于海忠 劉 靜

我國(guó)是乙肝病毒感染最嚴(yán)重的國(guó)家之一。據(jù)衛(wèi)生部疾病控制中心在1991～1994年組織全國(guó)30個(gè)省6.7萬(wàn)人的調(diào)查，乙肝的流行率為57.63%[1]。現(xiàn)在血站都是采血前對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血都進(jìn)行乙肝快速檢測(cè)，為了更好地開(kāi)展無(wú)償獻(xiàn)血、減少不合格血液的采集，對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者進(jìn)行乙肝膠體金法快檢。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本

自2008年1～7月瓦房店市采血屋無(wú)償獻(xiàn)血者500人份。年齡18～55歲。

1.2 試劑

乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（膠體金法）由英科新創(chuàng)（廈門(mén)）科技有限公司提供。HBsAg酶免試劑盒分別由英科新創(chuàng)（廈門(mén)）科技有限公司、北京科衛(wèi)臨床診斷試劑有限公司提供。試劑均在有效期內(nèi)使用。操作及結(jié)果判定按使用說(shuō)明書(shū)。

1.3 檢測(cè)儀器

深圳雷杜生命股份有限公司RT-6000酶標(biāo)儀，深圳雷杜生命股份有限公司RT-3000洗板機(jī)。

1.4 檢測(cè)方法

經(jīng)膠體金法HBsAg檢測(cè)的無(wú)償獻(xiàn)血者，采集血液，并留取血樣待測(cè)，對(duì)同一份標(biāo)本分別采用上?？迫A和英科新創(chuàng)ELISA法試劑盒進(jìn)行HBsAg再檢。若其中一廠(chǎng)家試劑判定結(jié)果為HBsAg陽(yáng)性，而另一廠(chǎng)家試劑為陰性，則對(duì)該血樣用前廠(chǎng)家ELISA法試劑再次雙孔重復(fù)試驗(yàn)。若結(jié)果一致，且S/oD≥1時(shí)，判定為HBsAg為陽(yáng)性。

2 結(jié) 果

在膠體金法檢測(cè)的500份標(biāo)本中，陰性數(shù)為452份，陰性率為90.4%，陽(yáng)性為48份，陽(yáng)性率為9.6%；ELISA法復(fù)檢中陰性為451份，陰性率為90.2%，陽(yáng)性為49份，陽(yáng)性率為9.8%。膠體金法漏檢率為0.2%。膠體金法檢測(cè)的HBsAg陽(yáng)性經(jīng)ELISA法檢測(cè)均為陽(yáng)性。

3 討 論

無(wú)償獻(xiàn)血是血站收集血液的主要途徑，然而這種采血方式受到無(wú)法常規(guī)初檢的限制，產(chǎn)生一定比例的不合格血液，其中乙肝表面抗原陽(yáng)性是一個(gè)主要因素[2]。應(yīng)用HBsAg快速檢測(cè)對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者進(jìn)行初篩檢查，經(jīng)ELISA法再檢后的統(tǒng)計(jì)資料表明，500份膠體金法初篩合格血樣HBsAg陽(yáng)性率為1.07%。正常情況下HBsAg人群陽(yáng)性率在10%左右。通過(guò)上述結(jié)果可以看出快速初篩后的樣本經(jīng)ELISA法初復(fù)檢HBsAg結(jié)果基本是一致的。因此應(yīng)用膠體金法對(duì)血液進(jìn)行初篩簡(jiǎn)單易行、經(jīng)濟(jì)實(shí)用、效果良好，避免了血源的浪費(fèi)，并且具有較高的信度和效度[3]。膠體金法原理：采用膠體金免疫技術(shù)，在醋酸纖維素膜上預(yù)包被金標(biāo)抗HBsAg單抗（Au-sAb1），硝酸纖維素膜上檢測(cè)線(xiàn)和對(duì)照線(xiàn)上分別包被抗HBsAg單抗（Au-sAb2）和單抗鼠IgG。檢測(cè)時(shí)，樣本血清中HBsAg可與膠體金-抗體結(jié)合形成復(fù)合物，由于層折作用復(fù)合物沿紙條向前移動(dòng)，如為陽(yáng)性標(biāo)本，則與檢測(cè)線(xiàn)預(yù)包被的抗體結(jié)合形成“Au-sAb1-HB-sAg-sAb2”夾心物而凝集顯色。并且因?yàn)闄z測(cè)紙條上有濾過(guò)膜的存在，可以有效地組織紅細(xì)胞的通過(guò)，因此檢驗(yàn)時(shí)不需要分離血清直接使用全血進(jìn)行即可。

