基于核殼型熒光納米顆粒檢測的人免疫球蛋白G免疫分析方法研究

徐歡, 王周平＊, 楊震, 吳佳

(1.食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室,江南大學(xué),江蘇無錫 214122;2.江南大學(xué)食品學(xué)院,江蘇無錫 214122)

基于核殼型熒光納米顆粒檢測的人免疫球蛋白G免疫分析方法研究

徐歡1,2, 王周平＊1,2, 楊震1,2, 吳佳1,2

(1.食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室,江南大學(xué),江蘇無錫 214122;2.江南大學(xué)食品學(xué)院,江蘇無錫 214122)

生物分子標(biāo)記的熒光檢測技術(shù)已廣泛應(yīng)用于生物學(xué)檢測和疾病診斷。實驗利用反向微乳液技術(shù),制備出Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2熒光納米粒子。IgG的檢測是基于IgG和熒光納米顆粒標(biāo)記的羊抗人IgG的特異性結(jié)合。實驗中,IgG檢測的線性范圍為1～100 ng/mL,檢出限達到0.3 ng/mL,對30 ng/mL人IgG進行11次檢測,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.2%。實驗結(jié)果表明,該檢測新方法具有檢測靈敏度高、操作簡單和重復(fù)性好。

核殼型熒光納米顆粒;聯(lián)吡啶釕;熒光檢測;人免疫球蛋白G

免疫球蛋白G(IgG)是人體血清中含量最高的抗體,占血清中免疫球蛋白的70～80%,是唯一能通過胎盤的免疫球蛋白,具有抗菌、抗病毒、抗毒素的特性,在機體免疫防護中起著重要作用。同時, IgG還是保持人體健康的重要物質(zhì),市場上出現(xiàn)了許多富含IgG的保健食品如牛初乳片等。在臨床檢測中,IgG含量的變化也是判定病變的重要指標(biāo)。

目前,利用抗體-抗原的識別來對目標(biāo)分析物進行定量和定性分析,即免疫分析,在臨床檢測和環(huán)境監(jiān)測中有著廣泛的應(yīng)用,但現(xiàn)有的每一種免疫分析方法都有它固有的缺點[1]。在20世紀(jì)70年代早期建立起來的放射免疫雖然在測定中具有較高的選擇性和靈敏度,但是標(biāo)記物有放射性對環(huán)境有污染和對人體有危害作用[2]。酶聯(lián)免疫分析技術(shù)因為其分析的高選擇性,而且無需放射性試劑,因而已經(jīng)有許多商品化的免疫試劑盒出現(xiàn)[3]。然而,標(biāo)記酶需要特別的保存,而且用比色法檢測時一般均要用到致癌性物質(zhì)作為標(biāo)記物。化學(xué)發(fā)光免疫分析有明顯的優(yōu)勢,比如具有靈敏度高、操作簡單、測定快速和使用成本低等優(yōu)點[4]。由于它的高靈敏度,其在生物分析和臨床檢測方面都有很好的應(yīng)用。雖然有關(guān)化學(xué)發(fā)光免疫分析的報道很多,但是,化學(xué)發(fā)光信號靈敏,在實際應(yīng)用中要求操作仔細(xì),并要避免所使用水中金屬離子對化學(xué)發(fā)光信號的影響[5]。熒光免疫分析法已經(jīng)廣泛地被用于臨床檢測和復(fù)雜樣品的分析研究中[6]。然而,這傳統(tǒng)的熒光免疫分析法具有標(biāo)記效率低、耐光性差、熒光強度相對較低等缺點[7-8]。而文獻報道的其他方法或儀器昂貴,或操作復(fù)雜,或耗時長。建立既簡單又靈敏的免疫分析方法對疾病的早期診斷和提高治療效果具有重要的意義。最近研究表明,納米粒子標(biāo)記熒光免疫分析很有希望代替放射免疫分析、酶聯(lián)免疫分析和傳統(tǒng)的熒光免疫分析[9]。

