劉衛(wèi)梅　劉建民　封　琳　付　剛

【摘要】 目的 檢測(cè)bcl-2和ki-67在結(jié)腸癌及癌前病變中的表達(dá)情況，并探討其臨床意義。方法 采用免疫組化方法檢測(cè)56例結(jié)腸癌，38例結(jié)腸腺癌，20例正常結(jié)腸粘膜，分別進(jìn)行bcl-2和ki-67蛋白的檢測(cè)。結(jié)果 bcl-2陽性表達(dá)率在腺癌與腺瘤中基本相同，陽性表達(dá)強(qiáng)度腺癌明顯高于腺瘤(P<0．01)，腺瘤和腺癌的陽性表達(dá)強(qiáng)度及表達(dá)率與正常大腸結(jié)膜相比差異有顯著性(P<0．01)。ki-67在腺癌中的表達(dá)強(qiáng)度及表達(dá)率明顯高于腺瘤(P<0．01)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0．01)。結(jié)論 bcl-2在結(jié)腸組織的惡性轉(zhuǎn)化中起著重要作用；ki-67的陽性表達(dá)及表達(dá)強(qiáng)度對(duì)診斷腺癌和監(jiān)測(cè)腺瘤癌變中有重要意義。

【關(guān)鍵詞】結(jié)腸癌；癌前病變；bcl-2蛋白；ki-67蛋白

お

The expression of bcl-2 protein and ki-67 protein in colon cancer and precancerous lesions and Its chinical significance

LIU Wei-mei,LIU Jian-min,FENG Lin,et al.Department of Pathology,The Second Jiaozuo Peoples Hospital,Henan 454100,China

【Abstract】 Objective Detecting the bcl-2 and ki-67 in the expression of colon cancer and precancerous lesions and and discussing its clinical significance.Methods Testing 56 example colon cancers, 38 example colon adenocarcinoma, 20 example normal colon mucous membrane with immunohistochemistry, and testing bcl-2 and the ki-67 protein separately.Results The rate of bcl-2 positive expression in adenoma and adenocarcinoma is basically the same, the intensity of positive expression of adenocarcinoma is significantly higher than adenomas(P<0．01), Compared to the positive expression strength and expression rate of conjunctiva,there are significant difference on adenoma and adenocarcinoma(P<0．01).ki-67 in adenocarcinoma's expression intensity and expression rate is significantly higher than the rate of adenoma(P<0．01), the patients with lymph node metastasis are significantly higher than those non-lymph node metastasis(P<0．01).Conclusion bcl-2 play an important role in m alignant transformation of the colon organization; the ki-67 positive expression and the expression intensity has the important meaning to diagnoses in the adenocarcinoma and the monitor adenoma cancer.

【Key words】Colon Cancer;Precancerous lesions;bcl-2 protein；ki-67 protein

結(jié)腸癌是消化道常見的惡性腫瘤，發(fā)病率有逐年增高的趨勢(shì)，嚴(yán)重危害人類的健康。結(jié)腸癌在不同國(guó)家和地區(qū)發(fā)病率相差懸殊。一般而言，西北歐及北美國(guó)家發(fā)病率較高，而亞洲、南美洲和非洲國(guó)家則較低。我國(guó)結(jié)腸癌平均死亡年齡為60．08歲，其中男59．29歲，女61．05歲，死亡性別比為1．35，男高于女。結(jié)腸腺瘤是常見的癌前病變，是發(fā)展為癌的最危險(xiǎn)因素。腫瘤的發(fā)生發(fā)展與腫瘤細(xì)胞的凋亡密切相關(guān)^[1]，細(xì)胞凋亡是由基因調(diào)控的細(xì)胞程序性死亡^[2]。bcl-2是重要的細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)分子，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。ki-67參與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)，從理論上講，與腫瘤發(fā)生也可能有密切的關(guān)系。本組試驗(yàn)采用免疫組話的方法檢測(cè)bcl-2和ki-67在結(jié)腸癌及癌前病變中的表達(dá)及臨床意義。

1 材料與方法

1．1 一般資料 結(jié)腸癌手術(shù)標(biāo)本56例，內(nèi)鏡下電切腺瘤標(biāo)本38例均來自本院病理科，所有病例均經(jīng)過病理組織學(xué)證明。對(duì)56例結(jié)腸癌進(jìn)行分級(jí)，高分化14例，中分化24例，低分化18例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的34例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的22例。另選取20例正常結(jié)腸粘膜作對(duì)照。

1．2 免疫組化染色 標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋切片，切取4 μm厚切片。bcl-2和ki-67抗體和免疫組化試劑盒均購(gòu)于武漢博士德公司，采用免疫組化SABC法，基本步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。切片脫蠟入水；3%H2O₂處理5～10 min；正常山羊血清孵育20 min；加一抗1～2 h；加生物素標(biāo)記二抗，加SABC(鏈霉素合素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物)20 min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封固，陽性對(duì)照用一直的陽性片作對(duì)照，陰性對(duì)照用PBS代一抗。

