朱玉峰，王元占，楊培梁，弓 莉，吳湘慧，曾俊嶺，劉謀榮

(南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院實驗動物研究中心，廣東 廣州 510515)

1 實驗動物安樂死的必要性

1.1 對動物施行安樂死是保護(hù)動物的需要

動物實驗是揭示生命現(xiàn)象的本質(zhì)和規(guī)律、發(fā)展科學(xué)技術(shù)必不可少的方法和手段。但是在動物實驗過程中，不可避免地會對動物造成痛苦與傷害，有些傷害是實驗預(yù)期的、可控制的，而有些傷害是實驗不可預(yù)期的，或在目前階段通過人為手段不可控制的，會對動物造成巨大的痛苦。依據(jù)動物福利和動物保護(hù)的原則，實驗者應(yīng)在適當(dāng)?shù)臅r機(jī)采取適當(dāng)?shù)姆椒▽游锸┬邪矘匪?，即仁慈終點，確保把動物的痛苦降到最低。

1.2 對動物施行安樂死是獲得準(zhǔn)確實驗數(shù)據(jù)的需要

當(dāng)動物持續(xù)處于不適、痛苦等應(yīng)激狀態(tài)時，動物的病理、生理、心理、行為等都會發(fā)生較大的改變，在這種狀態(tài)下得到的動物實驗數(shù)據(jù)是不可信的。

另外，動物死亡后，其組織會自體溶解或被籠內(nèi)其它同類動物啃食，這樣實驗者就采集不到理想的組織標(biāo)本。所以應(yīng)在動物瀕死前對動物施行安樂死，確保得到理想的組織標(biāo)本和實驗數(shù)據(jù)。

1.3 對動物施行安樂死是節(jié)約成本的需要

有些動物實驗并未給動物帶來較大的傷害與痛苦，但也需要對動物施行安樂死，如因?qū)嶒炘O(shè)計錯誤或其他原因造成的實驗中途失敗而淘汰的動物、實驗結(jié)束后的動物、轉(zhuǎn)基因動物中的陰性動物或性別過剩動物。［1］繼續(xù)飼養(yǎng)這些動物已沒實際意義，在這種情況下，應(yīng)對動物施行安樂死。

2 把握好動物安樂死的時機(jī)

2.1 根據(jù)生理、生化指標(biāo)選擇動物安樂死時機(jī)

有些動物實驗主要基于分子和細(xì)胞水平研究某些疾病，而對疾病的臨床癥狀并不關(guān)心。動物生理、生化指標(biāo)的改變往往在動物沒出現(xiàn)臨床癥狀之前就體現(xiàn)出來，而動物在出現(xiàn)臨床癥狀前，往往是沒有什么痛苦和不適的。如果在已達(dá)到實驗?zāi)康牡那疤嵯?，在動物出現(xiàn)臨床癥狀之前就對動物施行安樂死，則最能體現(xiàn)動物實驗的福利原則。如白血病模型，在動物出現(xiàn)臨床癥狀——白細(xì)胞計數(shù)已經(jīng)升高很多時;［2］在一些毒理實驗中，動物的某些血清值在其發(fā)病前已明顯改變時。［3］所以，根據(jù)動物的生理、生化指標(biāo)對動物施行安樂死不僅可避免或減少給實驗動物帶來痛苦，還有助于實驗者取得完整的動物標(biāo)本和理想的實驗數(shù)據(jù)。

2.2 根據(jù)動物的面部表情和行為選擇安樂死的時機(jī)

面部表情和身體姿勢代表動物的不同精神狀態(tài)，［4］這對評價是否對動物實施安樂死非常有用。一般而言，若出現(xiàn)下列狀況說明動物非常痛苦，需要對動物施行安樂死:動物體重下降、消瘦、成長期動物未增重，無法有效控制的疼痛，過度的腫瘤增長或腹水產(chǎn)生，持續(xù)性的自殘行為，疾病造成的全身性脫毛，因?qū)嶒炓蛩責(zé)o法治療的長期下痢，嚴(yán)重呼吸道感染，持續(xù)性的倦怠伴隨粗糙的皮毛，拱背，腹圍擴(kuò)大，無法行走，嚴(yán)重貧血、黃疸，異常的中樞神經(jīng)反應(yīng)，無法控制的出血現(xiàn)象，排尿異常，影響進(jìn)食飲水的病癥，傳染性疾病末期，嚴(yán)重低溫，明顯的功能損傷，動物遭受長期窘迫時的行為及生理現(xiàn)象等。

2.3 獸醫(yī)、實驗人員和倫理審查人員共同決定動物安樂死時機(jī)

