料系數(shù)最低，顯著低于負(fù)對(duì)照組，與正對(duì)照組無顯著差異。血清總蛋白和球蛋白含量在D4、D5組顯著高于正負(fù)對(duì)照組（Plt;0.05），血清溶菌酶含量、堿性磷酸酶活性、IgM和髓過氧化物酶活性在D3～D5組顯著高于負(fù)對(duì)照組（Plt;0.05）。與負(fù)對(duì)照組相比，飼料中添加中草藥（D3～D5組）后顯著提高了幼魚腸道胰蛋白酶活性（Plt;0.05），淀粉酶和脂肪酶活性則在D4和D5組顯著升高（Plt;0.05）。投喂6 h后，D2～D5組水體氨氮、亞硝酸鹽、磷酸鹽含量均顯著降低，均在D5組出現(xiàn)最低值（Plt;0.05）；通過鰻弧菌攻毒實(shí)驗(yàn)48 h，三組復(fù)方中草藥均能不同程度的提高幼魚成活率，其中以D5組幼魚累積死亡率最低。研究結(jié)果表明，在30%低魚粉條件下，飼料中添加2%的復(fù)方中草藥（白術(shù)∶綿馬貫眾∶板藍(lán)根∶麩炒神曲=1∶1∶1∶1）可促進(jìn)大菱鲆幼魚生長性能，提高抗病力、消化酶活性、血清生化指標(biāo)，降低水體氨氮、亞硝酸鹽氮、活性磷酸鹽含量。

關(guān)鍵詞：大菱鲆（Scophthalmus maximus）；復(fù)方中草藥；生長；酶活性；抗病力；水質(zhì)

中圖分類號(hào)：S965.399文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

大菱鲆（Scophthalmus maximus）自1992年從歐洲引進(jìn)中國，因其生長速度快、肉質(zhì)鮮美，已成為中國北方重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)魚類^[1]。近年來，由于水產(chǎn)養(yǎng)殖的快速發(fā)展和養(yǎng)殖水質(zhì)的污染等原因，導(dǎo)致病害頻發(fā)，2006年及2015年的大菱鲆藥物殘留事件給大菱鲆產(chǎn)業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失^[2]，中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部也規(guī)定，自2020年7月1日起，飼料端全面禁抗。因此，亟需開發(fā)安全、無殘留的水產(chǎn)飼料免疫增強(qiáng)劑以提高海水魚的免疫能力。

中草藥富含生物堿、有機(jī)酸、揮發(fā)油、氨基酸和植物多糖等多種活性成分，具有營養(yǎng)和藥效雙重功效 ^[3]，研究表明，中草藥具有促進(jìn)魚體生長性能，調(diào)節(jié)腸道健康，刺激消化酶分泌和增強(qiáng)魚體免疫力等多種功能，因此，開發(fā)海水魚配合飼料中各種有效的中草藥飼料添加劑替代抗生素成為必然的發(fā)展趨勢(shì)。然而，目前關(guān)于中草藥在水產(chǎn)上的應(yīng)用研究報(bào)道較少，其使用的復(fù)配形式和應(yīng)用主體的各異使其效果差異也較大，而且中草藥對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物確切的作用機(jī)理并不清楚^[4]。金銀花（Lonicera japonica）、連翹（Forsythia suspensa）、蒲公英（Taraxacum mongolicum）、綿馬貫眾（Mianma Guanzhong）和板藍(lán)根（Isatis tinctoria）具有抗菌、抗病毒和增強(qiáng)機(jī)體免疫的效果，其成分多為有機(jī)酸（金銀花）、黃酮類物質(zhì)（綿馬貫眾）、苯乙醇苷（連翹）、蒲公英寡肽（蒲公英）、萜類（連翹、綿馬貫眾）、吲哚類（板藍(lán)根）等^[5-9]；黨參（Codonopsis pilosula）、焦山楂（Crataegus pinnatifida）、山藥（Dioscorea polystachya）、白術(shù)（Atractylodes macrocephala）、麩炒神曲（Triticum aestivum L.等）等具有健脾益氣、消食導(dǎo)滯等功效，其有效成分多為5-羥甲基糠醛（焦山楂）、麥角固醇（麩炒神曲）、黃酮類（麩炒神曲、焦山楂）、多糖（黨參、白術(shù)、山藥）、皂苷（黨參、山藥）^[10-13]。據(jù)此，該研究根據(jù)“促消化、提免疫”的中草藥配伍理論，將金銀花、連翹、炒麥芽（Hordeum vulgare）、炒谷芽（Oryza sativa L.或Setaria italica（L.）Beauv.）、麩炒神曲、黨參、山藥、蒲公英、白術(shù)、綿馬貫眾和板藍(lán)根11種中草藥配伍成三副不同的復(fù)方中草藥，考察不同配方中草藥在低魚粉飼料中對(duì)大菱鲆幼魚生長、免疫、腸道生理健康及養(yǎng)殖水質(zhì)的影響，以期為中草藥在大菱鲆低魚粉飼料中的應(yīng)用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼料制作

