吳萬振 于恩彥 任愛華 朱利月 周建妹 王 強

輕度認知功能障礙淋巴細胞及炎癥蛋白檢測

吳萬振 于恩彥 任愛華 朱利月 周建妹 王 強

目的 探討MCI認知功能與淋巴細胞及炎癥蛋白的關系。方法 研究阿爾茨海默病(AD，36例）、輕度認知障礙(MCI，34例）及認知功能正常老年人(認知正常組，36人）的外周血淋巴細胞亞群、免疫球蛋白及炎性蛋白的差異。結果 認知正常組、MCI組與AD患者的免疫球蛋白G(IgG）濃度中位數(shù)依次為10.5g/L、10.6g/L、13.1g/L(χ2=14.28，P＜0.01）；輔助性T淋巴細胞(TH）比例的中位數(shù)依次為41%、35%、37%(χ2=9.96，P＜0.01）；三組間差異有統(tǒng)計學意義。其中認知正常組與MCI組的IgG差異無統(tǒng)計學意義(Z=0.64，P=0.52），而AD組IgG水平高于MCI組(Z=3.26，P＜0.01）和認知正常組(Z=3.22，P＜0.01）；認知正常組TH高于AD組(Z=2.55，P＜0.05）和MCI組(Z=2.95，P＜0.01），而MCI組與AD組的TH差異無統(tǒng)計學意義(Z=0.18，P=0.86）。結論 IgG可能在AD與MCI、認知功能正常者的鑒別方面具有重要意義；TH水平降低可能是認知功能受損的標志。

輕度認知障礙 阿爾茨海默病 輔助性T淋巴細胞

阿爾茨海默病(Alzheimer disease，AD）是一組病因未明的原發(fā)性退行性腦變性疾病，多起病于老年期，潛隱起病，以智能損害為主，緩慢不可逆地進展(2年或更長）。但病因尚不清楚，近年來，越來越多的研究表明AD起病及其發(fā)展過程中與腦內(nèi)炎癥改變有關［1］。輕度認知障礙(mild cognition impairment，MCI）描述的是介于正常老化和AD之間的一種過渡階段的認知狀態(tài)［2］，本研究檢測認知功能正常老年人、AD及MCI患者外周血淋巴細胞及炎癥相關物質(zhì)，探討炎癥與認知功能的關系。

1 對象與方法

1.1 研究對象

病例組研究對象來源于2006年8月—2008年8月在我院住院年齡大于60歲的患者。

AD組：采用簡易智力狀態(tài)檢查［3］(minimentalstatus examination，MMSE）以及臨床癡呆評分量表［4］(clinical dementia rating，CDR）作為篩選工具，其中，評分標準如下：0提示健康，0.5提示可疑癡呆，1.0為輕度癡呆，1.5為中度癡呆，2.0為重度癡呆［4］。再采用美國國立神經(jīng)病語言機能紊亂和卒中研究所及阿爾茨海默病和相關疾病協(xié)會的標準［5］作出可能AD的診斷。

MCI組，主要為認知功能受到損害，但是尚未達到癡呆的程度，參考Grundman［6］標準，納入標準為：①主訴記憶障礙，而且有知情者證實；②總體認知功能正常，但可有某一認知方面的變化；③日常生活能力基本正常；④與相同年齡和同等教育程度者相比，存在記憶損害，記憶功能評分在這些匹配組分值1.5個標準差以下，亦即MMSE總分24～28分，CDR評分為0.5分；⑤不夠癡呆的標準。

認知功能正常老年組(簡稱認知正常組），主要來源于參加社區(qū)健康宣教者，沒有記憶力明顯下降的主訴，社會功能正常，MMSE總分30分。

排除具有明確證據(jù)的感染(體溫＞37.2℃，白細胞或者中性粒細胞增多），使用免疫抑制劑者。

研究經(jīng)過本院倫理委員會審核通過，所有的受試者或家屬均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

