乳清多肽對(duì)D-半乳糖衰老模型大鼠血清和臟器組織抗氧化效果的影響

彭新顏，孔保華*，熊幼翎

(1.魯東大學(xué)食品工程學(xué)院，山東 煙臺(tái) 264025；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030；3.肯塔基大學(xué)動(dòng)物與食品科學(xué)系，美國(guó) 肯塔基 萊克星頓 40546)

乳清多肽對(duì)D-半乳糖衰老模型大鼠血清和臟器組織抗氧化效果的影響

彭新顏1,2，孔保華2,*，熊幼翎3

(1.魯東大學(xué)食品工程學(xué)院，山東 煙臺(tái) 264025；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030；3.肯塔基大學(xué)動(dòng)物與食品科學(xué)系，美國(guó) 肯塔基 萊克星頓 40546)

研究乳清蛋白的堿性蛋白酶水解產(chǎn)物對(duì)D-半乳糖(D-gal)衰老模型大鼠抗氧化效果的影響。將大鼠分為7組，包括正常對(duì)照組、D-gal模型陰性對(duì)照組、D-gal＋未水解乳清蛋白組、D-gal＋乳清蛋白肽低劑量組、D-gal＋乳清蛋白肽中劑量組、D-gal＋乳清蛋白肽高劑量組和D-gal＋抗壞血酸模型陽性對(duì)照組。各處理組灌胃45d后，檢測(cè)衰老大鼠血清、心臟和腎臟的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量的變化及肝臟中過氧化氫酶(CAT)活性的變化?？箟难彡栃詫?duì)照組和低、中、高劑量乳清多肽組均可使大鼠血清、心臟和腎臟的SOD 、GSH-Px 及CAT活性提高，MDA含量降低，并且與陰性對(duì)照組相比差異顯著 (P＜0.05)。其中，高劑量乳清多肽組(200mg/kg bw)對(duì)SOD酶活性作用最顯著，使血清SOD活性比陰性對(duì)照組提高了29.2%。高劑量乳清多肽組使腎臟GSH-Px活性及肝臟中CAT活性達(dá)到了陽性對(duì)照抗壞血酸的水平(P＞0.05)，同時(shí)，中劑量乳清多肽組(100mg/kg bw)使心臟中的MDA含量與陰性對(duì)照組相比下降了38.6%。結(jié)果表明，乳清多肽能夠通過提高生物體內(nèi)抗氧化酶系的活力，減少自由基對(duì)組織器官的損害，發(fā)揮其抗氧化作用，這說明乳清多肽在延緩機(jī)體衰老方面具有一定的效果。

D-半乳糖；大鼠；乳清蛋白水解物；抗氧化能力

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，人類許多慢性疾病及衰老現(xiàn)象均和人體內(nèi)的自由基水平失衡有關(guān)，過量的自由基對(duì)機(jī)體產(chǎn)生氧化性損傷，當(dāng)這種損傷不能及時(shí)修復(fù)并且積累到一定程度時(shí)往往導(dǎo)致疾病的出現(xiàn)[1]。現(xiàn)代食品加工工藝可導(dǎo)致脂肪氧化酸敗及品質(zhì)變劣，這些問題都需要添加外源抗氧化劑來解決。人工合成的抗氧化劑(BHA、BHT等)有很強(qiáng)的抗氧化能力，但由于這些合成抗氧化劑對(duì)人們的身體健康存在一定的潛在危害，其使用量受到嚴(yán)格的控制[2]。因此，從食源性物種篩選天然、高效的抗氧化物質(zhì)，并用于疾病的預(yù)防將具有重要的意義。