中草藥添加劑：根據(jù)中藥配伍理論，以提高腸道消化能力和增強(qiáng)免疫力為主要目的，設(shè)計(jì)3組復(fù)方中草藥配方（購于當(dāng)?shù)赝侍茫?。配方Ⅰ由金銀花（50 g）、連翹（50 g）、炒麥芽（50 g）、黨參（50 g）組成；配方Ⅱ由焦山楂（50 g）、炒谷芽（50 g）、山藥（50 g）、蒲公英（60 g）組成；配方Ⅲ由白術(shù)（50 g）、綿馬貫眾（50 g）、板藍(lán)根（50 g）、麩炒神曲（50 g）組成。中草藥熬制常規(guī)操作^[2]，熬制成湯藥冷卻，6層紗布過濾殘?jiān)糁胁菟幖逡?，定容?00 mL容量瓶，即1 mL藥液相當(dāng)于1g中草藥，按組分裝瓶標(biāo)號(hào)放4℃?zhèn)溆?。飼料配方和營養(yǎng)組成見表1。以魚粉和酪蛋白為主要蛋白源，魚油和豆油為主要脂肪源。設(shè)計(jì)魚粉含量為50%的正對(duì)照組，魚粉含量為30%的負(fù)對(duì)照組（用大豆?jié)饪s蛋白等蛋白替代魚粉）。在負(fù)對(duì)照組基礎(chǔ)上分別添加2%的3種不同復(fù)方中草藥藥液，共配制成5組實(shí)驗(yàn)飼料，分別命名為D1、D2、D3、D4和D5組。制作飼料時(shí)，所有飼料原料粉碎過80目篩，按飼料配方表（表1）混合均勻，加入魚油及適量水再次混勻，經(jīng)螺旋擠壓機(jī)加工成粒徑3 mm的飼料顆粒，60℃烘干后放置-20℃冰箱備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)用魚和實(shí)驗(yàn)條件

養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)在山東省海洋資源與環(huán)境研究院全封閉水循環(huán)系統(tǒng)進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)魚苗購自山東科合海洋高技術(shù)有限公司。正式開始實(shí)驗(yàn)之前將實(shí)驗(yàn)魚放入藍(lán)色圓柱形塑料養(yǎng)殖桶（直徑70 cm、高80 cm、水深50 cm）中暫養(yǎng)1周。暫養(yǎng)結(jié)束后，禁食24 h，挑選體格健壯、規(guī)格均一的大菱鲆幼魚[初始體質(zhì)量（23.35±0.02）g]隨機(jī)分成5組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾魚。養(yǎng)殖周期8周，每天投喂2次（8∶30、16∶30），投喂量為魚體質(zhì)量的1.2%～1.5%，投喂結(jié)束后統(tǒng)計(jì)殘餌量。養(yǎng)殖期間如有死魚記錄數(shù)量并稱重。整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，養(yǎng)殖條件參照SONG Z D等^[14]。

1.3 樣品采集

養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，禁食24h，采用丁香酚麻醉，以桶為單位稱重量，記錄每桶實(shí)驗(yàn)魚的尾數(shù)和體質(zhì)量，計(jì)算成活率、增重率和飼料系數(shù)。每桶隨機(jī)選擇12尾幼魚，分別測(cè)體重、體長，解剖內(nèi)臟并分離肝臟稱重，取其腸組織用于消化酶測(cè)定；血樣4℃靜置4h，4 000 r/min離心10 min，取血清，-70℃待測(cè)。另外，每桶取10尾魚，進(jìn)行鰻弧菌攻毒實(shí)驗(yàn)。