納米粒子標(biāo)記熒光免疫分析法有許多優(yōu)點,如檢出限低、耗樣量少、選擇性好和靈敏度高等。在過去的幾年中,納米粒子標(biāo)記熒光免疫分析法中研究最多的納米粒子標(biāo)記物就是核-殼型熒光納米粒子[10-12]。因為數(shù)以千計的熒光分子被包埋在一個對熒光染料具有保護作用免于其光漂白的納米粒子基質(zhì)中,所以其作為標(biāo)記物比較傳統(tǒng)的有機熒光染料標(biāo)記物而言,核-殼型熒光納米粒子提供了較好的耐光性和更高的光信號。并且該熒光納米粒子能夠容易地在溫和的條件和簡單的操作程序下使用較廉價的試劑制備得到。而且其粒徑大小一致,容易修飾,這些優(yōu)點為各種不同的科學(xué)研究和臨床應(yīng)用提供了便利[13-20]。

在食品安全越來越受政府、大眾關(guān)注的今天,如何實現(xiàn)低檢測限,快速分析食品中的農(nóng)殘、抗生素等有害物質(zhì),激素、酶、蛋白質(zhì)、DNA、致病菌等生物活性物質(zhì)已經(jīng)成為科學(xué)研究的熱點。建立一種新型、快速的免疫球蛋白檢測分析模式,對食品安全、生物分析檢測具有很好的借鑒作用。在本工作中,以Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子(FNs)為標(biāo)記物,“三明治”夾心免疫分析為原理,建立了一種測定IgG熒光免疫分析新方法。根據(jù)待測樣品中IgG與羊抗人IgG抗體標(biāo)記的Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子之間特異性的交互作用和熒光強度的強弱實現(xiàn)了對其的定量分析。該檢測新方法具有操作簡單、檢測靈敏度高和精密度高的特點,可被用于血清中IgG的測定。

1 材料與方法

1.1 儀器

DF-101S型集熱式磁力加熱攪拌器:河南鞏義市予華儀器廠產(chǎn)品;用于熒光納米粒子合成;TU-1900紫外可見光分光光度計:北京普析通用儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)品,用于測定抗體吸收光譜;TecnaiG220透射電鏡(TEM):美國FEI公司產(chǎn)品,用于合成的熒光納米粒子的形貌表征;5804R高速離心機:上海泰亞賽?？萍及l(fā)展有限公司產(chǎn)品,用于納米粒子及生物功能化納米粒子離心分離;KJ-300超聲波發(fā)生器用于納米材料的制備和分散處理。熒光/化學(xué)發(fā)光儀:用于熒光強度檢測;96微孔板為加拿大BBI公司產(chǎn)品。

1.2 試劑

聯(lián)吡啶釕、牛血清蛋白(BSA):購于美國Fluka公司;(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷APTES:購于美國Alfa Aesar公司;羊抗人IgG、IgG、牛血清蛋白(BSA):購于北京鼎國生物科技有限公司;環(huán)己烷、正己醇、TX-100、正硅酸乙酯TEOS、丙酮、氨水(28%)、25%戊二醛、碳酸鈉、氫氧化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二納、氯化鈉、氯化鉀、濃鹽酸等購于中國醫(yī)藥上?；瘜W(xué)試劑公司;超純水購于無錫華潤華晶微電子有限公司。

實驗所用試劑均為分析純。

1.3 實驗方法

1.3.1 聯(lián)吡啶釕摻雜的二氧化硅納米材料的制備與表征 熒光納米粒子制備方法有許多種。但反相微乳液聚合法是制備熒光染料摻雜熒光納米粒子最常用的方法之一。該法制備條件溫和,成本低,并且操作過程簡單。制得的熒光納米粒子粒徑均勻,分散行好,易于標(biāo)記。在這項實驗中Ru (bpy)32+摻雜的SiO2納米粒子的制備按照文獻并稍作改動制備而成。

其制備的具體方法[21-22]如下:首先在室溫下,將1.77 mL表面活性劑TX-100,7.5 mL環(huán)己烷和1.8 mL助表面活性劑正己醇用磁力攪拌器混合30 min。然后,加入0.48 mL Ru(bpy)3Cl2熒光染料溶液,并持續(xù)攪拌至混合物形成均勻的油包水微乳液體系。加入100μL TEOS,然后加入60μL N H3· H2O(28～30 wt.%)開始水解反應(yīng)。持續(xù)攪拌24 h,然后加入100μL APTES和60μL NH3·H2O并繼續(xù)攪拌。24 h后,加入25 mL丙酮破乳。在10 000 r/min下,離心10 min,收集產(chǎn)物。用乙醇和水超聲、離心洗滌數(shù)次,以除去納米粒子表面吸附的表面活性劑和吸附的Ru(bpy)3Cl2熒光染料。室溫干燥后,用熒光分光光度計和透射電鏡對其進行表征。