乳清是生產(chǎn)干酪的副產(chǎn)物，其必需氨基酸組成符合并超出FAO/WHO的要求。但目前尚有部分乳清不能被充分利用，造成了巨大的資源浪費(fèi)和較嚴(yán)重的環(huán)境污染。近年來，動(dòng)植物蛋白酶解產(chǎn)物的抗氧化研究已成為一個(gè)熱門話題，而且很多水解產(chǎn)物具有一定的抗氧化功效[3-4]。目前已有關(guān)于乳清蛋白水解物在銅、鐵催化脂質(zhì)氧化體系[5-6]及利用電子自旋共振測(cè)定乳清多肽抗氧化活性等研究的報(bào)道[7]。

雖有一些乳清抗氧化肽的研究，但還未見利用衰老動(dòng)物模型來研究其體內(nèi)抗氧化作用的報(bào)道。D-半乳糖亞急性中毒動(dòng)物是近年來國(guó)內(nèi)外常用的衰老模型[8]，而且此模型造模時(shí)間短，重復(fù)性好。前期研究表明，5%的乳清蛋白由堿性蛋白酶水解后，5h水解物抗氧化效果最佳[9]，水解多肽具有相對(duì)較高的還原能力，PV(過氧化值)和TBARS(硫代巴比妥酸值)抑制作用，Cu2+螯合能力及DPPH自由基清除能力[10]。本研究采用D-半乳糖(D-gal)衰老大鼠模型，研究堿性蛋白酶所制備乳清蛋白多肽對(duì)衰老模型大鼠血清和臟器抗氧化作用的影響，探討乳清多蛋白肽在體內(nèi)抗氧化活性的作用模式，旨在為研究乳清蛋白多肽在體內(nèi)抗氧化活性的作用機(jī)制提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與動(dòng)物

D-gal粉劑(原裝) Sigma公司；超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)試劑盒和丙二醛(MDA)試劑盒 南京建成科技有限公司。

清潔級(jí)SD(Sprague-Dawley)大鼠，雄性，購(gòu)自維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司(北京)，年齡為4～5個(gè)月，體質(zhì)量為290～320g，實(shí)驗(yàn)在東北農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房?jī)?nèi)進(jìn)行。

1.2 儀器與設(shè)備

JD500-2電子天平 沈陽龍騰電子稱量?jī)x器有限公司；TP - 2000 動(dòng)物天平 上海儀器有限公司；DELTA 320 pH計(jì) 梅特勒-托利多儀器有限公司；DK-S24型電熱恒溫水浴鍋 上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；LG10-24A高速離心機(jī) 北京醫(yī)用離心機(jī)廠；TU-1800紫外-可見分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限公司；722型分光光度計(jì) 上海儀器廠；低溫冰箱(－80℃) Revco公司。

1.3 方法

1.3.1 乳清蛋白水解物的制備

將乳清蛋白配成5g/100mL溶液后，經(jīng)95℃預(yù)熱5min，加入堿性蛋白酶在pH8.5、加酶量(E/S)2%、溫度65℃條件下水解5h后凍干備用?？梢姡琒D大鼠灌胃所用多肽制備方法與前期工作中抗氧化活性多肽相同[9]。

1.3.2 D-gal致衰老大鼠模型的建立

將大鼠同室分籠飼養(yǎng)，自然光照，自由采食和飲水。每?jī)商旆Q量一次體質(zhì)量。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后建立模型，每組10只，隨機(jī)分為7組：正常對(duì)照組、D-gal模型陰性對(duì)照組、D-gal＋未水解乳清蛋白組、D-gal＋乳清蛋白肽低劑量組、D-gal＋乳清蛋白肽中劑量組、D-gal＋乳清蛋白肽高劑量組、D-gal＋抗壞血酸模型陽性對(duì)照組。除正常對(duì)照組外，其他6組的大鼠皮下注射D-gal(120mg/kg bw)，連續(xù)注射6周建立衰老模型；其中除正常對(duì)照組的這6組大鼠于第2周每日分別灌胃，D-gal模型陰性對(duì)照組大鼠給予等量雙蒸水，D-gal＋未水解乳清蛋白組大鼠給予50mg/kg bw未水解乳清蛋白，D-gal＋乳清蛋白肽低、中、高劑量3個(gè)組分別給予低中高劑量灌胃乳清多肽50、100、200mg/kg bw，D-gal＋抗壞血酸模型陽性對(duì)照組的大鼠給予抗壞血酸50mg/kg bw；正常對(duì)照組大鼠頸背部皮下注射等量生理鹽水并于第2周給予等量雙蒸水作為非模型正常對(duì)照組。