檢測認知正常組、MCI組與AD患者外周血淋巴細胞亞群(TT為總T淋巴細胞，TB為總B淋巴細胞，TH為輔助性T淋巴細胞，TS為抑制性T淋巴細胞，TNK為總自然殺傷細胞），免疫球蛋白(IgA，IgG，IgM）及炎性蛋白(AAG為α1-酸性糖蛋白，CER為銅藍蛋白，HPT為觸珠蛋白）。檢測淋巴細胞方法，抽取外周靜脈血，EDTA-K2抗凝，采用Becton Dickinson，F(xiàn)ACScanlibur流式細胞儀，雙色檢測法，采用Becton Dickinson simultest IMK-lymphocyte原裝配套試劑盒，嚴格按照說明書流程操作；炎癥相關物質(zhì)檢測方法，抽取外周靜脈血，分離血清，采用Beckman Immage 800特種蛋白儀檢測炎癥相關物質(zhì)，試劑采用Beckman原裝配套試劑盒，嚴格按照說明書流程操作。

1.3 統(tǒng)計方法

所有資料均使用SPSS11.5統(tǒng)計軟件包分析，符合正態(tài)分布的計量資料用均數(shù)±標準差表示，用方差分析進行檢驗。不符合正態(tài)分布的計量資料用中位數(shù)表示，采用秩轉(zhuǎn)換的非參數(shù)檢驗，多個樣本之間比較采用Kruskal-Wallis檢驗，兩組之間比較用Mann-Whitney檢驗，以P＜0.05為檢驗水準。

2 結果

本研究納入受試者情況如下：AD組共36例，男性26例，女性10例，平均年齡(83.2±3.5）歲，MMSE得分為(13.9±8.7）分，CDR評分為1～3分。MCI組共34例，男性26例，女性8例，平均年齡(81.9±4.0）歲，MMSE得分為(26.2±1.7）分，CDR評分為0.5分。認知正常對照組共36人，男性24人，女性12人，平均年齡(81.5±3.4）歲，CDR評分為0分。三組的性別構成(χ2=0.84，P=0.65）、年齡(F=2.15，P=0.12）差異無統(tǒng)計學意義。

三組檢測結果見表1。認知正常組、MCI組與AD患者三組間的IgG和TH差別具有統(tǒng)計學意義。其中認知正常組與MCI組的IgG差異無統(tǒng)計學意義(Z=0.64，P=0.52），而MCI組IgG水平低于AD組(Z=3.26，P＜0.01），認知正常組IgG水平低于AD組(Z=3.22，P＜0.01）；認知正常組TH高于AD組(Z=2.55，P＜0.05）和MCI組(Z=2.95，P＜0.01），而MCI組與AD組的TH差異無統(tǒng)計學意義(Z= 0.18，P=0.86）。三組間α1-酸性糖蛋白，銅藍蛋白以及觸珠蛋白差異無統(tǒng)計學意義。

表1 認知正常組、MCI與AD患者外周血淋巴細胞亞群免疫球蛋白及炎性蛋白檢測結果

3 討論

近年來研究發(fā)現(xiàn)在AD患者腦組織病理變化中伴隨某些腦內(nèi)免疫反應，并與病情變化有一定的聯(lián)系，在疾病的進程中，神經(jīng)炎癥反應包括有利和有害作用。AD患者神經(jīng)病理研究表明，小膠質(zhì)細胞的活化比較早，要先于老年斑和神經(jīng)纖維纏結的形成?；罨男∧z質(zhì)細胞產(chǎn)生并釋放潛在的毒性物質(zhì)，包括氧自由基，致炎癥細胞因子，興奮性毒素和蛋白酶，這可能破壞鄰近的神經(jīng)元。除了產(chǎn)生致炎癥細胞因子，小膠質(zhì)細胞也可以產(chǎn)生抗炎癥細胞因子，比如白介素(IL）-10［7］。這些發(fā)現(xiàn)提示AD患者腦部免疫功能改變，同時發(fā)現(xiàn)AD患者存在著外周淋巴細胞免疫功能的改變［8］。

