曹淑艷, 柴偉, 牛廣華, 宮莉

腎病綜合征(簡稱腎病)為一種不同于腎小球腎炎的原發(fā)性腎小球疾病,多發(fā)于學(xué)齡前兒童,也可見于青年。臨床上以大量蛋白尿、嚴(yán)重水腫、低蛋白血癥和高脂血癥為特征。病程長,一般無血尿、高血壓及腎功能不全[1]。一直以來,對(duì)于尿蛋白定性檢測(cè)陽性的腎病患兒,要想明確診斷腎臟損傷的部位,通常采取的檢查方法是腎活檢,但腎活檢是有創(chuàng)性診斷技術(shù),患者與家屬可能心存顧慮,而且大部分中小醫(yī)院無條件開展此項(xiàng)技術(shù)。而尿液成分的分析,尤其是其尿蛋白電泳蛋白成分分析,已成為早期腎臟疾病診斷的方法[2]。筆者應(yīng)用十二烷基硫酸鈉-瓊脂糖凝膠(SDS-AGE)技術(shù)結(jié)合血β2-MG測(cè)定對(duì)腎小球損傷患兒進(jìn)行蛋白尿的分析,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 將2009-01/12遼寧中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科收治50例初治腎病住院患兒作為觀察組,其中男31例,女29例;年齡2～14歲,平均(5.20±4.50)歲。另隨機(jī)抽取沈陽市兒童醫(yī)院20例健康體檢兒童作為對(duì)照組,其中男12例,女8例;年齡3～14歲,平均(5.25±3.82)歲。觀察組和對(duì)照組兒童年齡和性別構(gòu)成比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照《內(nèi)科學(xué)》[1]中腎病診斷標(biāo)準(zhǔn)。1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)符合腎病的診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)年齡2～14歲;(3)監(jiān)護(hù)人知情同意。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) 合并心、腦、肝和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病者。

1.5 檢測(cè)方法

1.5.1 儀器 尿蛋白電泳采用HYDRASYS全自動(dòng)電泳儀(法國sebia);血β2-MG用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)(日立7600-020)。

1.5.2 試劑 HYDRASYS全自動(dòng)電泳儀配套試劑盒(Hydragel proteinurie Kit);β2-MG免疫透射比濁法測(cè)定試劑盒(浙江威特曼生物科技有限公司)。

1.6 方法 采集新鮮晨尿10m L,如尿蛋白濃度>2 g/L,用生理鹽水稀釋至2 g/L。SDS-AGE法測(cè)定尿蛋白電泳按說明書進(jìn)行,取200μL SDS-嗅酚藍(lán)稀釋液加入80μL尿液,混勻。取5μL加入凝膠孔中,擴(kuò)散30m in于電泳儀上電泳,取出凝膠片烘干、染色、脫色、固定、掃描、報(bào)告結(jié)果。免疫透射比濁法測(cè)定血β2-MG。

1.7 結(jié)果判定 尿蛋白電泳 經(jīng)SDS-AGE電泳后條帶圖出現(xiàn)4種:(l)生理性蛋白尿,其圖形為少量淡染的單一的白蛋白帶,其他的區(qū)帶均未出現(xiàn);(2)小分子蛋白尿(腎小管性),其圖形為除白蛋白區(qū)帶外,在凝膠片陽極與白蛋白區(qū)帶之間出現(xiàn)其他的蛋白區(qū)帶,分子量<70 kDα;(3)大分子蛋白尿(腎小球性),其圖形為除白蛋白區(qū)帶,在加樣點(diǎn)與白蛋白之間出現(xiàn)其他蛋白區(qū)帶,分子量≥70 kDα;(4)混合性蛋白尿,其蛋白特征為腎小管及腎小球的蛋白同時(shí)并存。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料以 x±s表示,組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組尿蛋白電泳檢測(cè)結(jié)果 用干化學(xué)試紙帶方法檢測(cè)20例健康兒童尿蛋白定性,18例為陰性,SDS-AGE法測(cè)定尿蛋白電泳無任何區(qū)帶顯示,2例蛋白定性試驗(yàn)陽性,尿蛋白電泳圖形為可見少量白蛋白淡染區(qū)帶,對(duì)照組尿蛋白電泳測(cè)定未出現(xiàn)球性蛋白和管性蛋白。