1.3.3 血清和組織勻漿的制備

灌胃45d后，摘眼球取血，斷頸處死，解剖取出心和腎等臟器貯存于液氮中。大鼠血樣于4℃冰箱放置12h，離心(3000r/min，10min)取上清液，即為血清。測(cè)定時(shí)液氮中取出大鼠心臟、肝臟和腎臟組織，制成10%組織勻漿液。

1.3.4 血清和組織中抗氧化酶系和MDA的測(cè)定

SOD活力測(cè)定：SOD酶活測(cè)定采用氯化硝基氮藍(lán)四唑光還原法(NBT法)，按照試劑盒操作說明在560nm波

長(zhǎng)處測(cè)定OD值。

過氧化氫酶(catalase，CAT)活力測(cè)定：按照Carrillo等[11]的方法，并稍作改動(dòng)。反應(yīng)體系含有12μL的體積分?jǐn)?shù)3% H2O2和100μL細(xì)胞裂解液，888μL的50mmol/L PBS(pH7.0)。樣品于37℃水浴2min，240nm波長(zhǎng)處測(cè)定5min內(nèi)OD值的變化，其變化和H2O2的變化成比例。

GSH-Px測(cè)定：DTNB顯色法[12]。反應(yīng)溶液由如下部分組成：0.1mol/L PBS(pH7.0)，1mmol/L的乙二胺四乙酸(EDTA)，10mmol/L谷胱甘肽，1mmol/L的NaN3，1單位谷胱甘肽還原酶，1.5mmol/L的還原型輔酶Ⅱ四鈉(NADPH)和0.1mL細(xì)胞裂解液。37℃水浴10min，加入H2O2使之濃度為1mmol/L。于340nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值。NADPH氧化的速度表示GSH-Px活性。

MDA含量的測(cè)定：用硫代巴比妥酸(TBARS)方法[13]。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用Statistix 8.1軟件，每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，差異顯著性(P＜0.05)分析使用Tukey HSD程序。

2 結(jié)果與分析

2.1 乳清抗氧化肽對(duì)大鼠血清和臟器中SOD活力的影響

表1 不同劑量乳清蛋白多肽對(duì)大鼠血清和臟器中SOD活力的影響(±s，n=10)Table 1 Effect of whey protein hydrolysates on the activity of SOD in serum and different organs in rats (x±s，n=10)

表1 不同劑量乳清蛋白多肽對(duì)大鼠血清和臟器中SOD活力的影響(±s，n=10)Table 1 Effect of whey protein hydrolysates on the activity of SOD in serum and different organs in rats (x±s，n=10)

注：同列字母不同表示差異顯著(P＜0.05)。下同。

組別SOD活力/(NU/mg蛋白)血清心臟腎臟正常對(duì)照組254±10.34a218±3.96a250±7.36a模型陰性對(duì)照組156±9.07e185±5.92d199±15.66dD-gal +未水解組180±5.66d195±8.08c207±9.95cdD-gal +低劑量組210±15.35c205±5.80b227±16.62bcD-gal +中劑量組218±8.23bc218±7.70a211±19.68cdD-gal +高劑量組221±7.27bc205±7.83bc250±16.08aD-gal +抗壞血酸組226±10.09b209±7.06ab239±13.89ab

從表1結(jié)果可知，模型陰性對(duì)照組大鼠血清中SOD活力明顯低于正常對(duì)照組和各處理組，具有顯著性差異(P＜0.05)，劑量處理組中，隨劑量的增加SOD活力有所升高，存在著一定的劑量效應(yīng)，其中，高劑量組處理效果最好，使血清SOD活性比陰性對(duì)照組提高了29.2%。

