吳玉臣,郭 爽,楊國宇

(1.鄭州牧業(yè)工程高等?？茖W(xué)校動(dòng)物醫(yī)學(xué)系,河南鄭州450011;2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院,河南鄭州450002)

隨著社會(huì)的發(fā)展和人們生活水平的提高,越來越多的人關(guān)注食品衛(wèi)生與安全。這也要求畜牧業(yè)在發(fā)展的過程中必須少加或不加抗生素,以減少其殘留對人的危害。許多學(xué)者認(rèn)為中草藥可以提高機(jī)體的抵抗力,抵抗多種細(xì)菌和病毒的攻擊?，F(xiàn)已證實(shí)某些中草藥的療效與其抗氧化作用密切相關(guān)。已發(fā)現(xiàn)的植物藥抗氧化成分有黃酮類、皂苷類、多糖類、有機(jī)酸類、萜烯等,這些物質(zhì)通過清除人體內(nèi)自由基,還原氧化物質(zhì),從而達(dá)到保護(hù)機(jī)體的作用。

本試驗(yàn)中藥選擇以清熱解毒、抗菌消炎、扶正祛邪、促進(jìn)機(jī)體免疫功能為原則,分別選用炙黃芪、當(dāng)歸 、何首烏 、淫羊藿 、扁豆 、黃柏 、穿心蓮 、附子 、炙甘草,水煎熬后飲水,研究其對艾維茵肉雞抗氧化功能的影響。

1 材料與方法

1.1 中藥的制備 中藥配方：炙黃芪200 g、當(dāng)歸160 g、何首烏120 g、淫羊藿120 g、扁豆100 g、黃柏20 g、穿心蓮 20 g、附子 160 g、炙甘草100 g。將上述配方按常規(guī)煎熬方法用水分兩次熬成1 000mL藥液,置于4℃冰箱中備用。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與分組 選1日齡艾維茵肉雞400羽,由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)種雞場提供。將試驗(yàn)雞隨機(jī)分為4組,每組 25羽,試驗(yàn)組三組,對照組一組,每組設(shè)4個(gè)重復(fù)。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物的處理 試驗(yàn)肉雞的飼養(yǎng)按正常標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行飼喂,自由飲水。試驗(yàn)組肉雞的飲水中分別加入3個(gè)不同劑量的復(fù)方中藥液,分別為高劑量組(1 500 mL/t),中劑量組(1 000 mL/t),低劑量組(500mL/t);對照組正常飲水。各組在1、10、20、30 d和40 d無菌采血,分離血漿,冷藏保存。

1.4 測定指標(biāo)

1.4.1 總SOD活性檢測 總SOD活性檢測采用總SOD活性檢測試劑盒(NBT法)進(jìn)行測定。試劑盒購自碧云天生物技術(shù)研究所。測定樣品來自于1.3所采的無菌血。樣品測定參考表1.使用96孔設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔。按表1依次加入待測樣品和其他各種溶液。加入酶工作液后充分混勻。37℃孵育20 min～30 min,在 560 nm 測定其吸光度。樣品中總SOD活性的計(jì)算公式如下：

待測樣品中SOD活力(units)=抑制百分率/(1-抑制百分率)×稀釋倍數(shù)。(當(dāng)抑制率為50%時(shí)SOD酶活力單位為1 units)。抑制百分率=[(A空白對照1-A空白對照2)-(A樣品 -A空白對照3)]/(A空白對照1-A空白對照2)×100%。如果計(jì)算出的抑制百分率大于70%或小于30%,則需要把該樣品重新測定。結(jié)果偏高,稀釋樣品,結(jié)果偏低,則需要重新準(zhǔn)備濃度較高的待測樣品。

表1 樣品測定操作方法

1.4.2 總抗氧化能力檢測 總抗氧化能力檢測用試劑盒(FRAP法)進(jìn)行檢測,試劑盒購自碧云天生物技術(shù)研究所。測定樣品來自于1.3所采的無菌血。樣品測定步驟如下：(1)96孔板的每個(gè)檢測孔中加200μL FRAP工作液。(2)空白對照孔中加入5μL蒸餾水;標(biāo)準(zhǔn)曲線孔加入5μL各種濃度的FeSO4標(biāo)準(zhǔn)溶液;樣品檢測孔內(nèi)加入5μL各種樣品,輕輕混勻。(3)37℃孵育3～5 min后在 585～605 nm范圍內(nèi)測定其OD值。(4)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品的總抗氧化能力。如果測定出的OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線外,則需把樣品適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。(5)總抗氧化能力表示方式：對于FRAP法,總抗氧化能力用FeSO4標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度來表示。例如某血漿樣品測定獲得的吸光度和1mmol/L FeSO4標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度相同,則該血漿樣品的總抗氧化能力為1mmol/L。

