黃清南　黃　耀　趙　潔

[摘要] 目的 探討流式細胞術在檢測甲狀腺穿刺組織細胞角蛋白－19中的應用，評估其在進一步臨床診斷應用中的可行性。方法 取我院2006年1月~2008年6月手術切除甲狀腺腫物標本進行穿刺獲取組織并制備成單細胞懸液，采用流式細胞術檢測懸液中的CK-19表達；根據(jù)術后標本病理分為良性組（23例）及惡性組（17例）。結果 惡性組中，陽性表達13例（76.4％），良性組中100％陰性表達。靈敏度76.4％，特異性100％，準確度為90.0％；與國內(nèi)外采用免疫組化方法的靈敏度及特異性相當。結論 CK-19是鑒別良惡性甲狀腺腫瘤特異的及敏感的指標，采用流式細胞術能較準確地檢測甲狀腺穿刺組織中CK-19的表達，有進一步臨床診斷應用的可行性。

[關鍵詞] 甲狀腺腫瘤；流式細胞術；細胞角蛋白－19；細針穿刺

[中圖分類號] R7361[文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2009）12-18-02

Cytokeratins-19 Expression in Biopsy Specimens from Thyroid Neoplasm Detected by Flow Cytometry

HUANG QingnanHUANG YaoZHAO Jie

The Peoples of Futian District in Shenzhen，Guangdong 518033

[Abstract] Objective To study cytokeratins-19 expression in biopsy specimens from thyroid neoplasm detected by flow cytometry and estimate its clinical diagnosis utility. Methods The 50 biopsy specimens were collected after thyroid neoplasm exairesis from January 2006 to June 2008 in the foruth people's hospital of Shenzhen city.All the biopsy specimens were prepared in cell suspension and detected the cytekeratins-19expression，according to postoperative pathology diagnosis，all the specimens was divided into two groups：innocence group（23 cases） and m alignant group（17 cases）. Results 13 cases were positive expression（76.4%） in m alignant groups，all the case were negative expression， sensitivity was 76.4%，specificity was 100%，accuracy was 90%. The sensitivity and the specificity were correspondent to the approach by the immunohistochemisty. Conclusion Cytokeratins-19 is sensitive and specific marker. The approach by the flow cytometry can accuratelydetect the Ck-19 expression in thyroid biopsy specimen，theclinical diagnosis utility is feasible.

[Key Words] Thyroid neoplasms；Flow cytometry；Cytokeratins-19；Biopsy

流式細胞術具有檢測速度快、測量指標多，采集數(shù)據(jù)量大、分析全面、方法靈活等特點，其在腫瘤研究中已廣泛應用。流式細胞術已廣泛應用于石蠟標本[1]及新鮮穿刺標本[2]的腫瘤標志物的檢測。本研究主要通過采用流式細胞術對穿刺甲狀腺組織細胞角蛋白-19（Cytokeratins-19，CK-19）表達情況的測定，從而達到腫瘤定性的目的及評估性在進一步臨床診斷應用中的可行性。

1材料與方法

1.1標本來源

取我院2006年1月~2008年7月手術切除甲狀腺腫物標本進行細針穿刺獲取組織，其中男13例，女27例；良性病變23例（其中腺瘤8例，結節(jié)性甲狀腺腫大15例）；惡性病變17例（乳頭狀癌15例，濾泡癌2例）；平均年齡（42±8.6）歲。

1.2單細胞懸液的制作[3]

將獲取的穿刺標本反復用生理鹽水洗滌，以眼科剪將組織剪至勻漿狀加入5mLPBS液，用吸管吸取組織勻漿先以200目銅網(wǎng)過濾到試管內(nèi)離心沉淀3000r/min，3~5min后，再用PBS液洗三次，每次以1000r/min的低速離心5min去除細胞碎片，以350目尼龍網(wǎng)過濾去除細胞團塊，取上述細胞懸液，用白細胞計數(shù)板顯微鏡下計數(shù)并調細胞濃度為（1～2）×106個/mL。

1.3抗體標記

取約1×106細胞的懸液100μl，分別加入對照管及測定管，每管加入10μl CD45-PC5單抗，置室溫15min，離心洗滌后再加破膜劑Intraprep Rengent 1固定15min，經(jīng)洗滌再加入Reagent 2破膜，5min后加入CK19-FIFC置室溫暗處待機檢測。