模型陰性對(duì)照組大鼠心臟SOD活力明顯低于正常對(duì)照組，具有顯著性差異(P＜0.05)，各處理組SOD活力明顯升高，與模型陰性對(duì)照組相比具有顯著性差異(P＜0.05)。中劑量乳清多肽處理效果最好，說明中劑量多肽在心臟中對(duì)SOD活力有較大的影響，但各劑量組間SOD活力差異并不顯著(P＞0.05)。

腎臟中模型陰性對(duì)照組大鼠SOD的活力顯著低于正常對(duì)照組(P＜0.05)，高劑量組、抗壞血酸處理與正常對(duì)照組無顯著差異(P＞0.05)，與未水解、低劑量、中劑量處理存在顯著差異(P＜0.05)。高劑量組在腎臟中SOD的活力最高，抗氧化效果最好。

2.2 乳清蛋白多肽對(duì)大鼠血清和臟器中GSH-Px活力的影響

表2 不同劑量乳清蛋白多肽對(duì)大鼠血清和臟器GSH-Px活力的影響(±s，n=10)Table 2 Effect of whey protein hydrolysates on the activity of GSH-Px in serum and different organs in rats (x±s，n=10)

表2 不同劑量乳清蛋白多肽對(duì)大鼠血清和臟器GSH-Px活力的影響(±s，n=10)Table 2 Effect of whey protein hydrolysates on the activity of GSH-Px in serum and different organs in rats (x±s，n=10)

組別GSH-Px活力/(U/mg蛋白)血清心臟腎臟正常對(duì)照組2982±87.80a114±8.87a267±13.22a模型陰性對(duì)照組2583±86.12d97±6.78b230±9.77cD-gal +未水解組2635±150.72cd97 ± 9.10b239±12.75bcD-gal +低劑量組2703±167.68bcd110±8.70a248±16.45abcD-gal +中劑量組2792±182.19abc105±8.01ab258±13.97abD-gal +高劑量組2685±167.27bcd107±9.03ab266±16.95aD-gal +抗壞血酸組2839±135.71ab108±8.87ab256±15.30ab

從表2可知，在血清、心臟和腎臟中，以D-gal陰性對(duì)照組GSH-Px活力為最低。在血清中，GSH-Px活力中劑量、抗壞血酸組處理與未水解相比有顯著性差異(P＜0.05)，中劑量乳清多肽、抗壞血酸組對(duì)GSH-Px活力有較大的影響，未達(dá)到到正常組水平，但差異不顯著(P＞0.05)。在心臟中，未水解GSH-Px活力顯著低于正常對(duì)照組、低劑量組(P＜0.05)，低劑量處理對(duì)GSH-Px活力有較大的影響。在腎臟中，大鼠正常對(duì)照、中、高劑量組及VC組與模型陰性對(duì)照組GSH-Px活力存在顯著差異(P＜0.05)，其中，高劑量組效果最好。

由上述結(jié)果可知，在大鼠血清及各臟器中，乳清蛋白多肽在一定的劑量范圍內(nèi)對(duì)提高GSH-Px活力是有效的。

2.3 乳清蛋白多肽對(duì)大鼠血清和臟器中MDA含量的影響

從表3可知，在血清和心臟中，模型陰性對(duì)照組大鼠MDA的含量顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.05)，在腎臟中，模型陰性對(duì)照組大鼠MDA的含量雖高于正常對(duì)照組，但不具有顯著性差異(P＞0.05)。與模型陰性對(duì)照組相比，血清和腎臟各劑量處理組無顯著差異(P＞0.05)?？梢?，大鼠經(jīng)D-半乳糖處理后，血清和腎臟中DMA含量升高，說明適模成功。在心臟中，中劑量乳清多肽組(100mg/kg bw)使心臟中的DMA含量與陰性對(duì)照組相比，下降了38.6%，效果較好。

