康曉燕

(武夷學(xué)院化學(xué)與環(huán)境工程系，福建 武夷山 354300)

超聲提取—吸附分離—?dú)庀嗌V法測(cè)定柑桔中農(nóng)藥殘留

康曉燕

(武夷學(xué)院化學(xué)與環(huán)境工程系，福建 武夷山 354300)

建立了超聲波提取—吸附分離的前處理技術(shù)與氣相色譜法聯(lián)用，同時(shí)測(cè)定柑桔(CitrusreticucataBanco)中的抑霉唑和噻菌靈等農(nóng)藥殘留的方法，并對(duì)超聲波提取條件和吸附分離柱的填充結(jié)構(gòu)進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明，采用此法同時(shí)測(cè)定抑霉唑、噻菌靈等農(nóng)藥殘留，是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確、高效的方法。

柑桔(CitrusreticucataBanco)；抑霉唑；噻菌靈；超聲波提??；吸附分離；氣相色譜

柑桔(CitrusreticucataBanco)是世界第一大、我國(guó)第二大水果，是我國(guó)種植和出口的主要水果之一，也是閩北農(nóng)民脫貧致富的首選經(jīng)濟(jì)作物。然而，我國(guó)的柑桔質(zhì)量安全、出口貿(mào)易形勢(shì)卻不容樂(lè)觀，突出表現(xiàn)為農(nóng)藥殘留超標(biāo)率高。由于柑桔果實(shí)采后易感染青、綠霉菌等，腐爛現(xiàn)象相當(dāng)嚴(yán)重，造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失，因此果農(nóng)常采用殺菌劑來(lái)控制果實(shí)采后腐爛[1]。抑霉唑[1-2-(2，4-二氯苯基)-2-(2-烯丙氧基)乙基-1H-咪唑]是內(nèi)吸殺菌劑，可用于水果、蔬菜、谷物等防治真菌病害；噻菌靈[2-(1，3-噻唑-4-基)苯并咪唑]也是內(nèi)吸殺菌劑，主要用于水果保鮮，防治白粉病、灰霉病等病害，對(duì)柑橘、蘋果、瓜類尤為有效。因二者具有很好的抑菌效果，近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外果農(nóng)應(yīng)用抑霉唑、噻菌靈等殺菌劑來(lái)防治柑桔采后由青(綠)霉、灰霉枝孢霉、根霉等病原菌引起的腐爛[1,2]。為了提高防治效果，果農(nóng)常交替或混配使用大量農(nóng)藥[1～3]，這樣就導(dǎo)致了農(nóng)藥殘留嚴(yán)重。

目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)柑桔中抑霉唑、噻菌靈等農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法主要集中在高效液相色譜法(HPLC)[4～6]，應(yīng)用氣相色譜法檢測(cè)的很少，但這些方法或多或少存在檢測(cè)周期長(zhǎng)、樣品前處理繁瑣、檢測(cè)成分單一、回收率不高等不足。本研究在樣品前處理技術(shù)超聲波提取—吸附分離的基礎(chǔ)上加以優(yōu)化、改進(jìn)，確定了樣品提取、凈化及色譜條件，建立了快速同時(shí)檢測(cè)柑桔中抑霉唑、噻菌靈等農(nóng)藥多殘留氣相色譜法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

氣相色譜儀：日本島津GC-14C氣相色譜儀(含F(xiàn)ID檢測(cè)器、GC工作站)；超聲波儀：KQ-100(江蘇省昆山市超聲儀器廠)；毛細(xì)管色譜柱。

氧化鋁、硅膠、氯化鈉(140 ℃ 烘烤4 h，放入干燥器中冷卻備用)、無(wú)水硫酸鈉(650 ℃ 灼燒4 h 放入干燥器中冷卻備用)、乙酸乙酯、正己烷、丙酮、石油醚，所用試劑均為分析純。

1.2 試驗(yàn)方法

樣品采用超聲波提取，然后吸附分離，再用氣相色譜法測(cè)定抑霉唑、噻菌靈。

(1)超聲波提取條件 分別在不同溫度(30、40、50、60、70 ℃)，采用不同提取劑(正己烷、丙酮、石油醚、乙酸乙酯4 種溶劑或混合溶劑)、不同提取時(shí)間(5、10、20、30、40 min)以及不同提取次數(shù)進(jìn)行提取試驗(yàn)。