1.4流式細胞儀測定

采用beckman-epics-XL流式細胞儀測定并用專業(yè)軟件處理數(shù)據(jù)。

1.5統(tǒng)計學處理

采用SPSS10.0軟件處理，計數(shù)資料的組間比較采用四格表FISHER精確概率法檢驗。靈敏度=癌的陽性例數(shù)/癌的總數(shù)×100%；特異度=良性總例數(shù)×100%；準確度= （癌的陽性例數(shù)+良性的陰性例數(shù)） / （癌的總例數(shù)+良性的總例數(shù)）。

2結果

在惡性組17例（乳頭狀癌15例，濾泡癌2例）中，陽性表達有13例（76.4％），良性組23例（其中腺瘤8例，結節(jié)性甲狀腺腫大15例）中陰性表達23例（100％）；兩組間CK-19的陽性表達率用四格表FISHER精確概率法檢驗，差別具有統(tǒng)計學意義，靈敏度=13/17×100％=76.4％，特異度100％，準確度90.0％。細胞角蛋白-19是鑒別良惡性甲狀腺腫瘤特異性及敏感的指標，采用流式細胞術檢測甲狀腺穿刺組織中CK-19的表達情況如表1。在甲狀腺腫瘤定性上敏感度、特異性及準確性高，有進一步臨床診斷應用的可行性。

3討論

甲狀腺腫瘤為我國較高發(fā)的腫瘤之一，及早明確甲狀腺腫瘤的性質對避免良性病變患者不必要的手術及改善惡性腫瘤患者的預后有相當重要的意義。盡管有很多檢查方法如超聲及CT及MRI等檢查技術用于甲狀腺腫瘤的診斷，但對于腫瘤定性上仍有很大局限。組織細胞病理學是腫瘤定性的主要方法，但對以組織結構改變?yōu)橹?，強調實質和間質成分關系的病變，如甲狀腺乳頭狀癌、濾泡狀癌與乳頭狀增生結節(jié)的鑒別上有困難[4]。

CK-19是可用于甲狀腺鑒別診斷的一種相對分子質量低的角蛋白[5]，Miettinen等[6]認為CK-19可區(qū)別乳頭狀癌和乳頭狀增生，Baloch[7]等其認為對濾泡型乳頭狀癌和其他濾泡性病變亦有區(qū)別作用，研究發(fā)現(xiàn)在甲狀腺良性病變中CK-19多為陰性，僅少數(shù)陽性表達，即使結甲和甲亢的乳頭狀增生結節(jié)大多亦為陰性，濾泡性癌中大多陽性并中度及強陽性，特別是在包膜浸潤處明顯陽性，而乳頭狀癌不論經(jīng)典型還是濾泡型基本都是中、強陽性表達，在癌周圍組織中一些散在浸潤腺體亦為明顯陽性，而不同于背景組織，提示CK-19陽性表達是濾泡細胞增生惡變的重要標志，不但可作為甲狀腺良、惡性病變，尤其是乳頭狀癌診斷的重要依據(jù)，而且可以提示一些惡性病變傾向，防止漏診。

目前CK-19的檢測主要是通過免疫組織化學方法進行，在甲狀腺穿刺組織用流式細胞術來檢測CK-19的表達，目前國內(nèi)外很少報道；本研究用手術切除標本模仿活體穿刺操作，以保持與活體操作的一致性；用穿刺組織制備成細胞懸液，再用流式細胞術來檢測CK-19的表達；從結果可以看到用本方法得出的CK-19的表達情況在甲狀腺腫瘤定性上與報道[8]用免疫組織化學方法得出的敏感度、特異度及準確度相近。由此可見，用流式細胞術來檢測甲狀腺穿刺組織CK-19的表達，有助于甲狀腺腫瘤的定性，且有進一步臨床診斷應用的可行性。

[參考文獻]

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[6] Miettinen M，Kovatich AJ，Karkkainen P. Keratin subsets in papillary and follicular thyroid lesions：a paraffin section analysis with diagnosis implications[J]. Vichows Arch，1997，431（6）：407-4l3．

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（收稿日期：2008-12-23）