表3 不同劑量乳清蛋白多肽對(duì)大鼠血清和臟器中MDA含量的影響(±s，n=10)Table 3 Effect of whey protein hydrolysates on MDA in serum and different organs in rats (x±s，n=10)

表3 不同劑量乳清蛋白多肽對(duì)大鼠血清和臟器中MDA含量的影響(±s，n=10)Table 3 Effect of whey protein hydrolysates on MDA in serum and different organs in rats (x±s，n=10)

組別MDA含量/(nmol/mg)血清心臟腎臟正常對(duì)照組10.3±1.34b2.2±0.57c1.8±0.79a模型陰性對(duì)照組12.9±1.75a4.1±0.51a2.5±0.84aD-gal +未水解組12.6±2.19ab3.5±45ab2.4±0.92aD-gal +低劑量組11.5±1.19ab3.3±0.57b2.0±0.97aD-gal +中劑量組11.6±1.42ab2.5±0.55c1.9±0.62aD-gal +高劑量組11.1±1.76ab3.5±0.42ab2.0±0.69aD-gal +抗壞血酸組10.5±2.96ab2.3±0.32c1.9±0.66a

2.4 乳清蛋白多肽對(duì)大鼠肝臟CAT活力的影響

CAT是體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)的主要組分，分布在紅細(xì)胞及肝的細(xì)胞中，因此，本實(shí)驗(yàn)測(cè)定了肝臟中CAT活性的變化。H2O2是化學(xué)性質(zhì)最活潑的活性氧，破壞性極強(qiáng)，可被CAT分解。機(jī)體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，后者攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生[14]。因此，CAT活性的變化可反映機(jī)體抗氧化能力的變化，研究CAT在機(jī)體中的變化有重要的生理學(xué)意義。

圖 1 不同劑量乳清蛋白多肽對(duì)大鼠肝臟CAT活力的影響Fig.1 Effect of whey protein hydrolysate dosage on the activity of CAT in liver of rats

由圖1可以看出，乳清多肽高劑量組和陽性對(duì)照組無顯著差異，說明這個(gè)劑量的乳清蛋白和抗壞血酸的作用效果幾乎相同。其中低、中、高劑量的C A T活性均高于陰性對(duì)照組和未水解組，且統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯著差異(P＜0.05)。

3 討 論

3.1 D-gal模型干預(yù)的影響

正常對(duì)照及乳清多肽各處理組大鼠飲食正常，活潑好動(dòng)、皮膚彈性好。模型陰性對(duì)照組大鼠在造模后，逐漸表現(xiàn)出四肢無力，少動(dòng)，毛色發(fā)黃，尤其是腹部變得無光澤。同時(shí)，D-gal所致的衰老大鼠各抗氧化指標(biāo)均顯著區(qū)別于正常對(duì)照組，提示D-gal造模成功?？梢?，該動(dòng)物模型適合乳清水解多肽的干預(yù)。

3.2 未水解乳清蛋白與水解蛋白組對(duì)衰老模型大鼠抗氧化效果的影響

目前，已有未水解WPI具有抗氧化作用的報(bào)道[7]，本實(shí)驗(yàn)選用未水解乳清蛋白與不同劑量的水解蛋白組進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，以確定兩者對(duì)D-gal衰老模型大鼠抗氧化效果的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，乳清蛋白水解物比未水解的乳清蛋白具有更強(qiáng)的抗氧化能力，這可能是由于水解后肽鍵斷裂，增加了氫供體，具有更強(qiáng)的提供質(zhì)子能力。蛋白一經(jīng)水解，其致密的結(jié)構(gòu)就被破壞，從而使得具有抗氧化效果的氨基酸殘基暴露，抗氧化活性增強(qiáng)。這說明相對(duì)于未水解物，水解乳清蛋白用于延緩大鼠衰老，具有一定的可行性。