1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.4.1 生長指標(biāo)

存活率（survival rate， SR， %）=Nf /Ni×100；

增重率（weight gain rate， WGR，%）=（Wt–W0）/W0×100；

飼料系數(shù)（feed conversion ratio， FCR）=Wf /（Wt–W0）；

肥滿度（codition factor， CF， g/cm³）=魚體重（g）/魚體長（cm）³×100

蛋白質(zhì)效率（protein efficiency ratio， PER）=[Wt–W0]/[Wf×Cp]。

式中：W0為實(shí)驗(yàn)開始時(shí)魚體質(zhì)量（g），Wt為實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚體質(zhì)量（g），Wf為攝食量（g），Cp為飼料蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)，Nf、Ni分別為實(shí)驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)實(shí)驗(yàn)魚存活尾數(shù)。

1.4.2 血清酶活性測(cè)定

血清中溶菌酶（lysozyme，LZM）、總蛋白（Total protein，TP）、白蛋白（Albumin， ALB）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase， SOD）、髓過氧化物酶（Myeloperoxidase， MPO）和堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase， ALP）均采用南京建成生物工程研究所試劑盒測(cè)定；免疫球蛋白M（Immunoglobulin M， IgM）采用上海酶聯(lián)生物公司ELISA試劑盒測(cè)定。

1.4.3 腸道消化酶活性測(cè)定

將3尾魚體腸道混合稱取于預(yù)冷的生理鹽水（樣品質(zhì)量與生理鹽水體積比為1∶9）中冰浴勻漿，然后5 000 r/min離心10 min，取上清液用于消化酶指標(biāo)測(cè)定。腸道胰蛋白酶（trypsin）、淀粉酶（amylase）、脂肪酶（lipase）活性均采用南京建成生物工程研究所試劑盒測(cè)定，具體操作嚴(yán)格按照各試劑盒說明書執(zhí)行。酶液蛋白質(zhì)濃度采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定。

1.4.4 水樣采集及指標(biāo)測(cè)定

在養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)的中后期，于上午投喂飼料后排出殘餌后，封閉循環(huán)水，將養(yǎng)殖桶內(nèi)水體積控制在0.10 m³左右，在封閉循環(huán)水后的第6個(gè)小時(shí)取水樣，方法如下：每桶均在同一部位取樣，即離水面15 cm處采集水樣，置于4℃冰箱保存，于48 h內(nèi)測(cè)定水體中氨氮（NH3-N）、亞硝酸鹽氮（NO2-N）和活性磷酸鹽（PO4-P）的含量。取樣完畢，恢復(fù)循環(huán)水養(yǎng)殖。水質(zhì)指標(biāo)測(cè)定方法均采用《海洋調(diào)查規(guī)范》（GB/T 12763.4-2007）^[15]。

1.4.5 鰻弧菌攻毒實(shí)驗(yàn)

鰻弧菌培養(yǎng)方法參照郝甜甜等^[16]，8 000 r/min離心10 min，收集菌體沉淀，無菌PBS溶液稀釋至濃度為1×10⁸ CFU/mL。每桶取10尾魚，每尾注射100 μL的鰻弧菌進(jìn)行攻毒，注射后放入室內(nèi)塑料養(yǎng)殖桶內(nèi)，保證氧氣充足，每2 h觀察一次并及時(shí)撈出死魚，于48 h統(tǒng)計(jì)累積死亡率。

累積死亡率（Cumulative mortality rate， %）=100%×（病死魚尾數(shù)/初感染魚尾數(shù)）

1.5 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 17.0對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（One-Way ANOVA），差異顯著，則采用Duncan氏進(jìn)行多重檢驗(yàn)，顯著水平為0.05，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）形式表示。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方中草藥對(duì)大菱鲆幼魚生長性能和飼料利用情況的影響

