(河南省人民醫(yī)院，鄭州450003)

RCAS1是Sonoda等［1］在1996年新發(fā)現(xiàn)的一種 蛋白質(zhì)，在子宮癌、卵巢癌、乳腺癌等多種腫瘤組織中異常表達，并與腫瘤的分化、侵襲和惡性程度相關(guān)。Caspase家族的蛋白酶解級聯(lián)反應(yīng)控制著細胞凋亡的發(fā)生發(fā)展，是細胞凋亡的中心環(huán)節(jié)和執(zhí)行者。Caspase-8廣泛表達于各種成人組織，其中在血液淋巴細胞中表達尤為豐富［2］。研究發(fā)現(xiàn)，Caspase-8的低表達與人類多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及腫瘤的免疫逃逸有關(guān)［3］。但二者在胃癌組織中的表達情況尚未見報道。本研究采用免疫組化SP法檢測RCAS1、Caspase-8在胃腺癌組織中的表達，探討其表達與胃癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，為進一步尋求胃癌等惡性腫瘤的發(fā)生機制奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料 選取河南省人民醫(yī)院和鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2007年1～12月手術(shù)切除的胃腺癌組織46例，其中男26例，女20例，年齡33～81歲，患者術(shù)前均未接受化療和放療，均經(jīng)常規(guī)病理證實。另選取手術(shù)切緣經(jīng)病理證實為正常胃黏膜組織46例作為對照。全部標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，以備常規(guī)HE染色和免疫組化使用。

1.2 主要試劑 羊抗人RCAS1單克隆抗體由美國Zymed公司提供;兔抗人Caspase-8多克隆抗體由美國Scbt公司提供;免疫組化SP檢測試劑盒及DAB顯色試劑盒均由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 免疫組化 參照免疫組化SP試劑盒說明書進行操作。主要操作步驟為:5 μm石蠟連續(xù)切片，二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，10%蛋清封閉，滴加一抗(RCAS1抗體稀釋濃度為1∶200，Caspase-8多克隆抗體為即用型)，1%H2O2封閉內(nèi)源性過氧酶，滴加二抗及鏈霉親和素—過氧化物酶復(fù)合物，DAB-H2O2溶液顯色，蘇木素復(fù)染。每次實驗均以PBS代替一抗作陰性對照，以已知RCAS1、Caspase-8蛋白陽性表達的食管癌組織作陽性對照。

1.4 結(jié)果判斷 參照文獻［4］高倍鏡下隨機選取5個視野，按陽性細胞所占百分比及著色深淺進行結(jié)果判定。陽性細胞比例:≤10%為1分，11% ～50%為2分，＞50%為3分;按染色強弱:陰性為0分，淡黃色為1分，中度黃色為2分，棕黃色為3分。按照陽性細胞得分×染色強弱得分計總分，總分＜3為陰性、≥3為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件，陽性率之間的比較用χ2檢驗，兩變量之間關(guān)系用Spearman等級相關(guān)分析，以P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RCAS1、Caspase-8蛋白表達 RCAS1蛋白定位于胃腺癌癌細胞及正常胃黏膜上皮細胞質(zhì)或細胞膜，呈棕黃色。Caspase-8免疫組化染色陽性細胞定位于細胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒，顯色強時為棕褐色。陰性對照均無陽性信號顯示，陽性對照有明顯陽性信號顯示。正常胃黏膜組織及胃腺癌組織中RCAS1蛋白的陽性表達率分別為60.87%(28/46)和84.78%(39/46)(P＜0.05)。正常胃黏膜組織及胃腺癌組織中Caspase-8蛋白的陽性表達率分別為80.43%(37/46)和65.22%(30/46)(P＜0.05)。

2.2 RCAS1與Caspase-8表達的相關(guān)性分析RCAS1、Caspase-8蛋白在胃腺癌組織中的陽性表達率經(jīng)Spearman等級相關(guān)分析，呈明顯負相關(guān)(r=-0.298、P＜0.05)。

3 討論

RCAS1異常表達不但與一些惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，而且RCAS1陽性病例臨床預(yù)后較差，可作為臨床預(yù)后判斷指標(biāo)，尤其是浸潤性腫瘤［5，6］。本研究結(jié)果說明RCAS1蛋白低表達與胃腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。RCAS1在腫瘤組織中過表達可以抑制自然殺傷細胞和T、B細胞的生長，并介導(dǎo)其凋亡，因此RCAS1可能與腫瘤免疫逃避有關(guān)［1］。FAS系統(tǒng)是目前研究最清楚的介導(dǎo)細胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，F(xiàn)AS與其天然配體或相應(yīng)膜抗體結(jié)合，通過激活Caspase家族完成細胞凋亡信號傳遞，是細胞凋亡的主要途徑之一［5］。Caspase-8是死亡受體介導(dǎo)的凋亡途徑中關(guān)鍵的啟動子，主要以無活性的酶原形式存在于細胞中。有報道多種人類腫瘤在該區(qū)域雜合缺失，包括神經(jīng)母細胞瘤、肺癌、頭頸部癌、甲狀腺濾泡性癌等［2］。Caspase-8基因甲基化、基因突變及其他表達異常也與某些腫瘤、自身免疫性疾病有關(guān)。故從其結(jié)構(gòu)推測Caspase-8在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中可能起著重要作用［7，8］。本研究結(jié)果顯示，Caspase-8蛋白高表達與胃腺癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。RCAS1、Caspase-8蛋白在胃腺癌組織中的陽性表達率呈負相關(guān)，說明二者在胃癌等惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中存在某種聯(lián)系，但其機制有待進一步深入研究。

［1］Sonoda K，Nakashima M，Kaku T，et al.A novel tumor-associated antigen expressed in human uterine and ovarian carcinomas［J］.Cancer，1996，77(8):1501-1509.

［2］Chang HY，Yang X.Proteases for cell suicide:functions and regulation of caspases［J］.Microbiol Mol Biol Rev，2000，64(4):821-846.

［3］Algeciras-Schimnich A，Barnhart BC，Peter ME.Apoptosis-independent functions of killer caspases ［J］.Curr Opin Cell Biol，2002，14(6):721-726.

［4］王曉蘭，李曉莉，陳奎生.MMP-7與TIMP-1蛋白在食管鱗癌中的表達及其與腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移的關(guān)系［J］.醫(yī)藥論壇雜志，2009，30(8):1-6.

［5］Akashi T，Oimomi H，Nishiyama K，et al.Expression and diagnostic evaluation of the human tumor-associated antigen RCAS1 in pancreatic cancer［J］.Pancreas，2003，26(1):49-55.

［6］Izumi M，Nakanishi Y，Yoshino I，et al.Expression of tumor-associated antigen RCAS1 correlates significantly with poor prognosis in nonsmall cell lung carcinoma［J］.Cancer，2001，92(2):446-451.

［7］Stupack DG，Teitz T，Potter MD，et al.Potentiation of neuroblastoma metastasis by loss of caspase-8［J］.Nature，2006，439(7072):95-99.

［8］張曉峰，陳幕華，陳萍萍，等.食管癌組織中Caspase-8表達及臨床意義［J］.山東醫(yī)藥，2008，48(38):21-23.