(2)吸附分離柱的條件 吸附分離柱的填充采取2種結(jié)構(gòu)：①玻璃柱底部墊一薄層脫脂棉, 依次填裝1 cm無(wú)水硫酸鈉、2 cm氧化鋁、1 cm無(wú)水硫酸鈉、1 g硅膠(250 ～ 150 μm)、1 cm無(wú)水硫酸鈉混合填料，用20 mL乙酸乙酯預(yù)淋洗；②玻璃柱底部墊一薄層脫脂棉, 依次填裝0.5 cm無(wú)水硫酸鈉、0.5 cm氧化鋁、0.5 cm無(wú)水硫酸鈉、0.5 g硅膠、0.5 cm無(wú)水硫酸鈉、1.5 cm氧化鋁、0.5 cm無(wú)水硫酸鈉、0.5 g硅膠、1 cm無(wú)水硫酸鈉混合填料，用20 mL乙酸乙酯預(yù)淋洗。

(3)色譜條件 毛細(xì)管柱：30 m×0.32 mm×0.25 μm；程序升溫：初溫160 ℃，恒溫3 min，以30 ℃/min的速度升溫至240 ℃，恒溫10 min；進(jìn)樣口：溫度240 ℃；進(jìn)樣量：1.0 μL，不分流模式；載氣：高純N2(99.999%)，恒流模式，流量：5.0 mL/min；FID：溫度280 ℃，尾吹：氮?dú)?45 mL/min), 氫氣：40 mL/min，空氣：450 mL/min。

(4)測(cè)定步驟 將柑桔樣品果皮與果肉分開，分別用攪拌機(jī)粉碎混勻，各稱取500 g保存在冰箱中。超聲提?。悍Q取30.0 g均勻試樣，加入溶劑，按規(guī)定條件提取，過(guò)濾后的殘?jiān)萌軇┫礈?～4次，合并提取液和洗滌液，在60 ℃水浴濃縮至10～15 mL。吸附分離：用滴管把濃縮液全部加入已洗凈的吸附分離柱中，待液面正好和填充物上端取齊時(shí)，加入溶劑進(jìn)行洗脫，如此重復(fù)3次。合并洗脫液，濃縮，并定容為10 mL。然后進(jìn)行GC-FID 分析檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 超聲波提取條件

(1)提取溶劑 采用正己烷、丙酮、石油醚、乙酸乙酯4 種溶劑分別進(jìn)行了柑桔肉和皮中抑霉唑、噻菌靈農(nóng)藥殘留的提取試驗(yàn)，通過(guò)對(duì)比確定了抑霉唑、噻菌靈的提取溶劑為乙酸乙酯—正己烷(1∶1)。

(2)提取溫度 選擇30、40、50、60、70 ℃溫度下分別提取10～20 min，結(jié)果表明，提取溫度為50 ℃時(shí)，提取效率低；而高于70 ℃溶劑的揮發(fā)比較嚴(yán)重，且雜質(zhì)提取增多。 因此比較合適的提取溫度為60 ℃。

(3)提取時(shí)間 在提取溫度60 ℃下，用50 mL溶劑進(jìn)行了5、10、20、30、40 min提取時(shí)間的平行試驗(yàn)。結(jié)果表明，在超過(guò)20 min后，提取液中農(nóng)藥的含量已經(jīng)不再隨提取時(shí)間的延長(zhǎng)而發(fā)生明顯的變化，相反提取時(shí)間的延長(zhǎng)加深了提取液顏色，不利于凈化。若將溶劑分成 2 份，分 2 次各進(jìn)行10 min提取，提取效果優(yōu)于單次20 min，故確定提取的方法為2次提取。

2.2 吸附分離條件

對(duì)比了2種填充結(jié)構(gòu)的吸附分離柱。用第①種結(jié)構(gòu)的吸附分離柱凈化后得到的洗提液呈淺黃色，用第②種的吸附分離柱凈化后得到的洗提液為無(wú)色。把氧化鋁和硅膠分兩段填充大大提高了凈化的效果，因而使用第②種填充結(jié)構(gòu)的吸附分離柱。

2.3 農(nóng)藥殘留測(cè)定

表1 噻菌靈、抑霉唑農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線及其相關(guān)系數(shù)Table 1 The standard curve and correlation coefficient of imazalil and thiabendazole of pesticides showed