研究提示，AD患者TT的百分比低于健康對照組［8］，本研究顯示，AD組TT水平與認知正常組差異無統(tǒng)計學意義，結果的不同可能與樣本的來源、數(shù)量及方法等多種因素有關，但本研究AD組TH水平低于認知正常組，支持重度AD患者TH亞組水平明顯降低［9］的結論，這可能是因為TH淋巴細胞在AD患者細胞調(diào)亡中表現(xiàn)出更強的易損性［10］。本研究顯示，AD組與MCI組TH水平差異無統(tǒng)計學意義，提示MCI作為AD的臨床前狀態(tài)，在外周淋巴細胞免疫功能的改變有別于認知功能正常者，提示TH水平降低可能是認知功能受損的標志。Magaki［11］對MCI的研究中，發(fā)現(xiàn)細胞因子IL-6，IL-8，IL-10產(chǎn)生增加，表明免疫活化是一個在AD之前的早期現(xiàn)象，而MCI作為癡呆的臨床前期，TH受到的影響更大；在癡呆患者中，TH比例稍增加推測可能隨著疾病的進程，認知功能的下降，免疫狀態(tài)處于新的動態(tài)平衡，CD4+免疫細胞數(shù)目略微恢復。然而，也存在不同的發(fā)現(xiàn)［8］。TH細胞主要是通過分泌細胞因子，如γ-干擾素(IFN-γ），IL-2，IL-10等發(fā)揮免疫功能，IFN-γ活化巨噬細胞，還能促進IgG的生成，IgG能夠通過調(diào)理作用和激活補體系統(tǒng)促進巨噬細胞的吞噬和殺傷能力；IL-2刺激激活的T細胞增生和產(chǎn)生細胞因子，促進炎癥反應；IL-10可以抑制促炎癥細胞因子的產(chǎn)生，抑制T細胞產(chǎn)生IL-2，并且抑制抗原特異性T細胞的激活，以及抑制單核細胞和巨噬細胞的活性［12］。

IgG是血清和細胞外液中含量最高的免疫球蛋白，是再次免疫應答的主要抗體，其親和力高，分布廣泛，通過經(jīng)典途徑活化補體，并且可以與巨噬細胞、NK細胞結合，發(fā)揮調(diào)理作用，以及抗體依賴細胞介導的細胞毒作用［12］。有一些證據(jù)表明，AD患者血清或者外周循環(huán)細胞出現(xiàn)特異性的免疫改變［8，13］。本研究結果顯示，AD患者的IgG含量較MCI組與健康對照組明顯升高，表明AD患者存在著外周淋巴細胞免疫功能的改變，支持前述的研究結果，雖然，AD患者的IgG含量升高的機制還不清楚，但這一結果提示IgG含量在鑒別AD與MCI及認知功能正常者的方面可能具有重要意義。

α1-酸性糖蛋白、銅藍蛋白以及觸珠蛋白為非特異性急性反應相蛋白，血清中含量如果升高，可能預示某種疾病或病理狀態(tài)［14］，其在AD中的研究相對較少［15］，而在MCI中研究則未見報道。本研究三組間三者的差異無統(tǒng)計學意義，但我們做的只是初步的探討，有必要擴大樣本進一步驗證這一結果。

由于MCI描述的是介于正常老化和癡呆之間的一種過渡階段的認知狀態(tài)，因此隨著潛在的生理和病理過程的不同，MCI組可能存在著顯著的異質(zhì)性［2］。我們選擇的MCI同樣存在這些問題，因此需要動態(tài)觀察這組患者認知功能以及其免疫功能的變化。AD腦內(nèi)免疫反應是一個復雜的過程，其外周炎癥反應尚需進一步探討。

1 Cohen RM.The role of the immune system in Alzheimer's disease. Focus，2009，7(1）：28-35.

2 吳萬振，于恩彥.輕度認知障礙概念和神經(jīng)心理學研究進展.神經(jīng)疾病與精神衛(wèi)生，2007，7(4）：311-315.

3 張明園.精神科評定量表手冊.長沙：湖南科技出版社，2003：184-188.