1．3 結(jié)果判斷 bcl-2以細(xì)胞膜、細(xì)胞漿顯示棕黃色或棕褐色顆粒為陽性，ki-67陽性表現(xiàn)為細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。選取5個(gè)不同高倍視野（×100），每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，取其平均值為細(xì)胞的陽性率，參照文獻(xiàn)^[3-5]，陽性細(xì)胞數(shù)≥50%為強(qiáng)陽性(+++)，30%～49%為陽性(++)，10%～29%為弱陽性(+)，<10%為陰性。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)分析采用確切概率法(Fishers Exact Test或χ²檢驗(yàn))，應(yīng)用SPSS 11．5軟件包完成，以P<0．05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 bcl-2胞膜/胞漿表達(dá) 56例結(jié)腸腺癌中弱陽性(+)3例，陽性(++)7例，強(qiáng)陽性(+++)33例，表達(dá)率為76．79%；38例結(jié)腸腺瘤中弱陽性(+)12例，陽性(++)14例，強(qiáng)陽性(+++)2例，表達(dá)率為73．68%；20例正常黏膜中弱陽性(+)1例，陽性(++)2例，表達(dá)率為15%。腺癌與腺瘤的陽性表達(dá)率基本相同，腺癌的陽性表達(dá)強(qiáng)度明顯高于腺瘤(P<0．01)。二者的陽性表達(dá)率及表達(dá)強(qiáng)度與正常結(jié)腸粘膜相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．01)。

2．2 ki-67細(xì)胞核表達(dá) 56例結(jié)腸腺癌中弱陽性(+)2例，陽性(++)18例，強(qiáng)陽性(+++)34例，表達(dá)率為96．43%；38例結(jié)腸腺瘤中弱陽性(+)11例，陽性(++)4例，強(qiáng)陽性(+++)3例，表達(dá)率為47．37%；20例正常黏膜中無1例表達(dá)。結(jié)腸腺癌的陽性表達(dá)率及表達(dá)強(qiáng)度相助高于腺瘤(P<0．01)。

2．3 cl-2和ki-67蛋白陽性與結(jié)腸癌組織分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系(表1)。

3 討論

ki-67為細(xì)胞增殖的一種標(biāo)記。在細(xì)胞凋亡中S、G2、M期均有表達(dá)，它是一種增殖抗原，主要定位于細(xì)胞核，與細(xì)胞周期密切相連，在有絲分裂中起著維持DNA有規(guī)則結(jié)構(gòu)的重要作用。

ki-67參與細(xì)胞周期的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，理論上，可作為診斷和預(yù)測(cè)腫瘤對(duì)治療的敏感度及其結(jié)局等方面的標(biāo)志物，在腫瘤的分級(jí)、增生程度、預(yù)后的預(yù)測(cè)中均有一定的意義。

本組研究顯示：結(jié)腸腺癌中的陽性表達(dá)強(qiáng)度及表達(dá)率均高于腺瘤(P<0．01)。ki-67的陽性表達(dá)隨著腺癌的組織學(xué)降低而增高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達(dá)情況差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)。結(jié)果表明，ki-67陽性表達(dá)及表達(dá)強(qiáng)度對(duì)診斷腺癌和監(jiān)視腺瘤癌變有重大意義，對(duì)結(jié)腸癌早期發(fā)現(xiàn)有較高價(jià)值，而與結(jié)腸腺癌的分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性。國(guó)外有學(xué)者研究指出：癌細(xì)胞分化程度越低，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者ki-67表達(dá)越強(qiáng)^[6]。本結(jié)果似有不同，有待進(jìn)一步研究。

bcl-2是從濾泡性淋巴瘤中分離處的一種癌基因，也是細(xì)胞凋亡抑制因子，具有抑制細(xì)胞凋亡、延長(zhǎng)細(xì)胞壽命的功能。bcl-2作為抑制凋亡的基因，其過表達(dá)能延長(zhǎng)細(xì)胞壽命，使已有DNA受損的細(xì)胞生存期延長(zhǎng)，以致增加其他基因突變的機(jī)會(huì)，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生^[7]。本組研究中，正常結(jié)腸粘膜、腺瘤和腺癌中均有bcl-2表達(dá)，腺瘤與腺癌的陽性表達(dá)率亦無顯著性，腺癌的表達(dá)強(qiáng)度則明顯高于腺瘤(P<0．01)，腺瘤及腺癌的陽性表達(dá)強(qiáng)度和表達(dá)率與正常結(jié)腸粘膜相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．01)。表明bcl-2的陽性表達(dá)強(qiáng)度和表達(dá)率隨著結(jié)腸組織的惡性轉(zhuǎn)化呈上升趨勢(shì)，尤以表達(dá)強(qiáng)度為甚。提示bcl-2蛋白表達(dá)在結(jié)腸組織惡性轉(zhuǎn)化中起重要作用。同時(shí)還顯示bcl-2的陽性表達(dá)與結(jié)腸癌的分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0．05)。

參 考 文 獻(xiàn)

［1］ 王曉暉.淺析網(wǎng)絡(luò)媒體對(duì)公共關(guān)系實(shí)踐活動(dòng)的影響.國(guó)際關(guān)系學(xué)院學(xué)報(bào),2002，6：60-62.

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