(1)線性關(guān)系與檢出限量 用標(biāo)準(zhǔn)品抑霉唑、噻菌靈進(jìn)行色譜分析，結(jié)果表明這2種農(nóng)藥的分離效果良好。這2種殺菌劑農(nóng)藥的進(jìn)樣質(zhì)量濃度y(mg/L)與所對(duì)應(yīng)的氣相色譜峰的峰面積x之間的相關(guān)線性方程式和相關(guān)系數(shù)R以及方法的最小檢出限，詳見表1。

(2)樣品的測(cè)定和準(zhǔn)確度 對(duì)柑桔試樣中抑霉唑、噻菌靈這2種農(nóng)藥進(jìn)行氣相色譜測(cè)定。用添加法測(cè)定回收率，選擇0.1、0.5、1.0 mg/kg的質(zhì)量濃度進(jìn)行，標(biāo)準(zhǔn)液直接加入到已稱取的樣品中，然后按上述方法進(jìn)行測(cè)定。對(duì)同一質(zhì)量濃度的回收率試驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行了5次，結(jié)果表明柑桔皮中抑霉唑、噻菌靈添加回收率在80.5%～105.5%之間，柑桔肉中抑霉唑、噻菌靈添加回收率在83.5%～108.5%之間，符合殘留量測(cè)定對(duì)準(zhǔn)確度的要求(表2)。

表2 噻菌靈、抑霉唑在柑桔中的添加回收率加標(biāo)分析結(jié)果Table 2 The recovery analysis results of prevented imazalil and Thiabendazole in the citrus

(3)精密度實(shí)驗(yàn) 對(duì)同一質(zhì)量濃度的回收率試驗(yàn)進(jìn)行了5次重復(fù)，求得柑桔皮樣品中抑霉唑、噻菌靈農(nóng)藥殘留量的變異系數(shù)在0.82%～5.46%之間，柑桔肉樣品中抑霉唑、噻菌靈農(nóng)藥殘留量的變異系數(shù)在0.96%～6.82%之間，符合農(nóng)殘分析測(cè)定允許的公差范圍。最小檢出限量為7×10-10g，最低檢出濃度為0.01 mg/kg，符合農(nóng)藥殘留量檢測(cè)技術(shù)要求。

3 小結(jié)

本研究將超聲波提取和吸附分離前處理技術(shù)應(yīng)用到柑桔的農(nóng)藥殘留檢測(cè)中，經(jīng)分析測(cè)定得到的數(shù)據(jù)，表明該方法具有分析速度快、靈敏度高、回收率較理想而且重現(xiàn)性好的特點(diǎn)，是一種實(shí)用性強(qiáng)的測(cè)定方法。

[1]趙其陽(yáng)，焦必寧,王成秋,等.氣相色譜法同時(shí)測(cè)定柑桔中抑霉唑、噻菌靈和嘧霉胺殘留 [J]. 現(xiàn)代科學(xué)儀器，2007，(1)：77～78.

[2]焦必寧,陳愛華. 國(guó)內(nèi)外柑桔農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)分析[J]. 現(xiàn)代科學(xué)儀器，2007,(1)：82～85.

[3]謝 文，丁慧瑛.硅膠活性碳柱凈化—?dú)庀嗌V法測(cè)定茶葉中多種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量[J]. 理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè)，2005,(4)：8～10.

[4]Yuko Ito，Yoshitomo Ikai，Hisao Oka,etal．Application of ion-exchange cartridge clean-up in food analysis：I.Simultaneous determination of thiabendazole and imanalil in citrus fruit and banana using high-performance liquid chromatography with ultraviolet detection[J].J Chromatogr A,1998，8l0：81～87.

[5]易 軍, 李云春. 茶葉中多種農(nóng)藥殘留的氣相色譜法測(cè)定[J]. 廈門大學(xué)學(xué)報(bào), 2002,(3)：68～73.

[6]Femandez M,Rodri guez R,Pieo Y,etal．Liquid chromatographic-mass spectrometric determination of post-harvest fungicides in citrus fruits[J].J Chromatog A,2001,912：301～310.

2009-05-31

武夷學(xué)院青年學(xué)術(shù)支持項(xiàng)目(XQL05027)

康曉燕(1968-)，女，福建南平人，副教授，主要研究方向?yàn)闊o(wú)機(jī)及分析檢測(cè).

10.3969/j.issn.1673-1409(S).2009.04.015

X830.2

A

1673-1409(2009)04-S050-03