3.3 乳清多肽對(duì)D-gal致衰老大鼠抗氧化酶系活力及MDA含量的影響

SOD和GSH-Px均屬抗氧化酶類，在正常生理?xiàng)l件下，超氧陰離子自由基可被體內(nèi)的SOD及時(shí)清除，它對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著重要作用。GSH-Px的存在可保護(hù)生物膜不受氧化損害，廣泛存在于機(jī)體中的CAT對(duì)細(xì)胞具保護(hù)作用，有著重要的生理學(xué)功能。脂褐素沉積是衰老的重要特征之一，MDA是脂褐素形成過程中的中間產(chǎn)物，它能間接反映機(jī)體內(nèi)的脂質(zhì)過氧化水平。大量實(shí)驗(yàn)表明，衰老時(shí)MDA水平顯著升高[15]。

3.3.1 乳清多肽對(duì)D-gal致衰老大鼠SOD活力的影響

SOD是體內(nèi)一種清除氧自由基的酶，它能清除體內(nèi)各種過氧化物和超氧陰離子自由基，降低對(duì)生物膜和其他組織造成的損傷，對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著重要作用。因此本實(shí)驗(yàn)測(cè)定SOD活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的能力，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，D-gal衰老大鼠模型較正常組比，SOD的活性明顯降低，但經(jīng)乳清多肽治療后，SOD的活性升高，表明乳清多肽可提高老年大鼠SOD活性，且在一定范圍內(nèi)存在劑量相關(guān)性，這說明SOD的活性增高可能是乳清多肽延緩衰老的內(nèi)在機(jī)制之一。

3.3.2 乳清多肽對(duì)D-gal致衰老大鼠GSH- Px含量的影響

H2O2對(duì)人體有劇毒，它能氧化巰基，使某些含巰基的酶和活性依賴于巰基的生物活性物質(zhì)失去活性，又能氧化多烯脂肪酸而使生物膜受損。GSH-Px能催化GSH還原H2O2，H2O2被GSH還原成H2O從而保護(hù)生物膜不受氧化損害。GSH-Px含量的下降，可使過氧化脂質(zhì)增多而致衰老。

本研究發(fā)現(xiàn)衰老模型大鼠GSH-Px活性降低，表明模型大鼠抗氧化能力下降，這與其氧化水平增強(qiáng)一致，這一結(jié)果不僅支持了D-gal致衰老的“活性氧自由基過

?！睂W(xué)說，還進(jìn)一步驗(yàn)證了“衰老的自由基學(xué)說”。

3.3.3 乳清多肽對(duì)D-gal致衰老大鼠CAT含量的影響

需氧脫氫酶作用所產(chǎn)生的H2O2對(duì)機(jī)體有劇毒，它在超氧離子作用下能產(chǎn)生誘發(fā)自由基反應(yīng)的羥自由基。自由基誘導(dǎo)的氧化反應(yīng)在生物的衰老過程及某些疾病的發(fā)生占有重要地位。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，乳清多肽中劑量組在增強(qiáng)CAT的活性方面可發(fā)揮較好的作用，從而延緩衰老的進(jìn)程。CAT含量變化與GSH- Px變化的量效關(guān)系相似，說明二者在機(jī)體防御體系中是兩個(gè)相互關(guān)聯(lián)的酶，作用具有密切相關(guān)性。

3.3.4 乳清多肽對(duì)D-gal致衰老大鼠MDA含量的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，D-gal衰老大鼠模型較之正常組MDA的含量升高，但經(jīng)乳清多肽處理后，MDA的含量降低，表明乳清多肽可降低MDA含量，表現(xiàn)為在一定范圍內(nèi)呈量效關(guān)系，這提示降低MDA含量可能也是乳清多肽延緩衰老的內(nèi)在機(jī)制之一。

