蘇　紅　李　梅　王秀瑩等

[摘要]目的：探討宮頸癌中錯(cuò)配修復(fù)基因hMLHl、hMSH2及PCNA蛋白表達(dá)的關(guān)系及意義。方法：采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)68例宮頸癌中的bMLHl、hMSH2及PCNA蛋白表達(dá)。結(jié)果：①宮頸癌中，hMLHl、hMSH2及PCNA蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為57.35％、58.82％及72.06％。②在PCNA陽(yáng)性表達(dá)和陰性表達(dá)的宮頸癌病例中，hMLHl陽(yáng)性表達(dá)率分別為61.22％和47.37％，hMSI-12陽(yáng)性表達(dá)率分別為67.35％和36.84％。PCNA與hMSH2表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.05)。結(jié)論：hMSH2可能通過(guò)與PCNA蛋白相互作用參與宮頸癌的發(fā)生。

[關(guān)鍵詞]宮頸癌；hM_LHl；hMSH2；PCNA；免疫組織化學(xué)

[中圖分類號(hào)] R737.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1674-4721(2009]05(b)-011-02

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤，其發(fā)病機(jī)制目前仍不清楚。研究表明，由于體內(nèi)外各種因素的刺激造成的DNA損傷是其發(fā)展的重要原因。人體細(xì)胞存在DNA錯(cuò)配修復(fù)(DNA mismatch repair,MMR)系統(tǒng)，錯(cuò)配修復(fù)功能的完整是細(xì)胞DNA準(zhǔn)確復(fù)制和基因組穩(wěn)定的基本保證。該功能缺失與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，但其在子宮頸癌發(fā)生中的作用尚不清楚。hMLHl和hMSH2是錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)的2個(gè)重要成員。增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclearantigen。PCNA)與細(xì)胞DNA合成密切相關(guān)。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)68例宮頸癌的hMLHl、hMSH2及PCNA蛋白表達(dá)，探討宮頸癌中PCNA表達(dá)與hMLHl、hMSH2表達(dá)的關(guān)系及意義。

1資料與方法

1.1一般資料

選取大連婦產(chǎn)醫(yī)院2000～2002年收治的68例宮頸癌手術(shù)病例?；颊吣挲g為22～78歲，中位年齡40歲。所有標(biāo)本均經(jīng)4％中性甲醛固定，石蠟包埋，制成3～μm切片，HE染色，由兩位有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師進(jìn)行病理學(xué)診斷。

1.2試劑與方法

采用免疫組織化學(xué)SP法染色，切片常規(guī)脫蠟水化，微波加熱抗原修復(fù)，鼠抗人單克隆抗體hMLHl(1:50稀釋，美國(guó)Zymed Laboratories公司，克隆系：14)、鼠抗人單克隆抗hhMSH2(1:250稀釋，美國(guó)Zymed Laboratories公司，克隆系：FEll)、PCNA(1:400，克隆系：pc 10，美國(guó)NeoMarker公司)40cC孵育過(guò)夜，操作按SP試劑盒(北京中山生物技術(shù)有限公司)說(shuō)明書進(jìn)行。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。選取已知陽(yáng)性的切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3結(jié)果判定

hMLHl、hMSH2以細(xì)胞核或細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒的細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞，PCNA以核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞，計(jì)數(shù)5個(gè)高倍視野或500個(gè)細(xì)胞。對(duì)hMLHl、hMSH2判定：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與實(shí)質(zhì)細(xì)胞總數(shù)之比≥10％，判為陽(yáng)性表達(dá)，否則為陰性表達(dá)。PCNA判定：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與實(shí)質(zhì)細(xì)胞總數(shù)之比＞20％為陽(yáng)性表達(dá)，否則為陰性表達(dá)。結(jié)果均由兩位有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師采用雙盲法判定。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用)(2檢驗(yàn)，應(yīng)用SPSSl3.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 hMLHl、hMSH2及PCNA蛋白在宮頸癌中的表達(dá)

在宮頸癌中，hMLHl、hMSH2及PCNA蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為57.35％(39／68)、58.82％(40／68)及72.06％(49／68)，見(jiàn)圖1、2。

2.2 PCNA與hMLHl、hMSH2蛋白在宮頸癌中的表達(dá)關(guān)系

在PCNA陽(yáng)性表達(dá)與陰性表達(dá)的宮頸癌病例中，hMLHl陽(yáng)性表達(dá)率分別為61.22％和47.37％，hMSH2陽(yáng)性表達(dá)率分別為67.35％和36.84％。PCNA陽(yáng)性表達(dá)病例中，hMLHl、hMSH2表達(dá)率均較高，但PCNA表達(dá)與hMLHl表達(dá)無(wú)顯著相關(guān)關(guān)系(P＞0.05)。PCNA與hMSH2表達(dá)顯著相關(guān)(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

3討論

MMR基因是高度保守的看家基因，其功能完整保證了DNA復(fù)制的高保真性。突變或啟動(dòng)子甲基化能夠通過(guò)減少或抑制該類基因表達(dá)，使機(jī)體錯(cuò)配修復(fù)功能缺失，從而引起整個(gè)基因組的不穩(wěn)定以至腫瘤發(fā)生。hMLHl、hMSH2是MMR系統(tǒng)的重要成員，其編碼蛋白的主要功能是識(shí)別DNA錯(cuò)配并結(jié)合錯(cuò)配堿基，啟動(dòng)修復(fù)反應(yīng)。許多惡性腫瘤的發(fā)生伴隨著錯(cuò)配修復(fù)蛋白結(jié)構(gòu)或功能的異常，常表現(xiàn)為hMLHl、hMSH2蛋白表達(dá)的減少或增多。如大腸癌，常出現(xiàn)因錯(cuò)配修復(fù)基因突變或甲基化引起的蛋白表達(dá)減少。但有些惡性腫瘤，卻常出現(xiàn)hMLHl、hMSH2蛋白表達(dá)增多。本研究宮頸癌組織中，hMLHl、hMSH2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為57.35％、58.82％，也有較高表達(dá)。

有學(xué)者認(rèn)為增殖細(xì)胞核抗原在宮頸癌組織中其陽(yáng)性率顯著增高，腫瘤細(xì)胞過(guò)度增殖時(shí)會(huì)伴有DNA堿基錯(cuò)配增多，從而引起細(xì)胞錯(cuò)配修復(fù)蛋白合成代償性增多。PCNA在細(xì)胞增殖的啟動(dòng)上起重要作用。不溶性PCNA較穩(wěn)定，其量的變化與DNA合成一致，檢測(cè)其在細(xì)胞中的表達(dá)，可作為評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖狀態(tài)的一個(gè)指標(biāo)。

由于惡性細(xì)胞增殖旺盛，DNA復(fù)制頻繁且紊亂。DNA復(fù)制過(guò)程中出現(xiàn)錯(cuò)配的概率大大增加，hMLHl、hMSH2蛋白代償性的表達(dá)上調(diào)以啟動(dòng)錯(cuò)配修復(fù)反應(yīng)進(jìn)行。還有研究表明PCNA參與錯(cuò)配修復(fù)反應(yīng)。本研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌中PCNA與hMSH2表達(dá)呈正相關(guān)也支持上述觀點(diǎn)，提示錯(cuò)配修復(fù)蛋白與PCNA相互作用在宮頸癌發(fā)生中起重要作用。