1.3.2 聯(lián)吡啶釕摻雜的SiO2納米材料標(biāo)記羊抗人IgG 按常規(guī)的戊二醛法將羊抗人IgG固定在Ru (bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子的表面[23]。具體步驟如下:

1)將2 mg Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子分散在含5%戊二醛的PBS緩沖溶液中,持續(xù)攪拌2 h。

2)用PBS緩沖液離心清洗3次,將納米粒子分散在含有羊抗人IgG的PBS溶液中,4℃振動孵育12 h。

3)將所得產(chǎn)物用PBS緩沖液清洗3次后,4℃保存在PBS緩沖液中。

1.3.3 檢測IgG的分析過程 實驗按照雙抗體夾心法免疫分析步驟進行。用p H值9.6 0.05 mol/L包被液稀釋羊抗人IgG后,在96孔板的每孔中加入100μL。將96孔板4℃放置過夜,然后用PBST清洗3次。加入IgG標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品(每孔100μL),37℃孵育1 h,用PBST清洗后,再加入羊抗人IgG修飾的Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子(每孔100μL),37℃孵育1 h。然后,用PBS清洗3次。最后,在熒光/化學(xué)發(fā)光儀上測定熒光強度,根據(jù)熒光強度進行定量。

1.3.4 人血清樣品中的IgG測定

1)樣品處理:隨機留取門診患者的靜脈血標(biāo)本,2 500 g離心10 min。分離血清,于-20℃冰箱保存。

2)免疫濁度法:IgG待測血清和標(biāo)準(zhǔn)血清各按1∶10用生理鹽水稀釋,各取5根試管,每管加入10 μL血清和1 mL應(yīng)用抗體,混勻各管,37℃水浴10 min后,振蕩混勻,在波長340 nm處,用0.5 nm的比色杯,以生理鹽水作空白調(diào)零,在酶標(biāo)儀上測定溶液的吸光度。

3)基于納米顆粒標(biāo)記的熒光免疫分析:按本文1.3.3所述方法,待測物為10μL1∶100 000的稀釋血清。5個微孔中平行地加入10μL血清,經(jīng)免疫反應(yīng)后測定熒光強度,來確定人血清中IgG的量。

2 結(jié)果與分析

2.1 聯(lián)吡啶釕摻雜的二氧化硅納米粒子的表征

聯(lián)吡啶釕是一種廣泛使用的無機染料分子,利用Ru(bpy)32+與SiO2納米粒子之間的靜電吸引作用可以成功的制備Ru(bpy)32+摻雜的SiO2納米粒子。TEOS和APTES通過共解,在納米粒子表面形成帶有氨基的單分散的球形Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子。而TEOS的水解速度大于APTES的水解速度。在納米粒子表面,Si–O–Si鍵與TEOS水解產(chǎn)物的進一步結(jié)合可以抑制APTES水解產(chǎn)物氨的形成,未水解的APTES被包納米粒子中心,為解決這一問題,在W/O微乳液中,先加入TEOS水解24 h后,加入APTES。利用此方法,通過在納米粒子中加入APTES,修飾納米粒子表面,使結(jié)更容易,更多的自由氨基被直接引入在納米粒子表面。

對所制備的納米顆粒進行透射電子顯微鏡(TEM)分析,從圖1中可以看到,所制備的聯(lián)吡啶釕摻雜的SiO2納米顆粒形成了規(guī)則的球形,直徑在100±5 nm左右,內(nèi)部顏色比近表面的地方要深,原因是在接近球心的地方所包覆的染料分子數(shù)較多,且熒光納米粒子具有很好的分散性,有利于其在生物標(biāo)記中的應(yīng)用。