4 Morris JC.The clinical dementia rating(CDR）：current version and scoring rules.Neurology，1993，43(11）：2412-2414.

5 McKhann G，Drachman D，F(xiàn)olstein M，et al.Clinical diagnosis of Alzheimer's disease：report of the NINCDS-ADRDA work group under the auspices of department of health and human service task forceon Alzheimer's disease.Neurology，1984，34(7）：939-944.

6 Grundman M，Petersen RC，F(xiàn)erris SH，et al.Alzheimer's disease cooperative study.Mild cognitive impairment can be distinguished from Alzheimer disease and normal aging for clinical trials.Arch Neurol，2004，61(1）：59-66.

7 Rogers J，Strohmeyer R，Kovelowski CJ，et al.Microglia and inflammatory mechanisms in the clearance of amyloid beta peptide.Glia，2002，40(2）：260-269.

8 Richartz-Salzburger E，Batra A，Stransky E，et al.Altered lymphocyte distribution in Alzheimer's disease.J Psychiatr Res，2007，41(1 -2）：174-178.

9 Bonotis K，Krikki E，Holeva V，et al.Systemic immune aberrations in Alzheimer's disease patients.J Neuroimmunol，2008，193(1-2）：183-187.

10 Schindowski K，Peters J，Gorriz C，et al.Apoptosis of CD4+T and natural killer cells in Alzheimer's disease.Pharmacopsychiat，2006， 39(6）：220-228.

11 Magaki S，Mueller C，Dickson C，et al.Increased production of inflammatory cytokines in mild cognitive impairment.Exp Gerontol，2007，42(3）：233-240.

12 陳慰峰.醫(yī)學免疫學.4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005.

13 Akiyama H，Barger S，Barnum S，et al.Inflammation and Alzheimer's disease.Neurobiol Aging，2000，21(3）：383-421.

14 李金恒，李勇，許勁秋，等.健康男性成人血清α1-酸性糖蛋白濃度及其與年齡的相互關系.臨床檢驗雜志，1999，17(5）：289-290.

15 Marianne JE，Mirjam IG，John MM，et al.Inflammatory proteins in plasma and the risk of dementia：the Rotterdam study.Arch Neurol，2004，61(5）：668-672.

Objective：To investigate the relationship between inflammation and cognitive function. Methods：The differences of peripheral blood lymphocyte subsets，immunoglobulin and inflammatory protein among Alzheimerˊs disease(AD，n=36），mild cognitive impairment(MCI，n=34）and healthy elderly(n= 36）were examined.Results：The median levels of immunoglobulin G(IgG）and the percentages of helper T lymphocytes(TH）were 10.5g/L，10.6g/L，13.1g/L(χ2=14.28，P＜0.01）and 41%，35%，37%(χ2=9.96，P＜0.01），respectively，among healthy elderly，MCI and AD，in that order.There were statistically significant among three groups.There was no statistically significant difference in IgG between healthy elderly and MCI(Z =0.64，P=0.52）.The level of IgG was higher in AD than in MCI(Z=3.26，P＜0.01）and healthy elderly (Z=3.22，P＜0.01）.The level of TH was higher in healthy elderly than in AD(Z=2.55，P＜0.05）and MCI(Z=2.95，P＜0.01）.There was no statistically significant difference in TH between MCI and AD(Z= 0.18，P=0.86）.Conclusion：IgG may play an important role in differentiating healthy elderly，MCI and AD. Reduction in TH level could be a sign of cognitive impairment.

Mild cognitive impairment Alzheimer's disease Helper T lymphocyte

2009-06-01）

(本文編輯：張紅霞）

Examinations of lymphocytes and inflammatory proteins in mild cognitive impairment Wu Wanzhen，Yu Enyan，Ren Aihua，Zhu Liyue，Zhou Jianmei，Wang Qiang.Zhejiang Hospital of Zhejiang Provence，Hangzhou 310013

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計劃項目(2006A013）

浙江省浙江醫(yī)院 310013。通信作者：于恩彥，電子信箱y_enyan@yahoo.com.cn