劉憲鋒，王 貞，李穩(wěn)強

（華懋雙匯實業(yè)〈集團〉有限公司生物化學(xué)制藥廠，河南 漯河 462000）

硫酸軟骨素（chondroitin sulfate，CHS）是一類動物性黏多糖，由動物喉骨、鼻軟骨、氣管或骨腱、韌帶等含硫酸軟骨素的軟骨組織制取而成。在軟骨中，硫酸軟骨素與蛋白質(zhì)（如膠原蛋白）結(jié)合在一起，以蛋白多糖的形式存在[1]?，F(xiàn)行硫酸軟骨素生產(chǎn)工藝大部分是先堿解，然后用胰臟（胰酶）和堿性蛋白酶進行酶解，最終使硫酸軟骨素從蛋白多糖中釋放出來。但堿提過程中會使提取液顏色加深，后期除蛋白困難，嚴(yán)重影響產(chǎn)品色澤和質(zhì)量，需要在后道工序進行氧化脫色處理。筆者采用雙酶法新工藝，通過引入新型復(fù)合蛋白酶，去掉堿提、氧化步驟，顯著縮短了生產(chǎn)周期，在保證產(chǎn)品質(zhì)量基礎(chǔ)上降低了物料消耗，簡化了操作，使得新工藝更穩(wěn)定?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

702光度滴定儀（瑞士萬通公司）；TU－1901型紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限公司）。新鮮冷凍豬喉軟骨（雙匯集團股份屠宰廠）。復(fù)合蛋白酶（天津諾奧科技公司）；堿性蛋白酶（北京東華強盛公司）；乙醇（食用級）；氫氧化鈉（食用級）；鹽酸（食用級）；硫酸軟骨素標(biāo)準(zhǔn)品（美國Sigma公司）；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備工藝

現(xiàn)行工藝：見圖1。

圖1 硫酸軟骨素現(xiàn)行制備工藝流程圖

雙酶法新工藝：見圖2。

圖2 硫酸軟骨素雙酶法新工藝流程圖

2.2 理化分析

澄清度和蛋白質(zhì)均參照美國藥典31版測定。硫酸軟骨素含量參照美國藥典31版硫酸軟骨素鈉鹽項下的氯化十六烷吡啶（cetylpyridinium chloride，CPC）測定法測定。結(jié)果見表1。生產(chǎn)同期與投入輔助用量比較結(jié)果見表2。

3 討論

按照上述2種工藝生產(chǎn)的產(chǎn)品，澄清度和蛋白質(zhì)均合格，而雙酶法新工藝在指標(biāo)上要優(yōu)于現(xiàn)行工藝。這與復(fù)合蛋白酶自身的特點有關(guān)，其酶系中主要含有膠原蛋白酶，同時含有脂肪酶、糖元酶、核酸酶等，在硫酸軟骨素提取過程中能徹底水解膠原蛋白、脂肪和糖元。

表1 2種硫酸軟骨素工藝產(chǎn)品理化分析結(jié)果

表2 2種硫酸軟骨素工藝生產(chǎn)周期和投入輔料比較結(jié)果

按照上述2種工藝生產(chǎn)的產(chǎn)品，硫酸軟骨素含量均超過了90％。雙酶法新工藝雖然去掉堿提這一步，但由于引進新型復(fù)合酶，在兩種酶的合理使用上進行了改進，有著同樣的結(jié)果。

雙酶法新工藝在生產(chǎn)周期上，每批縮短14h，在實際生產(chǎn)中有著重要意義，在同樣的廠房和設(shè)備下，能夠增加批次，提高產(chǎn)量。在生產(chǎn)用輔料上，每批可節(jié)省氫氧化鈉90 kg、鹽酸324 L、雙氧水50 L，具有降低成本，提高產(chǎn)品市場競爭力的現(xiàn)實意義。

雙酶法新工藝具有操作方便、易控制等特點，且提取條件范圍廣（pH為6.5～9.0，溫度50～56℃），反應(yīng)溫和，過濾速度快，工藝操作方便，易于控制。

[1]奚 俊，張有森.對硫酸軟骨素傳統(tǒng)提取方法的改進[J].生物學(xué)雜志，2000，17（6）：33－34.