2 結(jié)果

2.1 抗氧化能力測定

2.1.1 用總SOD活性檢測試劑盒(NBT法)檢測樣品中的SOD活性值,結(jié)果見表2。

由表2可以看出,試驗(yàn)雞10 d時(shí),對照組與試驗(yàn)各組SOD活性值差異顯著(P＜0.05),各試驗(yàn)組間差異不顯著(P＞0.05);20、30、40 d時(shí)對照組與試驗(yàn)組間SOD活性值差異極顯著(P＜0.01),各試驗(yàn)組間差異不顯著(P＞0.05)。

2.1.2 用總抗氧化能力檢測試劑盒(FRAP法)測定的血液中總抗氧化能力值,結(jié)果見表3。

表2 復(fù)方中藥對血清中SOD活性值的影響 (units)

表中同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)字母相同者表示差異不顯著(P＞0.05),字母相鄰者表示差異顯著(P＜0.05),字母相同者表示差異極顯著(P＜0.01)。下表同

表3 復(fù)方中藥對血液總抗氧化能力的影響 (mmol/L)

由表3可以看出,10 d、20 d試驗(yàn)肉雞,其血液中總抗氧化能力對照組顯著低于低劑量組(P＜0.05),極顯著低于中劑量和低劑量組(P＜0.01),中劑量組和高劑量組間差異不顯著(P＞0.05);30 d、40 d試驗(yàn)肉雞其血液中總抗氧化能力極顯著低于各試驗(yàn)組(P＜0.01),各試驗(yàn)組間差異不顯著(P＞0.05)。

3 分析與討論

機(jī)體抗氧化能力的強(qiáng)弱表明了機(jī)體的健康狀態(tài),抗氧化能力越強(qiáng),機(jī)體越健康。本研究表明,飲水中添加復(fù)方中藥后,可顯著或極顯著提高肉仔雞的SOD活性,顯著或極顯著提高肉仔雞血液中的總抗氧化能力,從而說明飲用復(fù)方中藥后可顯著或極顯著提高機(jī)體肉仔雞的抗氧化能力,提高機(jī)體的抗病能力。鄒永新等(2009)以蜂膠、黃芪、扶芳藤等按一定工藝研制成復(fù)合中藥佐劑制成疫苗接種鴿后檢測SOD活性,結(jié)果表明,復(fù)合中藥免疫佐劑試驗(yàn)鴿的SOD活性均顯著高于不添加任何制劑的對照鴿[1]。吳青等(2006)研究表明,淫羊藿等15種中藥用DPPH法和FRAP法檢測,不同中草藥顯示出不同的抗氧化活性。其中淫羊藿具有較強(qiáng)的抗氧化活性[2]。陳會(huì)良等(2006)研究表明,在飼料日糧中添加1%杜仲葉、紫蘇葉、黃芪、淫羊藿復(fù)合物,試驗(yàn)組血清SOD活性顯著高于對照組[3]。武晉孝等(2002)研究表明,淫羊藿、首烏等中藥可顯著提高血清中SOD活性[4]。以上研究所用組方中藥和本研究所用組方中藥都有重復(fù),研究結(jié)果也和本研究結(jié)果相似,說明某些中藥確能提高機(jī)體抗氧化能力。

4 結(jié)語

自擬復(fù)方中藥可顯著提高機(jī)體的抗氧化能力,提高機(jī)體的抗病能力。中劑量(1 000mL/t)為最適合添加量。

[1] 鄒永新,肖智遠(yuǎn),李利娜,等.復(fù)合中藥佐劑的制備及其對鴿SOD活性影響[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2009(2)：79-81.

[2] 吳青,黃娟,羅蘭欣.15種中草藥提取物抗氧化活性的研究[J].中國食品學(xué)報(bào),2006,6(1)：284-289.

[3] 陳會(huì)良,蔡漢喬.草藥添加劑對肉雞抗氧化能力和紅細(xì)胞免疫功能的影響[J].中國飼料,2006(3)：17-18.

[4] 武晉孝,李淑琴,王俊東,等.不同中藥組方對肉雞抗氧化作用的影響[J].中國畜牧雜志,2002,38(5)：24-25.