李 云
(成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院 檢驗(yàn)科,云南 昆明 650032)
嗜血桿菌(Haemophilus)是苛養(yǎng)性細(xì)菌,其中流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)和副流感嗜血桿菌(Haemophilus par lainfluenzae)是引起小兒和成人呼吸道感染的重要致病菌。近20年來,由于β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生,嗜血桿菌的耐藥性有了顯著增加,β-內(nèi)酰胺酶陰性氨芐西林耐藥流感嗜血桿菌的出現(xiàn)也給臨床治療帶來了困難[1]。因此,嗜血桿菌的分布和耐藥性的研究對(duì)臨床具有重要的意義,為此,本文對(duì)本地區(qū)的嗜血桿菌感染情況作了調(diào)查,并對(duì)相關(guān)藥敏進(jìn)行分析。
1.1.1 菌株來源 標(biāo)本為從深部咳出合格痰液和咽拭子,均來自我院2007年1~10月診斷為呼吸道感染門診及住院患者。其中,痰液705份,咽拭子55份。患者年齡為3個(gè)月到88歲。
1.1.2 試劑 含有V、X因子的嗜血桿菌專用HAE巧克力培養(yǎng)基(BIOMERIEU公司),HTM藥敏培養(yǎng)基、Nitrocefin紙片、X、V因子均購(gòu)自英國(guó)Oxoid公司,藥敏紙片為北京天壇藥物有限公司產(chǎn)品,標(biāo)準(zhǔn)菌株流感嗜血桿菌ATCC49247,購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。
1.2.1 菌株分離與鑒定 送檢標(biāo)本立即接種血平板和HAE巧克力平板,置于35℃,5%~10%二氧化碳培養(yǎng)24 h。挑取血平板上不生長(zhǎng)、巧克力平板上生長(zhǎng)的無色透明或灰白色半透明、圓形隆起、光滑、邊緣整齊,濕潤(rùn)不溶血、露滴狀菌落、并有特殊閃光,直徑0.5~1 mm的可疑菌落涂片。革蘭染色呈陰性短小桿菌、球桿、少數(shù)呈細(xì)絲狀等多形態(tài)性。同時(shí)做衛(wèi)星試驗(yàn),將可疑菌落同時(shí)接種于血平板、普通瓊脂(M-H)平板上,密涂劃線,再用金葡菌點(diǎn)種,兩點(diǎn)相距2 mm以上。35℃,5%~10%二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h。血平板衛(wèi)星試驗(yàn)陽性、M-H平板衛(wèi)星試驗(yàn)陰性者,為流感嗜血桿菌;血平板和M-H平板衛(wèi)星試驗(yàn)同時(shí)陽性者,為副流感嗜血桿菌。同時(shí)進(jìn)行V、X、X+V因子需求試驗(yàn)。根據(jù)菌落形態(tài)、染色鏡檢、衛(wèi)星試驗(yàn)及因子需求試驗(yàn)等特點(diǎn)進(jìn)行菌株鑒定[2]。疑難菌株用美國(guó)BD公司Phoenix 100全自動(dòng)鑒定藥敏儀進(jìn)行鑒定。
1.2.2 β-內(nèi)酰胺酶測(cè)定 采用頭孢硝噻吩法,按照說明書操作。將Nitrocefin紙片濕潤(rùn),涂上嗜血桿菌菌落,觀察紙片顏色變化,變紅色表示β-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)陽性,不變色為陰性。
1.2.3 藥敏試驗(yàn) 使用HTM瓊脂培養(yǎng)基,紙片擴(kuò)散法測(cè)定。結(jié)果用WHONET 5.4軟件進(jìn)行判定。標(biāo)準(zhǔn)菌株同時(shí)進(jìn)行藥敏試驗(yàn),結(jié)果符合質(zhì)控要求。
用卡方檢驗(yàn)對(duì)各組的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,以P<0.05為差異有顯著性。
760份痰液和咽拭子標(biāo)本中共檢出嗜血桿菌130株,分離率為17.11%(130/760)。其中,流感嗜血桿菌85株,占65.38%(85/130);副流感嗜血桿菌45株,占34.62%(45/130),其他嗜血桿菌未檢到。
130株嗜血桿菌中共檢出38株β-內(nèi)酰胺酶陽性菌株,產(chǎn)酶率為29.23%(38/130)。其中,流感嗜血桿菌21株,產(chǎn)酶率24.71%(21/85);副流感嗜血桿菌17株,產(chǎn)酶率37.78%(17/45)。
藥敏試驗(yàn)結(jié)果見表1。
附表 130株嗜血桿菌對(duì)10種抗生素的耐藥情況
嗜血桿菌主要寄居在人類上呼吸道黏膜,在呼吸道感染中占有極為重要的地位。嗜血桿菌常常引起下呼吸道感染、肺炎等嚴(yán)重疾病,特別是流感嗜血桿菌致病性最強(qiáng)。嗜血桿菌所致疾病分為兩類,即原發(fā)感染和繼發(fā)感染,前者主要屬于外源性感染,通過呼吸道傳播,常見于兒童;后者主要由寄居于上呼吸道的無莢膜菌株所致,常見于老人。兩類感染均可引起呼吸道本身疾患,亦可引起其他部位的感染,如菌血癥、腦膜炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎等[3]。
本院嗜血桿菌的檢出率為17.11%,低于國(guó)內(nèi)報(bào)道的20.0%[4]。其中,流感嗜血桿菌的百分率較高,為65.38%;副流感嗜血桿菌的百分率為34.62%。嗜血桿菌在普通培養(yǎng)基中根本無法檢出,其主要原因是該菌為苛養(yǎng)菌,生長(zhǎng)時(shí)需要X、V因子,所以嗜血桿菌的檢出率受多種因素影響。其中,標(biāo)本的質(zhì)量,培養(yǎng)基的質(zhì)量,實(shí)驗(yàn)方法是最重要因素,只有消除以上因素的影響才能提高檢出率。
嗜血桿菌在呼吸道感染中占有越來越重要的地位,特別是在兒童呼吸道感染中的分離率已越來越高。但繼發(fā)感染多見于成人。近年報(bào)道顯示,臨床嗜血桿菌感染中,副流感嗜血桿菌的感染率呈逐年增多趨勢(shì)。國(guó)內(nèi)外資料表明,副流感嗜血桿菌是社區(qū)獲得性肺炎和其他呼吸道感染的重要致病菌[5]。我院以流感嗜血桿菌為主,這可能與地域環(huán)境因素及抗生素使用等因素有關(guān)。