圖1 所制備的熒光納米TEM形貌Fig.1 TEM image of fluorescence nanoparticles

利用熒光分光光度計對納米粒子的熒光性質(zhì)進行了表征。聯(lián)吡啶釕染料水溶液在460 nm的激發(fā)光下的最大發(fā)射波長是595 nm。如圖2所示,當(dāng)利用460 nm作為熒光染料和納米材料的激發(fā)波長時,相對于熒光染料而言,納米材料的發(fā)射波長向長波方向移動了3 nm,抗體修飾后的熒光納米顆粒的發(fā)射波長向長波方向移動了2 nm,表明,Rubpy熒光染料的特征光譜在加入納米粒子后和抗體修飾后并沒有明顯改變。

圖2 Rubpy染料(a)、熒光納米顆粒(b)和抗體修飾后的熒光納米顆粒(c)的熒光發(fā)射光譜(激發(fā)波長為460nm)Fig.2 Emission spectrum upon excitation at 460nm of Rubpy dry(a)、Ru(bpy)32+-doped silica nanoparticles(b)and nanoparticle-labeledantibody(c)

圖3 熒光納米顆粒的激發(fā)光譜Fig.3 Excitation spectrum of the NFs

2.2 聯(lián)吡啶釕摻雜的二氧化硅納米粒子光穩(wěn)定性研究

光漂白現(xiàn)象是由于溶液中溶劑分子與熒光染料分子之間作用的結(jié)果。通常被認(rèn)為是由于溶液中溶解氧分子和熒光染料分子之間發(fā)生了反應(yīng)。為了研究熒光納米粒子的光穩(wěn)定性,考察了其熒光強度隨照射時間的變化情況。將熒光納米材料和熒光染料配制成溶液,用150 W氙燈連續(xù)照射熒光染料Ru(bpy)3Cl2、熒光納米粒子的溶液,每2 min記錄一次熒光強度。從圖4中可以看出,聯(lián)吡啶釕摻雜的二氧化硅納米材料具有較好的光穩(wěn)定性,用氙燈連續(xù)照射60 min后熒光強度僅減少了9.9%。而熒光染料Ru(bpy)3Cl2光穩(wěn)定性較差,用氙燈連續(xù)照射60 min后熒光強度減少了55.1%。說明熒光染料受到二氧化硅基質(zhì)的保護后熒光穩(wěn)定性得到了提高。

圖4 熒光納米顆粒和Ru(bpy)3Cl2染料的光穩(wěn)定性Fig.4 Photostability of fluorescence nanoparticles and Ru(bpy)3Cl2dry in aqueous solutions

2.3 染料聯(lián)吡啶釕的用量對納米顆粒熒光強度的影響

當(dāng)制備溶液中Ru(bpy)3Cl2的濃度變化時熒光納米粒子的熒光強度也隨之發(fā)生變化。對制備溶液中Ru(bpy)3Cl2的濃度進行了優(yōu)化。如圖5所示,當(dāng)Ru(bpy)3Cl2的濃度由小增大時(4、8、12、16、20、25、30 mmol/L),熒光納米粒子的熒光強度也逐漸增大。這是由于Ru(bpy)3Cl2的濃度的增大,生成的納米粒子包埋的Ru(bpy)3Cl2分子增多,所以熒光強度增大。當(dāng)Ru(bpy)3Cl2的濃度大于20 mmol/L時,熒光納米粒子的熒光強度增大變化緩慢。這是由于在高濃度Ru(bpy)3Cl2溶液條件下,一方面由于生成的納米粒子包埋的Ru(bpy)3Cl2分子趨于飽和,另一方面,由于大量的Ru(bpy)3Cl2分子包埋在一個納米粒子中,Ru(bpy)3Cl2分子之間距離減小,熒光淬滅變得嚴(yán)重,所以熒光強度增大趨勢減緩。選擇20 mmol/L的Ru(bpy)3Cl2溶液作為最佳條件。