由表2可知，養(yǎng)殖8周后，各組成活率均在90%以上，無顯著性差異（Pgt;0.05）。與負(fù)對(duì)照組相比，低魚粉飼料中添加復(fù)方中草藥Ⅲ（D5組）顯著提高了幼魚的終末體重和增重率（Plt;0.05），顯著降低了飼料系數(shù)（Plt;0.05），但與正對(duì)照組無顯著差異（Pgt;0.05）。復(fù)方中草藥Ⅰ和Ⅱ組幼魚終末體重和增重率與負(fù)對(duì)照組無顯著差異（Pgt;0.05）。各組間幼魚肥滿度無顯著差異（Pgt;0.05），蛋白質(zhì)效率呈現(xiàn)先下降后上升趨勢(shì)，D5組顯著高于D2和D3組（Plt;0.05），與D1和D4組無顯著差異（Pgt;0.05）。

2.2 復(fù)方中草藥對(duì)大菱鲆幼魚血清生化指標(biāo)的影響

由表3可知，與正對(duì)照組相比，負(fù)對(duì)照組顯著降低了幼魚血清溶菌酶含量、白蛋白含量、堿性磷酸酶、IgM和髓過氧化物酶酶活性（Plt;0.05）。低魚粉中添加三組復(fù)方中草藥，均能不同程度提高魚體的血液生化指標(biāo)。其中血清總蛋白和球蛋白含量在D4、D5組顯著高于正負(fù)對(duì)照組（Plt;0.05）；溶菌酶含量、堿性磷酸酶活性、IgM和髓過氧化物酶活在D3～D5組顯著高于負(fù)對(duì)照組（Plt;0.05）。各組間幼魚血清超氧化物歧化酶活性無顯著差異（Pgt;0.05）。

2.3 復(fù)方中草藥對(duì)大菱鲆幼魚腸道消化酶活性的影響

由表4可知， 與正對(duì)照組相比，負(fù)對(duì)照組顯著降低了幼魚腸道胰蛋白酶和脂肪酶活性（Plt;0.05）。與負(fù)對(duì)照組相比，D3～D5組可提高魚體腸道胰蛋白酶（Plt;0.05），淀粉酶和脂肪酶則在D4和D5組顯著升高（Plt;0.05）。

2.4 復(fù)方中草藥對(duì)大菱鲆養(yǎng)殖水質(zhì)的影響

該實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖1）顯示，投喂6 h后，D2～D5組水體氨氮、亞硝酸鹽氮、活性磷酸鹽含量均有降低趨勢(shì)，均在D5組出現(xiàn)最低值。與正負(fù)對(duì)照組相比，D5組氨氮含量分別下降了37.46%、26.50%，亞硝酸鹽氮含量分別下降32.57%、14.97%，活性磷酸鹽含量分別下降15.21%、8.78%。

2.5 復(fù)方中草藥對(duì)大菱鲆幼魚抗鰻弧菌感染能力的影響

五種飼料持續(xù)投喂大菱鲆幼魚8周后，以鰻弧菌攻毒48 h的累積死亡率見圖2，低魚粉飼料中添加復(fù)方中草藥能夠顯著降低魚體的累積死亡率，其中以D5組幼魚累積死亡率最低（46.67%），與正負(fù)對(duì)照組相比，分別降低了33.33%、46.15%（Plt;0.05）。