3.4 乳清多肽自由基清除能力對(duì)D-gal致衰老大鼠的影響

目前已有許多抗氧化活性與自由基清除作用有關(guān)的報(bào)道[16-17]，當(dāng)機(jī)體自由基產(chǎn)生時(shí)，機(jī)體有一系列酶系統(tǒng)參與清除自由基的過程，從而達(dá)到解毒的作用。本課題的前期工作中，通過電子自旋共振儀測(cè)定了乳清水解物的自由基清除能力，結(jié)果表明，乳清蛋白酶解產(chǎn)物具有一定的1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基、羥基和超氧陰離子自由基的清除能力[7]。這表明，乳清多肽抗氧化性在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)評(píng)價(jià)結(jié)果與用化學(xué)方法評(píng)價(jià)結(jié)果具有一致性，由此可以推論出，乳清多肽延緩衰老及提高生物體抗氧化酶系活力作用的發(fā)揮可能與其具有清除自由基能力相關(guān)。

4 結(jié) 論

各處理組灌胃45d后，不同劑量的乳清抗氧化肽各組，在提高血清、心臟、腎臟的SOD活性、GSH-Px活性和降低MDA 含量均有一定程度的作用，同時(shí)，對(duì)于提高肝臟CAT活性方面也具有較好的效果，表明乳清多肽在改善機(jī)體物質(zhì)代謝紊亂及延緩衰老等方面具有一定的作用。但乳清抗氧化肽在腸道消化分解，消化后在體內(nèi)活性的具體情況有待進(jìn)一步研究。

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Antioxidative Effect of Whey Protein Hydrolysates in Serum, Heart and Kidney of D-galactose-induced Aging Rats

PENG Xin-yan1,2，KONG Bao-hua2,*，XIONG You-ling3
(1. College of Food Engineering, Ludong University, Yantai 264025 , China；2. College of Food Science, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China；3. Department of Animal and Food Sciences, University of Kentucky, Lexington 40546, USA)

The antioxidative effect of whey protein isolate (WPI) hydrolysates on aging rats induced by D-galactose (D-gal) was investigated. The rats were divided into seven groups including the control group, D-gal model group, D-gal-induced rats treated with unhydrolyzed WPI, D-gal-induced rats treated with WPI hydrolysates at low, middle and high dosages, and D-gal-induced rats treated with ascorbic acid as the positive group. The experiment period was last for 45 days. The effect of WPI hydrolysates on antioxidative enzyme system including superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSH-Px) and hydrogen peroxidase (CAT) in rats was evaluated, and the content of malondialdehyde (MDA) was determined. Results showed that WPI hydrolysates at three dosage levels significantly increased SOD and GSH-Px activities and simultaneously decreased MDA content in serum, heart and kidney tissues. The CAT activity in liver tissue of treated rats was also improved (P＜0.05). Moreover, a higher SOD activity was observed in rats treated with WPI hydrolysates at the dosage of 200 mg/kg· bw. Compared with the negative control, the SOD activity in serum of rats treated with WPI hydrolysates at the high dosage was increased by 29.2%. No significant difference in GSH-Px activity in kidney and CAT activity in liver between WPI hydrolysate treatment at the high dosage and the positive control of ascorbic acid was observed (P ＞0.05). In contrast, compared with the negative control, the MDA content in rats treated with WPI hydrolysates at the dosage of 100 mg/kg bw was decreased by 38.6% in heart. Therefore,

D-galactose；rats；whey protein hydrolysate；antioxidant capacity

Q516

A

1002-6630(2010)09-0238-05

2009-07-07

國(guó)家“863”計(jì)劃項(xiàng)目(2008AA10Z315)

彭新顏(1976—)，女，博士研究生，研究方向?yàn)樾螽a(chǎn)品加工。E-mail：pxy2003224@yahoo.com.cn

*通信作者：孔保華(1963—)，女，教授，博士，研究方向?yàn)樾螽a(chǎn)品加工。E-mail：kongbh63@hotmail.com

WPI hydrolysates delayed the aging process of rats due to the increase of the activity in antioxdative enzyme system.