對實驗動物施行安樂死不僅要考慮動物的身體狀況、動物福利，而且要考慮實驗的結(jié)果。有的實驗雖然給動物帶來了巨大的痛苦與傷害，但這是達(dá)到實驗?zāi)康乃匦璧?，所以對動物施行安樂死需要獸醫(yī)師、實驗技術(shù)人員和倫理委員會成員進(jìn)行溝通與討論，共同確定動物安樂死的最佳時機(jī)。

3 如何選擇實驗動物的安樂死方法

3.1 安樂死技術(shù)(方法)選擇的基本要求

對動物施行安樂死的技術(shù)(方法)有多種，不管采取什么方法都必須考慮以下幾個方面的因素:［5］①導(dǎo)致感覺喪失和不引起動物疼痛、悲傷、焦慮死亡的效力;②導(dǎo)致意識喪失所需要的時間;③可靠性;④人員的安全性;⑤不可逆性;⑥與目的相適應(yīng)的可兼容性;⑦對觀察者和操作者情緒的影響;⑧進(jìn)一步評價、檢查及使用機(jī)體組織的兼容性;⑨藥物的可用性和人員濫用的可能性;⑩種類、年齡、健康狀態(tài)的兼容性;○11保持設(shè)備處于正常狀態(tài)的效力。

3.2 對實驗動物施行安樂死的原理和常用方法

對動物施行安樂死的技術(shù)方法原理主要有3種:一是直接或間接缺氧，如二氧化碳、一氧化碳和氮氣吸入法;二是生命功能的神經(jīng)元受到抑制，如過量麻醉法，包括吸入性麻醉劑和非吸入性麻醉劑;三是大腦活動或生命功能神經(jīng)元的直接破壞，如物理方法，包括頸部脫臼、斷頭、電擊、放血等。

3.3 選擇正確的動物安樂死方法

3.3.1 根據(jù)動物的品種選擇安樂死方法。

不同品種的動物，其體型大小，溫馴度，對疼痛、窘迫、疾病的感受性以及保定方法有很大的差異，所以針對不同品種的動物應(yīng)選擇不同的安樂死方法，如對嚙齒類動物(大、小鼠、兔等)經(jīng)常采用二氧化碳法安樂死，而對狗、豬、馬等大型動物安樂死很少采用二氧化碳法。對于體重低于200克的嚙齒類動物、禽類以及體重低于1公斤的仔兔可采用頸椎脫臼法，而對狗、豬、馬等大型動物則禁止使用。［6］

3.3.2 根據(jù)動物的年齡選擇不同的安樂死方法。

二氧化碳法對于成年嚙齒類動物而言是既經(jīng)濟(jì)又高效的安樂死方法。但新生動物由于適應(yīng)了在母體子宮內(nèi)的缺氧狀態(tài)，對缺氧有較強(qiáng)的耐受性，［7］所以一般不選擇二氧化碳法對新生動物施行安樂死，而經(jīng)常選擇頸部脫臼法，因為新生動物的神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育還不是十分完全，對疼痛的敏感性不如成年動物高。

3.3.3 根據(jù)動物的數(shù)量的多少選擇安樂死方法。

對同一種動物可以采用不同的安樂死方法，但動物的數(shù)量不同，效率往往不同。如對少數(shù)幾只大、小鼠實施安樂死，采用過量麻醉法或頸部脫臼法比較省時省力，而采用二氧化碳法不僅需要特定的設(shè)備，而且費時費力;相反，如果要對幾十只甚至幾百只動物同時施行安樂死，采用二氧化碳法比較省時省力，如果采用過量麻醉法或頸部脫臼法，則相對費錢、費時、費力。

3.3.4 根據(jù)動物的健康狀況選擇安樂死方法。

同種動物在不同的身體狀態(tài)下應(yīng)選擇不同的安樂死方法，如對有外傷或剛做過手術(shù)的動物施行安樂死，如果采用非吸入性藥物法或物理法，抓取和保定動物本身就會使動物產(chǎn)生巨大的痛苦，但如果采取吸入性藥物法，可使動物在保持原有姿勢的情況下安靜地死去。相反，對呼吸道有損傷的動物施行安樂死，如果采用吸入性藥物法，對動物的呼吸道黏膜刺激較大，［8］而采用非吸入性藥物法或物理法能最大限度地減少動物的痛苦。

3.3.5 根據(jù)實驗人員的技術(shù)水平選擇安樂死方法。

不同的動物安樂死方法需要不同的技術(shù)方法，有的比較簡單，有的比較復(fù)雜。實驗人員應(yīng)在保證動物安樂死效果的前提下選擇自己力所能及的方法。如非吸入性藥物靜脈注射法往往要比腹腔注射法或肌肉注射法好，但大、小鼠的靜脈穿刺對許多實驗者來說比較困難，對這些實驗者而言，大、小鼠安樂死最好采用吸入性藥物法或物理法，或是選擇肌注或腹腔注射過量麻醉劑法。