2.2 觀察組尿蛋白電泳檢測(cè)結(jié)果 用干化學(xué)試紙帶方法檢測(cè)對(duì)50例小兒腎小球損傷組患兒做尿蛋白定性,分別為+～+++,SDS-AGE法測(cè)定尿蛋白電泳,36例出現(xiàn)球性蛋白占72%,14例未出現(xiàn)球性蛋白占28%。

2.3 兩組血β2-MG檢測(cè)結(jié)果 觀察組血β2-M(3.24±1.51)mg/L,對(duì)照組(2.10±0.65)mg/L,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.4 觀察組尿蛋白電泳與血β2-MG檢測(cè)結(jié)果 見表1。

表1 觀察組尿蛋白電泳與血β2-MG檢測(cè)結(jié)果

表1結(jié)果說明,兩種檢驗(yàn)方法中尿蛋白電泳出現(xiàn)球性蛋白區(qū)帶和血β2-M增高可以反映腎小球損傷。

3 討論

SDS-AGE尿蛋白電泳可區(qū)分尿中不同蛋白的組分[1,3]。蛋白質(zhì)在普通聚丙烯酰胺凝膠中的電泳速度取決于蛋白質(zhì)分子的大小、分子形狀和所帶電荷的多少。SDS(十二烷基磺酸鈉)是一種去污劑,可使蛋白質(zhì)變性并解離成亞基。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)樣品中加入SDS后,SDS與蛋白質(zhì)分子結(jié)合,使蛋白質(zhì)分子帶上大量的強(qiáng)負(fù)電荷,并且使蛋白質(zhì)分子的形狀都變成短棒狀,從而消除了蛋白質(zhì)分子之間原有的帶電荷量和分子形狀的差異。這樣電泳的速度只取決于蛋白質(zhì)分子量的大小,依據(jù)分子量不同可分為低分子、中分子、和高分子3組蛋白質(zhì)。通常蛋白尿分為腎小球型、腎小管型、混合型、生理型、溢出型蛋白尿。尿液成分改變通常是腎臟疾病,尤其是腎小球病變最早的臨床表現(xiàn)[3,4]。高分子型蛋白尿的出現(xiàn)常被認(rèn)為是腎小球存在病變[5]。本文20例對(duì)照組中18例尿蛋白電泳無任何區(qū)帶,說明用干化學(xué)試紙帶方法檢測(cè)尿蛋白陰性采用SDS-AGE法測(cè)定尿蛋白電泳方法不被檢出,而2例少量白蛋白淡染區(qū)帶,為生理性蛋白尿。50例腎小球損傷患兒尿蛋白電泳,36例出現(xiàn)球性蛋白,14例未出現(xiàn)球性蛋白,有可能是因?yàn)槟I小球損傷比較輕,腎臟排出少量的白蛋白或排出微量腎小球性蛋白而未被檢出。

β2-M 是由99個(gè)氨基酸構(gòu)成的多肽,不含糖基。分子量小,通過腎小球?yàn)V過后在近曲小管幾乎全部被重吸收,僅微量從尿中排出。血β2-M增高可反映腎小球?yàn)V過功能受損[6]正常人體內(nèi)β2-M含量是恒定的。有文獻(xiàn)報(bào)道檢測(cè)血中β2-M水平是評(píng)價(jià)腎小球損傷的敏感指標(biāo)[7]。50例腎小球損傷患兒血β2-M檢測(cè)水平都顯著高于對(duì)照組(P<0.05),可見當(dāng)腎小球損傷時(shí),血β2-M 濾出率減少,故血β2-M水平增高。但血β2-M受許多全身性疾病如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、白血病等影響β2-M 的產(chǎn)生增加,此時(shí)并不反映腎小球的損害[8]。

陳慶海等[9]研究腎病理活檢診斷與SDS-AGE尿蛋白電泳結(jié)果比較,總體符合率為94.4%?？梢娔虻鞍纂娪竞脱?-M兩種指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)能提高腎小球損害檢出率,對(duì)患兒身體損傷較小,且取材方便,報(bào)告快速準(zhǔn)確,可作為腎小球損傷診斷的特異性的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。

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