嗜血桿菌耐藥率不斷上升,其主要耐藥機(jī)制是β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生,它能水解氨芐西林。因此,對(duì)氨芐西林或阿莫西林耐藥性增長(zhǎng)是伴隨著β-內(nèi)酰胺酶陽性率增高同時(shí)發(fā)生的。本地區(qū)嗜血桿菌的β-內(nèi)酰胺酶陽性率為29.23%,其中流感嗜血桿菌產(chǎn)酶率為24.71%,副流感嗜血桿菌產(chǎn)酶率為37.78%,二者具有顯著性差異(P<0.05)。β-內(nèi)酰胺酶陽性菌株全部耐氨芐西林,未見β-內(nèi)酰胺酶陽性而對(duì)氨芐西林敏感的菌株??梢姡?內(nèi)酰胺酶陽性能預(yù)測(cè)嗜血桿菌對(duì)青霉素、氨芐西林、阿莫西林耐藥。
隨著嗜血桿菌感染的發(fā)病率不斷上升,發(fā)現(xiàn)嗜血桿菌的耐藥性也在增加。藥敏結(jié)果表明,嗜血桿菌對(duì)10種抗生素的耐藥率依次為:阿莫西林/克拉維酸<阿齊霉素/亞胺培南<頭孢他啶<頭孢呋辛<頭孢唑啉<氯霉素<氧氟沙星<氨芐西林<復(fù)方磺胺甲噁唑。流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌對(duì)各種抗生素的耐藥性略有差異,但結(jié)果沒有顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果均顯示阿莫西林/克拉維酸、阿齊霉素、亞胺培南、頭孢他啶的耐藥性較低,均小于5%,是治療的首選藥物。
造成嗜血桿菌耐藥性的主要機(jī)理是嗜血桿菌可產(chǎn)生以質(zhì)粒介導(dǎo)的β-內(nèi)酰胺酶,其次是由于細(xì)菌細(xì)胞膜通透性降低和青霉素結(jié)合蛋白的結(jié)構(gòu)位點(diǎn)發(fā)生改變,使β-內(nèi)酰胺類抗生素活性下降產(chǎn)生耐藥性。另外,廣譜抗生素的濫用,可使耐藥菌株選擇性生長(zhǎng),促進(jìn)帶菌狀態(tài)的形成。增加耐藥菌的擴(kuò)散機(jī)會(huì)[6]。
[1]朱澤航,蔡逸婷.人群呼吸道中嗜血桿菌的分布及其耐藥性[J].解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2007,25(1):13-16.
[1]ZHU ZH,CAI YT.Distribution and drug resistance study of Haemphilus in respiratory tract of crowd[J].Journal of preventive Medicine of Chinese People's Liberation Army,2007,25(1):13-16.Chinese
[2]李影林,主編.臨床微生物學(xué)及檢驗(yàn)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1995:282.
[2]LI YL.editor.Clinical Microbilogy and Inspection[M].Beijing:Public of the People's Health,1995:282.Chinese
[3]吳春鳳,姜煥好,曾東良,等.2004至2005年我院嗜血桿菌的分離及其耐藥性[J].中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志,2007,19(1):78-79.
[3]WU CF,JIANG HH,ZENG DL,et al.Separation and drug resistance test of Haemphailus in our hospital from 2004~2005[J].Chinese of Microecology,2007,19(1):78-79.Chinese
[4]陳民均,謝秀麗,張秀珍,等.北京上海廣州地區(qū)的流感嗜血桿菌分離及藥敏試驗(yàn)[J].中華傳染病雜志,1998,16(4):46-47.
[4]CHEN MJ,XIE XL,ZHANG XZ,et al.Separtation and drug resistance test of Heamophilus influenzae in the aera of Beijing,shanghai and Guangzhou [J].Chinese of Infectious Diseases,1998,16(4):46-47.Chinese
[5]盧明芹,李 驥,王曉東,等.醫(yī)院獲得性副流感嗜血桿菌呼吸道感染臨床與耐藥性分析[J].中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志,2006,18(4):312-314.
[5]LU MQ,LI JI,WANG XD,et al.Clinical and drug resietance study of Heamophilus influenzae in respiratory tract infection acquired from hospital[J].Chinese of Microecology,2006,18(4):312-314.Chinese
[6]方曉霞,陳維媚,王文天,等.我院嗜血桿菌分離率和耐藥性監(jiān)測(cè)[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2002,12(12):892-894.
[6]FANG XX,CHEN WM,WANG WT,et al.Spearation rate and drug resistance monitor of Heamophilus in our hospital[J].Chinese of Nosocomiology,2002,12(12):892-894.Chinese