3.3.6 根據(jù)實驗需要選擇動物安樂死方法。

不同的動物的安樂死方法對動物死亡后的組織標(biāo)本的影響有很大的區(qū)別，如采用缺氧法對動物施行安樂死容易引起肺栓塞或肺水腫，組織由于缺氧也會發(fā)生一些病理學(xué)改變，如酸中毒，這些改變必然會影響接下來的生物化學(xué)、組織學(xué)及電鏡的分析結(jié)果。另外，藥物麻醉法或物理法安樂死也可能對某些實驗結(jié)果有一定的影響。所以在選擇動物安樂死的時候一定要考慮該方法對實驗結(jié)果的影響。

3.4 加強(qiáng)對實驗人員的培訓(xùn)

3.4.1 加強(qiáng)實驗人員的倫理道德與法規(guī)培訓(xùn)。

實驗者的動物倫理意識往往影響其在實際動物實驗中的行為，所以應(yīng)對實驗人員進(jìn)行定期的科普和倫理培訓(xùn)，使其樹立起關(guān)愛動物、保護(hù)動物、維護(hù)動物福利的理念，實驗者才能在實驗中做到對動物有愛心、有耐心、有責(zé)任心。只有這樣，實驗者才能在動物安樂死過程中做到使動物盡量減少痛苦。法律法規(guī)是約束實驗者行業(yè)的重要手段，近年來我國有關(guān)部門及部分省份出臺了一系列有關(guān)動物保護(hù)的法規(guī)，如科技部《關(guān)于善待實驗動物的指導(dǎo)性意見》、《廣東省實驗動物管理條例》等。這些法律法規(guī)都規(guī)定要善待動物，不允許虐待動物，在不影響實驗結(jié)果判定的情況下，應(yīng)選擇“仁慈終點”，避免延長動物承受痛苦的時間。處死實驗動物時，須按照人道主義原則實施安死術(shù)。法律法規(guī)還對違反規(guī)定的行為作出了明確的處罰規(guī)定，所以加強(qiáng)動物保護(hù)法規(guī)的學(xué)習(xí)，對實驗者有很好的警示作用。

3.4.2 加強(qiáng)對實驗人員動物安樂死相關(guān)知識的培訓(xùn)。

對實驗動物施行安樂死并不是簡單的使動物死亡，而會涉及很多內(nèi)容，需要實驗者了解各種安樂死方法的作用機(jī)制，掌握各種安樂死方法的技術(shù)要點，如二氧化碳法需要實驗者清楚二氧化碳的濃度、氣流的速度、安樂死箱的使用方法等;過量麻醉法需要掌握動物的抓取與保定、靜脈穿刺、麻醉劑的劑量等技術(shù)。另外實驗者還需具備判斷動物是否失去知覺或死亡的能力。實驗者只有通過不斷的學(xué)習(xí)與培訓(xùn)才能掌握這些知識和技能。

3.4.3 加強(qiáng)對實驗者的心理疏導(dǎo)與培訓(xùn)。

實驗者在動物的安樂死的過程中聽到動物痛苦的叫聲、看到動物瀕死時痛苦的表情，心靈上、道德上會受到巨大沖擊，有的實驗者甚至對長期相處的實驗動物有了較深的感情，當(dāng)看到它們瞬間失去生命時，會感到非常傷心，并且這種情緒會在實驗者中迅速傳播。所以在動物實驗之前就要加強(qiáng)對實驗者的心理培訓(xùn)，增強(qiáng)其心理素質(zhì)。動物安樂死后及時的對實驗者進(jìn)行心理疏導(dǎo)，讓其真正明白對動物施行安樂死是為了減輕動物痛苦，減輕其心理負(fù)擔(dān)。

3.5 加強(qiáng)動物實驗的倫理審查與現(xiàn)場監(jiān)督

動物實驗的倫理審查是維護(hù)實驗動物福利，規(guī)范動物實驗人員行為的重要手段。在動物實驗之前應(yīng)開展倫理學(xué)審查，倫理審查委員應(yīng)對動物實驗的目的與意義，實驗者的資質(zhì)與經(jīng)歷、仁慈終點的把握、安樂死方法的選擇、動物尸體的處理等是否符合要求進(jìn)行審查，對因?qū)嶒炐枰荒苓M(jìn)行安樂死的，要求實驗者給出充分的科學(xué)依據(jù)。倫理委員會對通過審批的研究項目，應(yīng)進(jìn)行定期追蹤訪問，以評價其執(zhí)行情況，對違反倫理學(xué)及動物福利的行為應(yīng)及時予以制止。

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