成建忠　袁明龍　王偉祿

摘要對(duì)口蹄疫疫苗的研制歷史和不同疫苗的特性進(jìn)行了綜述，以期為疫苗的合理應(yīng)用提供技術(shù)幫助。

關(guān)鍵詞口蹄疫；疫苗；研究進(jìn)展

中圖分類號(hào) S855.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-5739（2009）04-0234-01

口蹄疫是由口蹄疫病毒（FMDV）所引起的偶蹄家畜的急性傳染病，羊、豬和牛都可患此病，有時(shí)還可以傳染給人，其特征是在口腔黏膜和鼻、蹄、乳頭等部位皮膚形成水泡和爛斑。本病傳播迅速，危害性強(qiáng)，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為國(guó)際動(dòng)物貿(mào)易間必須檢疫的A類動(dòng)物傳染病，我國(guó)農(nóng)業(yè)部也將其劃定為一類動(dòng)物傳染病，本病也是最具政治經(jīng)濟(jì)色彩的烈性動(dòng)物疫病。因此，各國(guó)都在致力于控制和消滅口蹄疫的工作，而對(duì)大多數(shù)國(guó)家來說，疫苗免疫是防控本病的關(guān)鍵措施。

口蹄疫疫苗的研制最早由Belin（1927）在20世紀(jì)初期提出，到20世紀(jì)40年代達(dá)到了廣泛研究的程度。第一個(gè)應(yīng)用的滅活疫苗是Waldmann等（1937）用人工感染的牛舌上皮和水泡液中的病毒制得，應(yīng)用牛舌上皮細(xì)胞需要收集足夠的細(xì)胞材料，并且整個(gè)收集過程要求保持無菌，這促進(jìn)了對(duì)適宜細(xì)胞系的研究。1947～1954年Frenkel在牛舌上皮細(xì)胞增殖FMD獲得成功，方法簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉。1965年Telling和Elsworth開始用發(fā)酵罐大量生產(chǎn)懸浮細(xì)胞，現(xiàn)在幾乎所有的FMD疫苗都以這種方法生產(chǎn)?？谔阋咭呙绲臏缁钭畛跏褂眉兹?，但研究證明該方法有活病毒殘留，而且甲醛滅活FMDV后，有效免疫抗原146S病毒粒子損失較大。1959年Brown和Crick首先用乙酰乙烯亞胺（AEI）滅活病毒制造疫苗[1]，1975年Bahnemann首創(chuàng)了口蹄疫的二乙烯亞胺（BEl）滅活苗[2]，現(xiàn)今廣泛應(yīng)用的滅活劑主要還是以乙酰乙烯亞胺（AEI）、二乙烯亞胺（BEl）和β－丙內(nèi)脂為基礎(chǔ)。目前應(yīng)用于商品疫苗大規(guī)模生產(chǎn)FMD病毒抗原的技術(shù)有3種：①牛舌上皮組織生產(chǎn)的Frenkel培養(yǎng)法；②在轉(zhuǎn)瓶單層BHK-21傳代細(xì)胞上生產(chǎn)的單層培養(yǎng)法；③在發(fā)酵罐中BHK-21傳代細(xì)胞上生產(chǎn)的懸浮培養(yǎng)法。我國(guó)從1950開始研制FMD疫苗，經(jīng)歷了以結(jié)晶紫和福爾馬林為滅活劑、甘油為佐劑的滅活苗、野毒適應(yīng)于乳鼠（乳兔、雞胚、鴨胚或細(xì)胞）連續(xù)傳代使毒力致弱的弱毒苗和以二乙烯亞胺（BEI）為滅活劑的油佐劑細(xì)胞滅活苗等3個(gè)階段[3]。FMDV培養(yǎng)物中通常包含高濃度的細(xì)胞和介質(zhì)成分，而動(dòng)物對(duì)粗制疫苗產(chǎn)生副反應(yīng)的相關(guān)報(bào)道已有許多，這就促進(jìn)了濃縮和純化滅活抗原的研究工作。最早應(yīng)用的濃縮方法和隨后被應(yīng)用于工業(yè)規(guī)模化生產(chǎn)的方法是通過聚乙二醇（PEG）沉淀和超過濾。從濃縮物中生產(chǎn)純化抗原的超濾法，首次由Adamovicz等（1974）報(bào)道，該方法實(shí)現(xiàn)了1 000倍的濃縮并去除了大部分（95％）外源蛋白。研制濃縮和純化滅活FMDV抗原的方法，促進(jìn)了高質(zhì)量疫苗的生產(chǎn)及儲(chǔ)藏，這為緊急抗原庫(kù)的建立奠定了基礎(chǔ)。Cox等[4]研究了FMD高效苗對(duì)綿羊和豬的保護(hù)性，證明高效苗能快速達(dá)到血清陽轉(zhuǎn)，抗體峰值可分別維持6個(gè)月（綿羊）和7個(gè)月（豬），以同源FMDV強(qiáng)毒攻擊免疫后7個(gè)月的豬，能得到100％保護(hù)，而且豬白細(xì)胞介素6、8、12（IL-2、IL-8、IL-12）的效價(jià)也顯著上升。我國(guó)目前使用的豬口蹄疫濃縮苗中的140S抗原含量較國(guó)內(nèi)原有普通疫苗提高了8倍，即達(dá)到了3.52μg/mL，最小免疫劑量為0.5mL/頭；以使用量（2mL/頭）免疫豬，最早免疫力產(chǎn)生時(shí)間為注苗后第15天，免疫持續(xù)期6個(gè)月，在4～8℃保存條件下有效期為1年，每頭份疫苗應(yīng)至少含3PD50。

