于開紅(江蘇省徐州市中醫(yī)院制劑室，徐州市 221009)

五參二連顆粒為我院自制制劑，主要由太子參、丹參、三七、玄參、苦參、黃連、連翹、蓮子、茯苓、酸棗仁、柏子仁、甘草(炙)、玉竹、陳皮、琥珀等10幾味中藥組成，具有清熱安神、益氣養(yǎng)陰、活血通脈的功效。為了更好地控制質(zhì)量，本文以方中陳皮的主要成分橙皮苷[1，2]為指標(biāo)，應(yīng)用高效液相色譜法建立了含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀:Waters2695泵、Waters2996檢測(cè)器。橙皮苷對(duì)照品(110721－200512，中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用)，甲醇為色譜純 ，其他試劑為分析純，水為重蒸水。五參二連顆粒(批號(hào):070401，070402，070404)為我院制劑室自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

圖1 橙皮苷色譜圖Fig 1 HPLC chromatogram of hesperidin

色譜柱為 C18柱(ZORBAX SB，4.6 ×150 mm，5 μm);流動(dòng)相為甲醇 －0.5%冰醋酸溶液(38∶62);流速 1.0 mL·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng)為283 nm，理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥36小時(shí)的橙皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.103 6 mg的溶液，作為貯備液。分別精密吸取貯備液1、3、9、12、15 mL置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。各精密吸取10 μL，分別注入液相色譜儀，測(cè)定，測(cè)得峰面積。用峰面積與進(jìn)樣濃度進(jìn)行線性回歸處理。得回歸方程 Y=1.12×104+1.82×107X;相關(guān)系數(shù) r=0.999 9。表明橙皮苷濃度在0.004 144～0.062 160 mg·mL－1之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 空白對(duì)照試驗(yàn)

按本制劑處方比例及制備工藝，不加入陳皮藥材，制得缺陳皮的空白樣品。按樣品溶液制備方法制備空白對(duì)照溶液。分別精密吸取橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照溶液、樣品溶液和空白對(duì)照溶液各10 μL，分別進(jìn)樣測(cè)定，可見:橙皮苷峰位在 7.0分鐘左右，樣品溶液有同樣的吸收峰，而空白溶液在相應(yīng)位置無(wú)吸收，不影響橙皮苷含量定量。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按樣品溶液制備方法制得同一批號(hào)供試溶液，精密吸取供試品溶液 10 μL注入液相色譜儀測(cè)定。分別于 0、2、4、6、8、10、12小時(shí)測(cè)定1次。結(jié)果峰面積的 RSD%為0.78%。表明供試品溶液在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取貯備液10 mL置25 mL量瓶中，用水稀釋至刻度作為對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液(0.04144 mg·mL－1)10 μL連續(xù)進(jìn)樣 6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算精密度，RSD值為0.39%，結(jié)果表明精密度良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批號(hào)五參二連顆粒樣品6份，照測(cè)定法項(xiàng)下供試品溶液制備方法進(jìn)行處理，計(jì)算樣品中橙皮苷含量均值為 1.82 mg·g－1，RSD=1.43%(n=6)，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.9 回收率試驗(yàn)

釆用加樣回收試驗(yàn)方法。精密稱取已知橙皮苷含量的樣品(070401)6份，分別置具塞錐形瓶中，分別精密加入橙皮苷貯備液(濃度 0.103 6 mg·mL－1)5 mL，精密加甲醇 20 mL，按樣品溶液制備方法制得供試溶液。依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。結(jié)果表明試驗(yàn)方法的回收率高，符合含量測(cè)定要求。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 1 Results of recovery test

2.10 樣品含量測(cè)定

取五參二連顆粒樣品3批，照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試液，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL注入液相色譜儀，按外標(biāo)峰面積法計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

表2 3批樣品含量測(cè)定Tab 2 Results of content determination of 3 batches of samples

3 討論

試驗(yàn)曾采用不同的提取方式、不同的提取溶劑、不同的提取時(shí)間對(duì)樣品進(jìn)行處理，結(jié)果以甲醇超聲處理20分鐘測(cè)定結(jié)果較為滿意，提取的雜質(zhì)少，干擾小，橙皮苷峰與其他組分峰能達(dá)到良好的基線分離。本實(shí)驗(yàn)建立的五參二連顆粒中陳皮中橙皮苷的HPLC測(cè)定方法，該法分離效果好，且簡(jiǎn)便快速，重現(xiàn)性好，可用于本制劑的質(zhì)量控制。

[1]周宜斌，馮海龍.高效液相色譜法測(cè)定沉香化氣丸中橙皮苷的含量[J]. 中國(guó)藥師，2006，9(10):907.

[2]張紅巖，耿 俐，唐 巖，等.HPLC法測(cè)定活血通脈片中橙皮苷的含量[J].中國(guó)藥師，2009，12(3):345.