3 討論

3.1 低魚粉飼料中添加復(fù)方中草藥對(duì)大菱鲆幼魚生長性能的影響

該實(shí)驗(yàn)中植物蛋白源替代魚粉后，幼魚增重率顯著降低，與其他植物蛋白源替代魚粉在大菱鲆上的應(yīng)用研究結(jié)果一致^[14，17]。與負(fù)對(duì)照組相比，在低魚粉飼料中添加復(fù)方中草藥Ⅲ顯著提高了幼魚的增重率和蛋白質(zhì)效率，降低了幼魚飼料系數(shù)，表明復(fù)方中草藥Ⅲ可提升植物蛋白在大菱鲆體內(nèi)的轉(zhuǎn)化率，增強(qiáng)魚體對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，促進(jìn)魚體的生長發(fā)育^[18]，這與復(fù)方中草藥Ⅲ中的白術(shù)、麩炒神曲的健脾益氣、消食導(dǎo)滯等功效有關(guān)。張奕強(qiáng)等^[19]研究表明白術(shù)揮發(fā)油成分中的白術(shù)內(nèi)酯物質(zhì)可以調(diào)節(jié)動(dòng)物胃腸道運(yùn)動(dòng)，改善胃腸道功能，促進(jìn)機(jī)體生長。麩炒神曲的有效成分麥角固醇、黃酮類等物質(zhì)具有提高動(dòng)物攝食率和飼料消化吸收率等等功能^[13]。但該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在低魚粉飼料中添加復(fù)方中草藥Ⅰ和Ⅱ?qū)τ佐~的生長性能與負(fù)對(duì)照組無顯著差異，表明復(fù)方中草藥配方的不同，其產(chǎn)生的藥效也不同，其多樣成分共同影響著機(jī)體生長機(jī)制^[20]。此外，一些研究表明，飼料中添加復(fù)方中草藥可以提高養(yǎng)殖魚體的肥滿度^[2，21]，但在該實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)復(fù)方中草藥在低魚粉飼料中并未影響大菱鲆魚體的肥滿度。出現(xiàn)此差異的原因可能與飼料營養(yǎng)水平和養(yǎng)殖周期的不同有關(guān)^[20]。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明了，在大菱鲆低魚粉飼料中添加適量的復(fù)方中草藥不會(huì)對(duì)幼魚的生長造成不利影響。

3.2 低魚粉飼料中添加復(fù)方中草藥對(duì)大菱鲆幼魚血清生化指標(biāo)的影響

中草藥中含有的多種免疫活性物質(zhì)，如多糖、生物堿和有機(jī)酸等，能夠通過調(diào)節(jié)魚體的非特異性免疫能力來提高機(jī)體的免疫功能^[22]。該實(shí)驗(yàn)中，與負(fù)對(duì)照組相比，飼料中添加3組復(fù)方中草藥均有一定的促免疫和抗氧化作用。其中由白術(shù)、綿馬貫眾、板藍(lán)根、麩炒神曲組成的D5組顯著提高了大菱鲆幼魚血清中的溶菌酶、白蛋白、球蛋白、堿性磷酸酶和髓過氧化物酶。其原因與D5組中的白術(shù)、綿馬貫眾、板藍(lán)根等可提高免疫系統(tǒng)的作用有關(guān)^[23-24]。JI等^[25]研究發(fā)現(xiàn)，麩炒神曲可顯著提高真鯛魚體的免疫能力，魯振國等^[26]研究表明板藍(lán)根多糖可通過提高雛雞的血液生化指標(biāo)來調(diào)節(jié)其免疫系統(tǒng)；陳俊良等^[27]發(fā)現(xiàn)白術(shù)多糖在促進(jìn)南海麻黃雞免疫器官發(fā)育及血清生化指標(biāo)方面均有一定的意義，這也與該實(shí)驗(yàn)中提高血清溶菌酶等指標(biāo)結(jié)果一致；Jasamai等^[28]研究表明，綿馬貫眾中的活性成分乙酸乙酯、甾體類等可通過影響機(jī)體生化指標(biāo)來抑制炎癥介質(zhì)生物，從而提高動(dòng)物機(jī)體的免疫性能。這些中草藥在動(dòng)物機(jī)體上的應(yīng)用均與該實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。在該實(shí)驗(yàn)中，雖然三組復(fù)方中草藥均能增強(qiáng)魚體的免疫能力，但是響應(yīng)免疫指標(biāo)變化劑量并不一致，可能原因是不同配伍的中草藥制劑調(diào)控機(jī)體的免疫通路各有特點(diǎn)^[29]，具體機(jī)理還需進(jìn)一步研究。