常規(guī)疫苗中的佐劑一般反芻動(dòng)物采用氫氧化鋁膠或皂素（saponin），豬則廣泛使用不完全油佐劑。油佐劑苗更適用于豬，因?yàn)樨i需要FMDV抗原的持續(xù)刺激，以產(chǎn)生循環(huán)抗體的有效濃度[5]。油佐劑疫苗比氫氧化鋁膠或皂素疫苗具有良好的免疫力，是因?yàn)橛妥魟┮呙缰忻庖咴谒嘀懈嘁浴白匀弧毙问酱嬖?，因而免疫保護(hù)性更好[6]，氫氧化鋁膠疫苗免疫力僅維持4～6個(gè)月，油佐劑苗產(chǎn)生的免疫力持續(xù)時(shí)間顯著延長(zhǎng)，并減少了副作用[7]。Barnett等[8]觀察到氫氧化鋁膠疫苗1～3個(gè)月后效力明顯降低，而油佐劑疫苗未見相似的快速下降變化，這可能與抗原被氫鋁膠疫苗在一氧化鋁吸收后，抗原結(jié)構(gòu)被破壞或VP1蛋白質(zhì)發(fā)生水解有關(guān)。同時(shí)，油佐劑疫苗提供的免疫力更具異源性，因此，在存有抗原變異株的地區(qū)更具明顯優(yōu)勢(shì)[9]。盡管油佐劑疫苗有許多優(yōu)點(diǎn)，但其也有不足之處，可造成注射部位結(jié)塊、壞死、腫脹等局灶性反應(yīng)，對(duì)肉品貿(mào)易產(chǎn)生直接的負(fù)面影響。免疫注射區(qū)的不良反應(yīng)，主要是炎性反應(yīng)、注射性膿腫、囊腫和肉牙腫等的形成[10]，這一局灶性腫塊要完全被吸收，需花費(fèi)很長(zhǎng)時(shí)間，并取決于注射劑量、注射部位和動(dòng)物機(jī)體的健康狀況等因素，豬的局灶性反應(yīng)比牛更明顯。近年來，國(guó)際上推薦采用Montanide ISA 206和25作為油乳劑疫苗的佐劑，這類佐劑具有高通透性注射能力，速率達(dá)9.0S，能通過直徑0.8mm的注射器，產(chǎn)生的局灶反應(yīng)也小，免疫效果更好。FMD疫苗與其他疫病的抗原/疫苗聯(lián)合使用，并沒有發(fā)現(xiàn)任何對(duì)FMD抗原免疫反應(yīng)或其他疫苗誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)抑制問題，這些抗原/疫苗包括豬瘟、牛瘟、狂犬病、布氏桿菌病、豬細(xì)小病毒病和炭疽疫苗等。

近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，F(xiàn)MD基因工程疫苗如亞單位疫苗、可飼疫苗、合成肽疫苗、蛋白質(zhì)載體疫苗、基因缺失疫苗、活載體疫苗、核酸疫苗等處于積極探索之中，為口蹄疫新型疫苗的研制和開發(fā)提供了廣闊前景，但目前進(jìn)入實(shí)際應(yīng)用的僅口蹄疫合成肽疫苗。農(nóng)業(yè)部于2005年批準(zhǔn)中牧實(shí)業(yè)股份有限公司、申聯(lián)生物醫(yī)藥（上海）有限公司聯(lián)合申報(bào)的豬口蹄疫O型合成肽疫苗為一類獸用新生物制品，并核發(fā)了《新獸藥證書》。合成肽疫苗是一種僅含免疫決定簇組分的小肽，合成方便，質(zhì)量穩(wěn)定性高，不存在生物危害，基本避免發(fā)生不良反應(yīng)和異體蛋白引發(fā)的過敏反應(yīng)，可誘導(dǎo)高水平的中和抗體和免疫應(yīng)答，免疫持續(xù)期長(zhǎng)，并且具有較好的交叉保護(hù)反應(yīng)，能有效抵抗口蹄疫強(qiáng)毒的攻擊。目前在河南、河北、上海等許多省市試用，反應(yīng)良好，推廣應(yīng)用效果顯著，將在口蹄疫的防控中發(fā)揮更強(qiáng)更大的作用。

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