官琳妹，蔡 鵬，汪 艷，于衛(wèi)健

(1. 大連市友誼醫(yī)院 檢驗(yàn)科，遼寧 大連 116001；2. 遼寧國(guó)際旅行衛(wèi)生保健中心 檢驗(yàn)科，遼寧 大連 116001；3. 大連市紅十字血液中心，遼寧 大連 116001)

人類白細(xì)胞抗原(HLA)，即人類主要組織相容性復(fù)合物(MHC)，是調(diào)控人體特異性免疫應(yīng)答和決定疾病易感性個(gè)體差異的主要基因系統(tǒng)[1]。尿毒癥是由各種原發(fā)或繼發(fā)的腎臟疾病所引起。研究顯示，成人慢性腎小球腎炎與HLA系統(tǒng)免疫機(jī)制強(qiáng)相關(guān)，HLA系統(tǒng)某些基因可能是中國(guó)人群易感慢性腎小球腎炎的風(fēng)險(xiǎn)因子[2-3]。本研究對(duì)大連市友誼醫(yī)院511例等待腎移植的的慢性腎小球腎炎尿毒癥患者HLA-DRB1基因分型與中國(guó)造血干細(xì)胞庫(kù)大連HLA實(shí)驗(yàn)室健康捐獻(xiàn)者的基因分型進(jìn)行對(duì)比分析，探討大連漢族慢性腎小球腎炎尿毒癥與HLA-DRB1等位基因的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

病例組：2003年9月-2009年5月在大連市友誼醫(yī)院等待腎移植的慢性腎小球腎炎尿毒癥患者511例，均為漢族。其中，男性332例，女性179例，年齡18～61歲，平均39歲。 對(duì)照組：中國(guó)造血干細(xì)胞庫(kù)大連HLA實(shí)驗(yàn)室健康捐獻(xiàn)者共9678例，男性5243例，女性4435例，年齡22～58歲，也均為漢族。

1.2 試劑和儀器設(shè)備

Taq酶(大連 Takapa公司)， ABDR ssp UniTray Kit (美國(guó)DYNAL公司)，QIAamp DNA Blood Mini kit (美國(guó) QIAGEN公司)，紫外透射分析儀 (上海天能科技有限公司)，ABI-9700PCR儀(美國(guó)ABI公司 )。

1.3 標(biāo)本采集

清晨空腹抽取4 mL靜脈血，枸櫞酸鈉抗凝后充分混勻。

1.4 DNA提取和擴(kuò)增

采用美國(guó) QIAGEN公司的QIAamp DNA Blood Mini kit試劑盒，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，提取DNA。

運(yùn)用序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)法，采用美國(guó)DYNAL公司ABDR ssp UniTray Kit分型試劑盒，每孔加入配制好的反應(yīng)體系10 μL，密封好后將微孔板放入ABI-9700PCR儀，按說(shuō)明書(shū)調(diào)整循環(huán)次數(shù)和溫度后，進(jìn)行擴(kuò)增。

1.5 電泳及成像

取擴(kuò)增產(chǎn)物加入2%的瓊脂糖凝膠孔中 ，以100 V電壓電泳5 min后，將凝膠放入紫外透射分析儀下觀察結(jié)果，記錄下特異性條帶對(duì)應(yīng)的號(hào)碼并拍照存入計(jì)算機(jī)，利用試劑盒提供的分析軟件進(jìn)行分析，即可獲得HLA-DRB1基因分型結(jié)果。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

選擇HLA的特異性計(jì)數(shù)作為計(jì)算指標(biāo)，計(jì)算基因頻率，利用SPSS 17.0 軟件用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。針對(duì)差異有顯著性意義的結(jié)果，通過(guò)描述統(tǒng)計(jì)中的交叉表分析，實(shí)現(xiàn)相對(duì)危險(xiǎn)指數(shù)RR的計(jì)算。

2 結(jié) 果

對(duì)511例慢性腎小球腎炎尿毒癥患者與健康人的基因分布頻率比較后發(fā)現(xiàn)：HLA-DRB1*04、HLA-DRB1*07、HLA-DRB1*12、和HLA-DRB1*16差異具有顯著性意義(P<0.05)，余者差異無(wú)顯著性意義。其中，病例組的HLA-DRB1*04、HLA-DRB1*07和 HLA-DRB1*12的基因頻率明顯高于對(duì)照組，而HLA-DRB1*16的基因頻率明顯低于對(duì)照組(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 511例慢性腎小球腎炎尿毒癥患者與健康人差異具有顯著性意義的HLA-DRB1分析比較

3 討 論

HLA 即MHC是位于第6號(hào)染色體短臂上的一個(gè)緊密連鎖基因群，相應(yīng)DNA片段長(zhǎng)度是3600 kb，是迄今為止人類基因組中最復(fù)雜的遺傳多態(tài)性和免疫多態(tài)性基因體系。至2010年5月已報(bào)道有4000多個(gè)等位基因，并且仍在不斷發(fā)現(xiàn)新的基因[4-5]。而且人們發(fā)現(xiàn)HLA具有明顯的種族、地域差異，是疾病易感性個(gè)體差異的主要基因系統(tǒng)。曾建業(yè)等[6]提出，在不同種族、地區(qū)、人群中HLA基因型的分布不同或HLA分子與環(huán)境因素復(fù)雜的相互作用產(chǎn)生了疾病的不同致病過(guò)程。

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外已有許多學(xué)者研究了各類疾病與HLA 的相關(guān)性[7-9]。HLA基因可以分為Ⅰ類(HLA-A、B、C),Ⅱ類(HLA-DR、DQ、DP)，Ⅲ類(C4A、C4B、C2、Bf)等補(bǔ)體成分。HLAⅠ類抗原在腎臟所有組織均表達(dá)，HLAⅡ類抗原僅在腎小管、腎小球、腎內(nèi)皮細(xì)胞等組織表達(dá)。目前，國(guó)內(nèi)外有許多關(guān)于HLA與腎臟疾病的關(guān)系的報(bào)道，但慢性腎小球腎炎尿毒癥與HLA-DRB1基因的相關(guān)性報(bào)道還不多見(jiàn)。本研究選取511例大連漢族慢性腎小球腎炎尿毒癥患者和健康人的Ⅱ類抗原中的HLA-DRB1基因分型進(jìn)行對(duì)比分析，探求其相關(guān)性。結(jié)果提示，大連漢族慢性腎小球腎炎尿毒癥患HLA-DRB1*04、HLA-DRB1*07和 HLA-DRB1*12的基因頻率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，說(shuō)明HLA-DRB1*04、HLA-DRB1*07和 HLA-DRB1*12可能是慢性腎小球腎炎尿毒癥的易感基因，HLA-DRB1*16的基因頻率明顯低于對(duì)照組(P<0.05) ，說(shuō)明HLA-DRB1*16可能是慢性腎小球腎炎尿毒癥保護(hù)基因。

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