3.3 低魚粉飼料中添加復(fù)方中草藥對(duì)大菱鲆幼魚腸道消化酶活性的影響

腸道是魚類消化、吸收營養(yǎng)物質(zhì)、免疫的重要場(chǎng)所，其消化酶活性高低也是評(píng)價(jià)魚類消化生理功能的重要指標(biāo)^[30]。該實(shí)驗(yàn)中的3組復(fù)方中草藥配方理論上均有保肝護(hù)膽、提高消化能力的功效。D3組中的炒麥芽具有促進(jìn)腸道蠕動(dòng)，上調(diào)腸道水通道蛋白2、3的表達(dá)，中和自由基，具有“炒香醒脾”的作用^[31]；D4組中的焦山楂、炒谷芽、山藥等具有消食健胃、行氣散瘀等功效^[32]；D5組的麩炒神曲和白術(shù)具有化水谷宿食，癥結(jié)積滯，健脾暖胃等功能，綿馬貫眾、板藍(lán)根具有保肝護(hù)膽，消炎抗病毒等功效^[33]。該實(shí)驗(yàn)中由白術(shù)、綿馬貫眾、板藍(lán)根、麩炒神曲組成的D5組顯著提高了魚體腸道胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，由金銀花、連翹、炒麥芽、黨參組成D3組顯著提高了魚體腸道胰蛋白酶活性，由焦山楂、炒谷芽、山藥、蒲公英組成的D4組顯著提高了魚體腸道淀粉酶和脂肪酶活性，與復(fù)方中草藥在歐洲鰻鱺（Anguilla anguilla）^[34]、日本花鱸（Lateolabrax japonicus）^[3]上的研究結(jié)果一致。其作用機(jī)理可能為：中草藥中的活性成分及營養(yǎng)成分可以促進(jìn)機(jī)體代謝和蛋白及酶類的合成，這可能是導(dǎo)致大菱鲆幼魚腸道消化酶活性提高的原因之一^[22]；此外，中草藥的某些有效成分可以通過調(diào)節(jié)“腦-腸”軸和腸道菌群來平衡動(dòng)物體內(nèi)的生態(tài)環(huán)境，從而增強(qiáng)機(jī)體的消化能力^{[32，35-36]}。

3.4 低魚粉飼料中添加復(fù)方中草藥對(duì)養(yǎng)殖水環(huán)境的影響

Chai等^[37]研究表明在魚類養(yǎng)殖中，魚體貯存利用的氮比例不超過飼料所輸入的氮的50%，且飼料主要的蛋白源魚粉中磷含量較高，不易被水產(chǎn)動(dòng)物利用^[38]，因此不能被消化吸收的氮和磷便被排放進(jìn)入養(yǎng)殖水體，造成水體污染。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，負(fù)對(duì)照組水體氨氮、亞硝酸鹽氮、活性磷酸鹽含量均顯著低于正對(duì)照組，表明通過合理配比動(dòng)植物蛋白源替代部分魚粉可在一定程度上提高飼料轉(zhuǎn)化率，降低水體中的氮磷排放，與在大西洋鮭上的研究結(jié)果一致^[39]；同時(shí)，3組不同復(fù)方中草藥均可以降低水體氨氮、亞硝酸鹽氮、活性磷酸鹽含量，且以D5組（白術(shù)∶綿馬貫眾∶板藍(lán)根∶麩炒神曲=1∶1∶1∶1）降氮磷效果最佳，其作用機(jī)理一方面與中草藥促消化、提高飼料的轉(zhuǎn)化率有關(guān)^[22]；另一方面可能與中草藥中的天然活性成分有關(guān)，其天然活性成分可以調(diào)節(jié)機(jī)體能量代謝，使其更多的能量用于魚體生長，減少了脫氨基作用^[3，40]。

3.5 低魚粉飼料中添加復(fù)方中草藥對(duì)大菱鲆幼魚抗鰻弧菌感染能力的影響

基于中醫(yī)理論配伍成的復(fù)方中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖中抗菌、抗病毒的應(yīng)用已有報(bào)道^[41]。該實(shí)驗(yàn)鰻弧菌攻毒后，低魚粉飼料中添加3種復(fù)方中草藥均顯著降低了大菱鲆幼魚的累積死亡率，與中草藥在軍曹魚（Rachycentron canadum）^[42]、譚曉晨等在團(tuán)頭魴^[43]上研究結(jié)果一致。其中以D5組（白術(shù)50 g、綿馬貫眾50 g、板藍(lán)根50 g、麩炒神曲50 g），累積死亡率最低（46.67%），其作用機(jī)理可能如下：1）中草藥藥劑中的多糖成分在一定程度上可以通過調(diào)控動(dòng)物機(jī)體的免疫器官發(fā)育和免疫指標(biāo)變化來增強(qiáng)其抵御外源致病菌的能力^[27，44]；2）中草藥的皂苷、多糖等成分可通過調(diào)節(jié)腸道菌群及代謝物而上調(diào)魚體免疫能力，從而緩解機(jī)體受到的弧菌脅迫^[45-46]；3）中草藥中的活性成分如生物堿、芳香族化合物等可通過干預(yù)炎癥相關(guān)細(xì)胞因子的釋放，增強(qiáng)對(duì)病原微生物的抑制作用，從而提高機(jī)體的免疫能力^[47]。