與ELISA法相比，膠體金法具有以下優(yōu)勢(shì)：①檢驗(yàn)時(shí)可直接應(yīng)用全血，無(wú)需分離血清，從采集指血標(biāo)本到出檢測(cè)結(jié)果，只需3～5min，快速方便，陽(yáng)性率高；②試紙法操作步驟簡(jiǎn)單，對(duì)檢測(cè)設(shè)備要求低，肉眼可直接觀察結(jié)果，省時(shí)、省財(cái)、省力，又避免了復(fù)雜步驟過(guò)程中污染的可能；③試劑保存比較方便，可在室溫儲(chǔ)存；④可單分檢測(cè)，快速，又避免資源浪費(fèi)；⑤價(jià)格低廉?；谝陨蟽?yōu)點(diǎn)，在實(shí)際操作中一方面達(dá)到了有效檢測(cè)血液質(zhì)量的目的，同時(shí)也節(jié)省了獻(xiàn)血者的等候時(shí)間，值得在獻(xiàn)血屋和流動(dòng)采血車(chē)采血時(shí)應(yīng)用和推廣。但應(yīng)用膠體金法對(duì)血液進(jìn)行快速初篩不能代替正規(guī)的血液檢驗(yàn)，不能完全排除假陽(yáng)性或假陰性，靈敏度和特異性均有待于進(jìn)一步提高[4，5]。

膠體金法檢測(cè)存在一定比例的假陽(yáng)性和假陰性，究其原因可能有：①試劑的靈敏度，全血膠體金法試劑的靈敏度為1ng，而ELISA法試劑的靈敏度可達(dá)0.5ng，因此導(dǎo)致了一定程度的假陰性的出現(xiàn)。②獻(xiàn)血者人數(shù)較多時(shí)，操作人員為縮短檢測(cè)時(shí)間而未嚴(yán)格按照要求操作，因此造成檢測(cè)線(xiàn)不明顯的弱陽(yáng)性漏診。③實(shí)驗(yàn)人員加樣過(guò)多或過(guò)少，檢測(cè)紙條變質(zhì)等因素導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。④少數(shù)標(biāo)本可能存在乙肝肝炎病毒（HBV）變異或亞型而不易檢出。⑤高溫、干燥、風(fēng)吹均能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，我們?cè)谧鯤BsAg快速檢測(cè)時(shí)，應(yīng)該嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行操作。

[1] 高壽征.病毒性肝炎防治研究[M] .北京:北京出版社,1992:11.

[2] 孟憲軍,史志旭徐州市無(wú)償獻(xiàn)血初檢復(fù)檢結(jié)果分析[J] .中國(guó)輸血雜志,1996,9(4):212.

[3] 肖甫星譯.輸血技術(shù)手冊(cè)[M] .北京:人民衛(wèi)生出版社,1999:265-266.

[4] 陳均.全血膠體金法快速篩查非固定采血點(diǎn)HBsAg的初探[J] .中國(guó)輸血雜志,2000,13(13):198.

[5] 許倩.HBsAg檢測(cè)的膠體金法與ELISA法效果比較[J] .中外醫(yī)療,2008,27(13):107.