李昊宇，王艷紅，韓立君

(吉林鐵路疾病預(yù)防控制所，吉林 吉林 132001)

2006年12月29日，我國標(biāo)準(zhǔn)委和衛(wèi)生部聯(lián)合發(fā)布了經(jīng)過修訂的 GB5749—2006《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》和 GB/T5750—2006《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》，并自2007年7月1日起實(shí)施，這也是從1985年來對原標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行的首次修訂。在長期工作實(shí)踐中我們發(fā)現(xiàn)延長初發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間可以增加總大腸菌群檢出率，也有其他報(bào)道證實(shí)我們的觀點(diǎn)［1－2］。但新標(biāo)準(zhǔn)對總大腸菌群培養(yǎng)時(shí)間未作調(diào)整，而隨后發(fā)布食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)初發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間已由24 h延長為48 h(GB/T4789.3—2008)。為了解延長初發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間對生活飲用水檢出率的影響，筆者對生活飲用水樣本初發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行了24 h和48 h對比，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品均來源于吉林鐵路疾控所微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)樣品，共計(jì)326件。

1.1.2 培養(yǎng)基:乳糖蛋白胨培養(yǎng)基，伊紅美藍(lán)(EMB)瓊脂平板，均為北京路橋技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，有效期內(nèi)使用。

1.2 試驗(yàn)方法

依據(jù)生活飲用水國標(biāo)中總大腸菌群多管發(fā)酵法(GB5750.12—2006)進(jìn)行，將初發(fā)酵培養(yǎng)24 h未產(chǎn)酸產(chǎn)氣的陰性管繼續(xù)培養(yǎng)至48 h，觀察結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

采用四表格χ2檢驗(yàn)。

1.4 評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

經(jīng)乳糖發(fā)酵試驗(yàn)、分離培養(yǎng)、證實(shí)試驗(yàn)有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，即證實(shí)有總大腸菌群存在，為陽性結(jié)果。

2 結(jié)果

對326份生活飲用水中做如下分類:水廠出廠水列入集中式供水，末梢水及列車自備水箱供水列為二次供水，自備井列為分散式供水。在對全部樣品進(jìn)行檢測中，將初發(fā)酵培養(yǎng)24 h未產(chǎn)酸產(chǎn)氣的陰性管繼續(xù)培養(yǎng)至48 h，經(jīng)平板分離及復(fù)發(fā)酵證實(shí)有16份樣品出現(xiàn)遲緩發(fā)酵現(xiàn)象，使總大腸菌群陽性率有所提高，延長初發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間引起的生活飲用水中總大腸菌群增加情況見表1。

表1 初發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間與生活飲用水中總大腸菌群檢出情況

由表1可見，二次供水樣本在兩個(gè)不同發(fā)酵時(shí)間的總大腸菌群陽性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.95，P＜0.05)，其他兩類樣本總大腸菌群超標(biāo)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示三類樣本通過延長初發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間總大腸菌群檢出率均有不同程度提高，比較幾類樣本陽性率增加情況依次為二次供水、其次為分散式供水、集中式供水最低?？偞竽c菌群出現(xiàn)遲緩發(fā)酵現(xiàn)象是一個(gè)很常見的現(xiàn)象，造成原因有很多。我們分析主要是水受到不同環(huán)境和不同理化因素的影響，最常見如低營養(yǎng)、消毒劑的殘留、東北寒冷的溫度等等。在試驗(yàn)中我們經(jīng)常遇到的一種情況是培養(yǎng)24 h總大腸菌群產(chǎn)生的氣泡非常小，用肉眼幾乎看不到，即使是有經(jīng)驗(yàn)的技師也容易漏檢、或者過幾個(gè)小時(shí)后氣泡可見，但這時(shí)已超過報(bào)告時(shí)限，很難做出陽性報(bào)告。在本次實(shí)驗(yàn)中我們也發(fā)現(xiàn)通過延長初發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間陽性樣本發(fā)酵管數(shù)有不同程度增加，而超過48 h不管是24 h培養(yǎng)陽性管數(shù)還是遲緩發(fā)酵陽性管數(shù)基本上都不增加了，這說明通過延長初發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間提高總大腸菌群檢出率是一個(gè)更科學(xué)更客觀的方法。

總大腸菌群不是指單一一種細(xì)菌，而是指一群在37℃培養(yǎng)24 h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，主要包括4個(gè)菌屬:埃希氏菌屬、檸檬酸菌屬、克雷伯菌屬和腸桿菌屬。作為糞便污染指示菌，大腸埃希氏菌檢出意義最大，其次為耐熱大腸菌群，而總大腸菌群的意義要稍遜一些。GB/T 5750.12－2006《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》中規(guī)定如果在水中檢出總大腸菌群，則應(yīng)再檢驗(yàn)大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群以證明水體是否已受到糞便污染，如果水樣中沒有檢出總大腸菌群就不必檢驗(yàn)大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群［3］。這就意味著總大腸菌群是否檢出決定著大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群檢測是否繼續(xù)做下去，也就是說總大腸菌群陽性率有可能直接影響大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群檢出率。因此筆者認(rèn)為通過延長初發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間提高總大腸菌群檢出率就更有必要了。

［1］ 李奇英.食品監(jiān)測中如何提高大腸菌群檢出率的探討［J］.食品工業(yè)科技，1998，19(1):70.

［2］ 劉國輝，劉志堅(jiān)，謝麗芬.對大腸菌群值認(rèn)定的探討［J］.中國國境衛(wèi)生檢疫雜志，2001，24(1):10－13.

［3］ 金銀龍.GB5749－2006《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》釋義［M］.北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007.42.