4 結(jié)論

綜上所述，在30%低魚粉條件下，飼料中添加2%的復(fù)方中草藥（白術(shù)∶綿馬貫眾∶板藍(lán)根∶麩炒神曲=1∶1∶1∶1）可促進(jìn)大菱鲆幼魚生長性能，提高抗病力、消化酶活性、血清生化指標(biāo)，降低水體氨氮、亞硝酸鹽氮、活性磷酸鹽含量。

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Effects of compound Chinese herbal medicine on growth， intestinal digestive enzyme activity， disease resistance and aquaculture water quality of juvenile Scophthalmus maximus

JIANG Kejun¹， XIANG Zhiwei²， LI Xiangpeng¹， HOU Shimin¹， LI Zhou ¹

（1.Modern Marine Indusrty Development Promotion Center Zhifu District Yantai City， Yantai 264006， Shandong China; 2.Shandong Marine Resource and Environment Research Institute， Shandong Key Laboratory of Marine Ecological Restoration， Yantai 264003， Shandong China）

Abstract：In order to investigate the effects of adding different compound Chinese herbs to low-fish meal diet on the growth， intestinal digestive enzyme activity， disease resistance and aquaculture water quality of juvenile Scophthalmus maximus， 450 juvenile Scophthalmus maximus were divided into 5 groups with 3 replicates per group and 30 fish per replicate. One normal fishmeal group was used as a positive control group （containing 50% fishmeal， D1 group） and one low fishmeal group was used as a negative control group （30% fishmeal， D2 group）. On the basis of the negative control group， three groups of different compound Chinese herbs were added with 2% respectively， which were named as D3， D4 and D5 groups. The breeding cycle is 8 weeks. The results showed that the survival rate of juvenile Scophthalmus maximus was not significantly affected by adding 3 groups of different compound Chinese herbs under the condition of low fish meal. The final body weight， weight gain rate and protein efficiency of juvenile fish in D5 group were significantly higher than those in negative control group， but there was no significant difference between D5 group and positive control group. The feed conversion ratio of D5 group was the lowest， which was significantly lower than that of negative control group， but had no significant difference from positive control group. Serum total protein and globulin contents in D4 and D5 groups were significantly higher than those in positive and negative control group （Plt;0.05）， serum lysozyme content， alkaline phosphatase activity， IgM and myeloperoxidase activities in D3～D5 groups were significantly higher than those in negative control group （Plt;0.05）. Compared with the negative control group， the supplementation of Chinese herbal medicine （D3～D5 groups） significantly increased the intestinal trypsin activity of juvenile fish （Plt;0.05）， and the amylase and lipase were significantly increased in D4 and D5 groups （Plt;0.05）. After 6 h feeding， the contents of ammonia nitrogen， nitrite and phosphate in D2～D5 groups were significantly decreased， and the lowest values were found in D5 group （Plt;0.05）. Through Vibrio anguillae challenge test for 48 h， the three groups of compound Chinese herbs can improve the survival rate of juvenile fish in different degrees， and the cumulative death rate of juvenile fish in D5 group is the lowest. In summary， under the condition of 30% low fish meal， adding 2% compound Chinese herbal medicine （atractylodes∶dryopteris crassirhizoma∶isatis tinctoria∶massa medicata fermentata=1∶1∶1∶1） can promote the growth performance of juvenile turbot， improve disease resistance， digestive enzyme activity， serum biochemical indexes， and reduce the contents of ammonia nitrogen， nitrite nitrogen and active phosphate in water.

Keywords：Scophthalmus maximus; compound Chinese herbal medicine; grow; enzyme activity; disease resistance; water quality

作者簡介：姜柯君（1988- ），女，碩士，工程師，主要主要從事水產(chǎn)養(yǎng)殖研究。E-mail：dbnydxjkj@163.com。