2.4 抗體標(biāo)記Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子

TEOS和APTES水解后,納米粒子表面引入一些氨基。這些氨基使納米粒子表面的修飾及結(jié)合更容易。實驗原理如圖6所示,Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子與戊二醛結(jié)合,然后結(jié)合戊二醛的納米粒子通過醛基和抗體的氨基反應(yīng)。在本實驗中,先在96微孔板上固定羊抗人IgG一抗,加入待測IgG,兩者發(fā)生特異性結(jié)合,再加入Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子修飾的羊抗人IgG二抗,形成“三明治”夾心結(jié)構(gòu),根據(jù)納米粒子的熒光強度來對IgG進行定量。

圖5 Rubpy濃度對熒光強度的影響Fig.5 Effect of concentration of Rubpy in the preparation on the flurescence intensity

如何判斷Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子表面抗體標(biāo)記成功與否,在實驗中嚴(yán)格控制實驗條件,在Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子與羊抗人IgG抗體交聯(lián)后,利用紅外表征和紫外可見表征,說明標(biāo)記過程已經(jīng)成功的將羊抗人IgG抗體與Ru (bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子進行了交聯(lián)。紅外表征結(jié)果如圖7所示,1 089 cm-1是Si-O-Si伸縮震動的特征吸收,納米粒子和表面修飾抗體納米粒子的紅外吸收峰相比,抗體修飾的納米粒子在1 535、1 648、2 930和3 422 cm-1處有吸收,且這些吸收峰為抗體的特征吸收峰,表明抗體和納米粒子成功交聯(lián)。紫外可見表征由圖8所示,在波長280 nm處, 75μg的羊抗人IgG抗體溶液的吸收較強,而等量的羊抗人IgG抗體和納米粒子反應(yīng)后離心所得上清液吸收較弱,說明部分羊抗人IgG抗體已經(jīng)連接到氨基化的納米粒子表面,同時也說明納米粒子表面氨基化的成功。

圖6 抗體對熒光納米粒子進行修飾原理(a)和“三明治”夾心法免疫分析原理(b)Fig.6 Schematic representation of antibody immobilization process onto functionalizedfluorescent core-shell nanoparticles(a).Principle of the sandwich fluoroimmunoassay(b)

圖7 納米粒子(綠)和抗體修飾的納米粒子(紅)的紅外圖譜Fig.7 IR spectra of the Ru(bpy)-doped silica nanoparticles(green)and antibody-labeled nanoparticle(red)

圖8 羊抗人IgG(a)以及羊抗人IgG和納米粒子反應(yīng)后離心所得上清液(b)的紫外可見吸收圖譜Fig.8 Absorption spectrum of(a)goat anti-hIgGand (b)supersatant sliquor after the gost anti-hIgG conjugated nanoparticles were w ashed using centrifugationand and ultrasonication with PBS

2.5 納米粒子表面結(jié)合羊抗人IgG量的優(yōu)化

在Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子修飾中,抗體的修飾用量對免疫反應(yīng)中抗原和抗體的識別位點的數(shù)目有較大的影響,從而進一步的影響免疫測定中熒光強度。為了研究Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子表面的抗體密度對測定時熒光強度的影響,將Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子與不同量的羊抗人IgG抗體結(jié)合,然后進行免疫測定,測定熒光信號的強弱。實驗結(jié)果如圖9所示,當(dāng)羊抗人IgG抗體用量為10μg時,熒光信號僅為與50μg羊抗人IgG結(jié)合時的43%(測定IgG的濃度為10 ng/ mL)。當(dāng)抗體量從5μg到25μg到50μg變化時,響應(yīng)值隨之增加。然而,當(dāng)羊抗人IgG抗體濃度變?yōu)?5μg時,Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子的響應(yīng)值降低。因此,羊抗人IgG抗體密度的最佳濃度為75μg抗體/mg Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子。

2.6 熒光納米顆粒濃度優(yōu)化

免疫分析中,在相同的抗體密度的條件下,抗體修飾的Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子的用量對免疫測定的信號具有較大的影響。因此考察了在加入相同體積的抗體修飾的Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子溶液和相同測定抗體濃度時熒光強度的變化情況。實驗結(jié)果如圖10顯示,測定人IgG的質(zhì)量濃度為100 ng/mL,當(dāng)Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子質(zhì)量濃度在0.1至10μg/mL范圍變化時,熒光強度隨濃度的增加而增強。當(dāng)濃度繼續(xù)增加時,由于非特異性吸附的增加和標(biāo)記抗原達到飽和,使熒光強度不再增加。因此選擇10μg/mL為最佳條件。

圖9 熒光納米粒子表面抗體密度對免疫檢測的影響Fig.9 Effect of fluorescent microsphere surface antibody density on assay response.Antibody density w as increased by increasing amounts of antibody incubated per milligram of nanoparticles: 10 ug(a),25 ug(b),50 ug(c),75 ug(d)

圖10 抗體修飾的納米粒子濃度對免疫分析信號強度的影響Fig.10 Effect of nanoparticles labeled with antibody concentration on assay response at fixed 50 ul antibody per mg nanoparticles in the presence of 100ng/ml hIgG

2.7 分析性能

Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子標(biāo)記免疫分析對人IgG測定,在最佳條件下,熒光強度與人IgG質(zhì)量濃度在一定的范圍內(nèi)成正比。線性范圍1～100 ng/mL,回歸方程為IF=114 882+1191.3 [IgG](ng/mL)(如圖11),線性相關(guān)系數(shù)為R2= 0.997,檢出限為0.3 ng/mL(3σ)。對質(zhì)量濃度為50 ng/mL的人IgG測定11次的RSD為2.2%,表明該方法具有好的精密度。

2.8 分析應(yīng)用

為了評價本文所建立方法的可靠性,我們將9個不同人血清樣品用本文建立的化學(xué)發(fā)光法與免疫比濁法同時測定,結(jié)果如表2-1所示。將兩者得出的結(jié)果進行比較,可知兩者的檢測結(jié)果相關(guān)性很好,表明本文建立的方法可靠,可用于實際樣品的測定。

圖11 IgG濃度與熒光強度的關(guān)系曲線Fig.11 Calibration curve between the fluorescence intensity and concentrations of IgG

表1 人血清樣品中IgG濃度的測定值Tab.1 The measured concentration values of IgG in human serum samplesg/L

3 結(jié) 語

我們結(jié)合納米技術(shù)、生物技術(shù)和熒光標(biāo)記技術(shù),建立了一種用Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2納米粒子作為熒光標(biāo)記物測定IgG的熒光免疫分析新方法。本方法具有靈敏度高,操作簡便和精密度高的特點,已成功地應(yīng)用于人血清中IgG含量的測定,在生命體系的超痕量分析中具有非常重要的意義。

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(責(zé)任編輯:楊萌)

Fluoroimmunoassay for Human IgG Using Ru(bpy)3Cl2-doped Fluorescent Silica Nanoparticles as Labels

XU Huan1,2, WAN G Zhou-ping＊1,2, YANG Zhen1,2, WU Jia1,2
(1.State Key Laboratory of Food Science and Technology,Jiangnan University,Wuxi 214122,China;2.School of Food Science and Technology,Jiangnan University,Wuxi 214122,China)

Fluorescent-labeled molecules have been widely used in biological detection and diagnosis.In this manuscritpt,the Ru(bpy)32+-doped silica nanoparticles were firstly prepared with a modified W/O method.Human IgG(hIgG)was measured based on the specific interaction between hIgG and functionalized fluorescent core-shell nanoparticle-labeled gost anti-hIgG.The calibration graph for hIgG was linear over the range 1-100 ng/mL with a detection limit of 0.3 ng/mL.From 11 measurements,the R.S.D.is 2.2%for samples of 30 ng/mL of hIgG.The results demonstrated that the method have a potential advantages of sensitivity,simplicity and good reproducibility for the determination of hIgG,and is applicable to the determination of hIgG in serum samples.

fluorescent core-shell nanoparticle,rubpy,fluoroimmunoassay,hIgG

TL 271.5

:A

1673-1689(2010)01-0110-08

2008-06-25

國家863計劃項目(2008AA10Z419),教育部博士點基金新教師項目(20070295014),江蘇省大學(xué)生實踐創(chuàng)新項目,江南大學(xué)科學(xué)基金項目。

＊通訊作者:王周平(1974-),男,陜西鳳翔人,理學(xué)博士,教授,博士生導(dǎo)師。主要從事食品營養(yǎng)與安全分析研究。Email:wangzp@jiangnan.edu.cn